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一株无血凝性兔出血症病毒的分离鉴定及其衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒(RHDV),命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性;但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成清晰的沉淀线;电镜观察可见30nm左右的病毒粒子。采用RT-PCR方法将Yaan-1株的衣壳蛋白VP60基因进行了克隆测序,序列分析表明VP60基因序列全长1740bp,编码579个氨基酸,测序结果提交GenBank(注册号为DQ069280),并与世界各国的常规RHDV分离株进行比较,结果表明核苷酸同源性为90.0%~98.0%,氨基酸同源性为94.1%~99.0%,氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区;同时对Yaan-1株的分子量、等电点、疏水性、跨膜区等分子结构特征进行了分析。本研究首次报道了无血凝性RHDV中国分离株,丰富了地方毒株资源,为明确我国地方株的分子流行病学,以及对VP60蛋白分子特征研究提供了新材料。 相似文献
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以pcDNA3.1-pIL-18为模板,采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18(IL-18)的成熟蛋白基因,通过KpnⅠ+SacⅠ双酶切及连接反应,构建了pET32c—pIL—18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中的基因片段连接正确。之后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、1.0mmol/L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解产物经SDS—PAGE分析,在分子质量约为33ku处出现了预期的目的蛋白。用8mol/L脲对表达产物变性,经Ni^2+NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。Western—blot分析证实,纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性。上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础。 相似文献
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芦柑是上杭县溪口乡主栽果树,投产面积达400hm2,害螨是柑橘上最主要的害虫之一.每年果农为防治害螨喷药少则10余次,多则20余次.化学农药的大量使用,杀伤大量天敌,导致害螨的抗药性不断增强,使害螨日趋猖獗,严重污染了生态环境,果实残留过量农药,削弱了产品的市场竞争力.2004年溪口乡首次引进2万袋捕食螨来控制柑桔害螨.现将结果报道如下: 相似文献
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屠宰检疫和肉品品质检验是两个不同的概念,其主管实施部门,以及它们的职责、权利在相关法律、法规中都有明确规定,但是社会上许多人,包括领导、新闻媒体、消费者等对这些问题的认识存在一定误区,常常将注水肉、公母猪肉、中毒肉等问题都统统归咎于动物检验部门。现就我们在学习和实践过程中一些粗浅的认识提出来,供大家商讨。1屠宰检疫和肉品品质检验的关系屠宰检疫是在屠宰加工过程中对动物的胴体、头蹄内脏等携带病原和病原微生物进行检验定性;肉品品质检验主要是对屠宰加工的动物产品在出厂前就其新鲜度、水分、规格、重量进行检查;两者… 相似文献
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猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18。将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。SDS-PAGE及W estern-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 ku,与预期大小相符。将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经N i-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。 相似文献