番鸭呼肠孤病毒YB株σC蛋白同源性分析及B细胞表位预测

为预测番鸭呼肠孤病毒(DRV)YB株σC蛋白二级结构和B细胞抗原表位,对DRV YB株的σC蛋白氨基酸序列与参考DRV相应序列以DNAStar软件进行同源性和遗传进化树分析;采用SOPMA法、Gamier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schultz法方法预测其二级结构;用Hopp-Woods法、Emini法、Jameson-Wolf法和吴玉章等建立的方法分别预测蛋白的亲水性、表面可能性和抗原指数,然后综合分析其B细胞抗原表位.结果显示,DRV YB与国内DRV相应序列同源性在93.7％～99.6％,代表性较强;B细胞表位可能在15～27、36～49、40～49及90～98区段或其附近,这4个被预测的表位均含有β-转角和无规卷曲结构.本研究为进一步确定σC蛋白的B细胞表位和反向()计提供了理论基础.     

不同海拔下施氮量及移栽密度对烤烟质量的影响

【目的】筛选不同海拔高度烟区适宜的施氮量和移栽密度组合,为当地及类似生态烟区优质烤烟原料生产提供理论依据和技术支撑。【方法】以云烟87为试验材料,采用随机区组试验研究恩施州不同海拔（875 m、1 150 m和1 350 m）烟区不同施氮量（82.5kg/hm2、97.5kg/hm2和112.5kg/hm2）和移栽密度（13890株/hm2、15150株/hm2和16665株/hm2）组合对烤烟质量提升的影响。【结果】低海拔（875 m）烟区施氮量97.5kg/hm2及移栽密度16665株/hm2条件下烟叶的产量、产值和上中等烟率分别为1934.10kg/hm2、53726.70元/hm2和89.94%,经济性状较优,外观质量综合评分最高（48.98分）,化学成分较为协调;中海拔（1 150 m）烟区施氮量97.5kg/hm2及移栽密度15150株/hm2条件下烟叶的产量、产值和上中等烟率分别为1917.90kg/hm2、52500.45元/hm2和90.80%,经济性状较优,外观质量综合评分最高（48.91分）,化学成分较为协调;高海拔（1 350 m）烟区施氮量112.5kg/hm2及移栽密度15150株/hm2条件下烟叶的产量、产值和上中等烟率分别为1927.05kg/hm2、53037.15元/hm2和88.88%,经济性状较优,外观质量综合评分最高（48.39分）,化学成分较为协调。【结论】低海拔烟区采用中氮密植,中海拔烟区采用中氮中密,高海拔烟区采用高氮中密栽培方式,有利于保证烟叶产量,提升烟叶质量。     

番鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定

从番鸭肝“白点病”患鸭的肝脾匀浆中分离到7个病毒分离株。在电镜下观察到病毒粒子呈球形，无囊膜，有可见的双层衣壳结构，外壳直径75nm，内核直径50nm；病毒核酸型为RNA；不凝集鸡、鸭、兔、豚鼠红细胞，与禽呼肠孤病毒有一定的抗原相关性；对番鸭胚和鸡胚成纤维细胞可致感染细胞圆缩、融合，出现多核细胞和巨细胞，胞浆内有近核包涵体；试验感染1日龄敏感雏番鸭死亡率达100％，临床及病理变化与自然感染发病的番鸭基本一致，并可回收到该病毒。结果表明，目前国内流行的番鸭肝“白点病”病原为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属番鸭呼肠孤病毒。     

农药应用技术的发展概述

在全社会倡导和谐发展的背景之下，农药应用与环境污染之间的矛盾逐渐成为大家关注的焦点之一。如何在保证作物生长良好的情况下，又不对环境产生污染是本文关注的内容。本文基于此，针对农药应用技术的相关问题进行了探讨。文章在阐述了农药使用重要性的基础上，分析了农药应用与生态安全的关系，最后阐述了生物农药相关技术的发展概况。     

马立克氏病两种Ⅰ型疫苗株的免疫效果

马立克氏病两种Ⅰ型疫苗株的免疫效果在世界各地使用的马立克氏疫苗株很多，其中Ⅱ型和Ⅲ型自然弱毒株已得到普遍应用。目前随着各地区ＭＤ超强毒的不断出现，Ⅲ型（ＨＶＴ）单价苗或Ⅱ型疫苗株组成的双价苗的免疫效果均受到不同程度的影响，免疫失败现象时有发生。因而人...     

番鸭呼肠孤病毒B3株感染对雏番鸭细胞免疫功能的影响

番鸭感染番鸭呼肠孤病毒后,在感染早期(15 d内),外周血淋巴细胞转化率比对照显著下降(P<0.01),外周血T淋巴细胞ANAE阳性率比对照显著下降(P<0.01),IL-2含量也比对照组显著下降(P<0.01);但在感染后期(特别是感染后20 d)各指标均有所回升,但仍显著低于对照.由此可见,番鸭呼肠孤病毒感染早期机体细胞免疫功能受到严重影响,感染后期功能逐渐恢复.     

原核表达番鸭呼肠孤病毒σC与σB蛋白对雏番鸭的免疫保护

【目的】探讨原核表达的番鸭呼肠孤病毒（DRV）外壳蛋白σC与σB对于雏番鸭的免疫保护作用,为研制有效的DRV亚单位疫苗提供理论基础。【方法】对pET-30a-S3/BL21重组菌与pET-30a-S4 ORF2/BL21重组菌进行稳定性检验,表达的重组蛋白进行纯化和复性后,进行油乳剂制备,50只1日龄雏番鸭随机平均分为5组,即DRV σB蛋白免疫组、DRV σC蛋白免疫组、DRV σB + σC蛋白免疫组及PBS对照组和攻毒对照组,免疫组皮下接种剂量为500 μg/只,7日龄时进行二次免疫,14日龄时进行攻毒试验,ELISA和琼扩（AGP）检测抗体水平并计算保护指数。【结果】重组菌具有良好的稳定性,各免疫组的雏番鸭均在第2次免疫后7 d产生了一定效价的抗体,其中DRV σB + σC蛋白免疫组和DRV σC蛋白免疫组的雏番鸭血清抗体ELISA效价均为1﹕200,高于DRV σB蛋白免疫组的1﹕100。攻毒保护试验结果表明,联合免疫的保护指数最高,可达70,重组DRV σC保护指数次之,为60,重组DRV σB蛋白保护指数最低,仅为40。【结论】使用原核表达的DRV外壳蛋白σC与σB制备油乳剂,联合免疫可诱导雏番鸭快速产生一定效价的抗体,并提供良好的免疫保护力。     

禽(番鸭)呼肠孤病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

为了建立检测(番鸭)呼肠孤病毒(DRV)感染的方法,本研究根据DRV的σNS基因核苷酸序列设计引物及TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了该病毒的TaqMan探针实时荧光RT-PCR检测方法.用已知浓度的重组质粒为标准品,构建的标准曲线的相关系数达到99%.试验表明,该方法的重复性、稳定性、特异性良好,且灵敏度高,可以检测到1.0×10~2拷贝/μL的标准品,比普通PCR至少高100倍.该检测方法对DRV人工感染番鸭肝脏组织检出率达到100%.本实验所建立的TaqMan探针荧光RT-PCR为的快速检测以及进行分子流行病学的调查提供了新的技术手段.     

猪伪狂犬病病毒FZ株的分离鉴定

从福州郊区某猪场发生疑似伪狂犬病的仔猪中分离到一株病毒。该病毒株感染Vero细胞、MDCK细胞均可产生典型的细胞病变,并可见合胞体。感染仔猪症状较轻,但在攻毒后25d,可检测到伪狂犬病抗体,并在仔猪的肺气管冲洗液中回收到同样理化特性的病毒。接种成兔和小白鼠均可出现典型的伪狂犬病症状。电镜观察可见110～180nm大小不等、不规则圆形、有囊膜的伪狂犬病毒粒子。用MDCK细胞测定其TCID50为10-6.604/0.1mL,能被PRV标准阳性血清所中和,效价为1∶77。对乙醚、热、胰蛋白酶敏感,在pH5.0～9.0之间保持稳定。尿囊膜接种9～12日龄鸡胚,86h可见尿囊膜水肿、出血,有大小不一白色痘斑样病灶,胚体萎缩,头盖部突起、全身弥漫性出血。制作细胞飞片,8h用PRV荧光抗体染色,可观察到细胞浆内呈现散在的翠绿色荧光。PCR反应可扩增出特异性1579bpDNA片段。证实分离的病毒株为伪狂犬病病毒,并命名为PRVFZ株。     

中国禽呼肠孤病毒番鸭分离株的纯化及其核酸与结构蛋白分析

将番鸭呼肠孤病毒国内分离株在番鸭成纤维细胞(DEF)上克隆纯化3次后．在鸡成纤维细胞(CEF)上增殖，收获的细胞培养物经3次冻融，采取差速离心、超速离心、非线性蔗糖密度梯度离心和脱糖处理相结合的方法进行提纯；对不同梯度区带的蛋白提取物经电镜观察、毒价(TCID50)和含毒量测定得到病毒纯化物；最后对病毒纯化物进行琼脂糖核酸电泳和SDS-PAGE蛋白电泳分析。结果，核酸电泳得到10条RNA带，分列呈“334”形式的3组，其迁移率除M3基因外无明显差异；蛋白电泳得到分子质量分别为149．0、129．0、111．0、79．0、75．0、50．0、42．0、39．0、37．0、35．9、32．0、29．0 ku的12条蛋白带，其中5个蛋白的分子质量与参考株S1133相近。该分离株具有禽类呼肠孤病毒核酸和蛋白电泳图谱的共同特征。