lncRNA-6617调控猪肌内前体脂肪细胞分化的筛选与功能研究

旨在探究lncRNA-6617的生物学特性及其对猪肌内前体脂肪细胞分化的影响，以及初步探究其上游调节机制，为后续深入研究猪肌内脂肪沉积调控机制提供参考依据。本研究以饲养在相同条件下的1、90、180日龄健康马身公猪(n=3)和大白公猪(n=3)为研究对象，利用RNA-seq技术筛选脂肪型猪(马身猪)和瘦肉型猪(大白猪)肌肉特异表达的lncRNAs，并通过生物信息学分析、RT-PCR及Sanger测序鉴定lncRNA-6617生物学特性及其猪组织中的表达特征。在猪肌内前体脂肪细胞中干扰lncRNA-6617，检测lncRNA-6617对肌内脂肪细胞分化能力的影响。随后，检测m⁶A修饰相关酶在不同品种猪中的表达差异，研究lncRNA-6617的上游调控机制。结果显示，lncRNA-6617位于猪18号染色体，RAMP3基因反义链的第3内含子区域，无蛋白编码能力，主要分布于细胞核; lncRNA-6617在猪所检测各组织中均有表达，背部皮下脂肪中表达量最高，且在马身猪肌肉组织中的表达极显著高于大白猪(P < 0.01);在猪肌内前体脂肪细胞分化过程中，lncRNA-6617表达量呈上升趋势，且在分化第5天表达量达到最高; 干扰lncRNA-6617诱导分化7 d后，分化的成熟脂肪细胞明显减少，成脂关键基因CEBPα、PPARγ和aP2的表达均极显著下调(P < 0.01)。m⁶A修饰的去甲基化酶FTO在马身猪背最长肌和股二头肌中的表达极显著高于大白猪(P < 0.01)，在腰大肌中的表达显著高于大白猪(P < 0.05)，上游调节因子ZNF217在马身猪肌肉组织中的表达极显著高于大白猪(P < 0.01)，与lncRNA-6617表达模式一致。干扰FTO后，lncRNA-6617的表达极显著下调(P < 0.01)。本研究筛选了在马身猪肌肉组织中显著高表达的lncRNA-6617，并深入研究了lncRNA-6617促进猪肌内前体脂肪细胞分化的功能及其上游调节机制，丰富了脂肪细胞生成的表观调控网络。     

猪DDX家族成员基因结构与表达特性分析

为了系统研究DDX解旋酶家族成员在猪生长发育中的作用，试验采用生物信息学方法和实时荧光定量PCR检验技术，对猪DDX家族的42个成员的基因结构、理化性质、功能结构域、聚类进化树、GO功能，以及在大白猪和马身猪盲肠组织中的表达情况进行了研究。结果表明：猪DDX家族除DDX28和DDX53基因没有内含子外，其他成员均含有外显子和内含子，且外显子平均数量为16个，内含子平均数量为15个。除8号染色体外，其他染色体上均有猪DDX家族成员分布。该家族成员均为疏水蛋白并且大多数不稳定，具有多个亚细胞定位，整体来看主要分布于细胞核中。猪DDX家族成员共预测到了15个保守基序，其中DDX1、DDX11、DDX19B、DDX26、DDX36、DDX39A、DDX58和DDX60基因缺失D-E-A-D保守基序，有10个保守基序出现在超过30个成员的序列中，同时不同成员有相同的基序类型和特定的基序排列顺序。聚类分析将猪DDX家族42个成员分为6大簇，其中DDX2和DDX48、DDX21和DDX50、DDX43和DDX53、DDX5和DDX17具有高度同源性，支持率为100%。该家族大多数成员具有ATP依赖性...