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1.
[目的]对牛冠状病毒N蛋白进行原核表达,利用指数富集的配基系统进化技术筛选N蛋白的核酸适配体,为该病诊断方法的建立奠定基础.[方法]根据牛冠状病毒基因序列,设计N蛋白编码基因特异性引物,扩增目的基因并通过酶切、连接、转化构建原核表达载体pET-28a-N,优化N蛋白表达条件,镍柱纯化获得高纯度高浓度的N蛋白.利用微孔板法,经过包被、封闭、加文库、洗脱、提取、PCR、胶回收和反筛等步骤从原始核酸适配体文库中筛选出N蛋白特异性适配体,连接T载体转入DH5a感受态细胞后,经菌落PCR鉴定和测序获得与N蛋白特异性结合的适配体序列,测定其结合常数,并利用在线软件预测其二级结构.[结果]成功表达出约55 kD的重组蛋白;经微孔板法筛选出67条适配体序列,其中N-12、N-33和N-45出现多次重复,经测定3条核酸适配体均具有环状、发卡结构,利于与目标蛋白稳定结合.[结论]筛选的3条核酸适配体有望用于牛冠状病毒病早期诊断用酶联适配体方法的建立.  相似文献   
2.
试验选用临产前1个月的母猪及其仔猪为研究对象,研究在日粮中添加复方中药对母猪免疫和仔猪腹泻的影响。将12只临产母猪随机分为4组,每组3只,分别为对照组和3个给药组(低、中、高剂量给药组)。对照组仅饲喂日粮,低、中、高剂量组在饲喂日粮中分别添加0.3、0.6和0.9g/kg复方中药。分别在给药后第0、10、20和30天采集血液,用于测定IgG含量、CD3+含量和CD4+/CD8+值|在试验期内计算仔猪腹泻率和腹泻指数。结果表明,给药后第20、30天时,所有给药组IgG含量和CD3+含量均显著高于对照组(P<0.05)|中剂量组在用药后各测定日龄CD4+/CD8+值均显著高于对照组(P<0.05)|中剂量组和高剂量组仔猪腹泻率分别为9.78%和11.4%,均显著低于对照组(14.76%,P<0.05)|各给药组仔猪腹泻指数显著低于对照组(0.41,P<0.05),且各组之间均具有统计学差异(P<0.05)。这说明,在日粮中添加复方中药可以有效提高母猪免疫,降低和减轻仔猪腹泻的发生。 [关键词]复方中药|临产母猪|仔猪|免疫功能|腹泻  相似文献   
3.
为了明确宁夏地区奶牛犊牛腹泻源性大肠埃希氏菌的分离率、耐药情况和LEE毒力岛eaeA和ler基因的携带情况,采集宁夏5市16个规模化奶牛场1~2月龄犊牛病理性腹泻样本157份,采用微生物学方法培养、VITEK 2 Compact生化鉴定和PCR鉴定,应用PCR方法进行分离株LEE相关基因检测。结果分离鉴定到大肠埃希氏菌62株,对四环素耐药率为100%,对阿莫西林、氟苯尼考、哌拉西林等9种药物的耐药率大于90.00%,对阿米卡星较为敏感,耐药率为11.29%;LEE毒力岛eaeA基因的检出率为11.29%(7/62),ler基因的检出率为79.03%(49/62),二者同时检出率为3.23%(2/62)。结果表明,LEE的存在,可能是某些奶牛场犊牛腹泻大肠埃希氏菌病的原因之一,建议临床治疗犊牛腹泻大肠埃希氏菌病可以首选阿米卡星。  相似文献   
4.
犊牛大肠杆菌病又称犊牛白痢,是由一定血清型的致病大肠杆菌引起的犊牛的一种急性传染病。此病发病较急,常以急剧腹泻和虚脱为特征。1病例2018年9月,临沂市平邑县某养牛场购进51头3月龄左右犊牛,饲养于半开放式简易牛舍,作为后备架子牛育肥。  相似文献   
5.
为研究牛耳温度与直肠温度的相关性,试验选择发病基础母牛、发情基础母牛、健康基础母牛各20头,通过在不同季节连续5 d监测耳温度和直肠温度,并进行数据统计和相关性分析。结果:牛耳温度和直肠温度存在相关性,相关系数为0.825,拟合线性方程为:y=0.853 x8.058。结论:通过监测耳温度可以直接反映出牛的生理健康状况。  相似文献   
6.
过去,在我国南方地区水牛是重要的役用家畜,随着农业机械化的推广应用,现在的水牛已经变成了乳、肉、役兼用型家畜。而奶水牛是广西特色农业产业之一,一直以来,广西的水牛奶产量都位居全国前列,据不完全统计,2017年广西的奶水牛存栏数量稳居全国之首,达到5.35万头,产奶量2.65万吨。2018年广西为贯彻落实国家奶业发展政策措施,加大奶水牛产业发展力度,在稳固发展摩拉、尼里/拉菲水牛外,大力推广地中海水牛,进一步推进奶水牛规模养殖,做大做强民族奶业品牌,推动广西奶业向高质量发展转变。但是,广西的奶水牛产业仍然偏小偏弱,产业发展遇到了瓶颈,水牛繁殖率低、品种资源匮乏、冷冻精液精子活力差是其中的重要影响因素。为了破解这些难题,广西从2007年开始首次从国外引进少量地中海水牛冻精与本地水牛、摩拉水牛、尼里/拉菲水牛进行杂交试验。2011年再次从国外引进3万支地中海水牛冻精开展杂交改良推广应,用并取得阶段性成果,目前地中海水牛杂交改良效果良好,产奶量明显提高。2014年广西首次从澳大利亚引进活体原种地中海水牛59头,截至2019年12月底,地中海水牛纯种扩繁至300多头,其中核心能繁母牛200头,种公牛50头(采精公牛14头)。现将2019年牛场执行精细化饲养管理,提高地中海水牛冷冻精液质量与数量的做法介绍如下,供同行参考。  相似文献   
7.
HH7(Holstein Haplotype 7)是在荷斯坦牛群中新发现的一种隐性遗传缺陷单倍型,由27号染色体上CENPU基因4个碱基缺失突变引起,隐性基因纯合时能引起胚胎早期流产,严重影响着奶牛养殖者的经济效益。本研究利用竞争性等位基因特异性PCR(KASP法)对随机抽取的166头荷斯坦公牛样本进行了检测分析,结果表明,在所检测的荷斯坦公牛中未发现HH7携带者个体。提示新缺陷单倍型HH7在北京地区的荷斯坦牛群中比例可能很低,但在全国牛群中的分布情况尚不清楚,建议继续开展相关研究,并在种牛遗传物质引进时重点关注,避免将新缺陷基因引入进来,造成有害基因的广泛传播。  相似文献   
8.
本试验旨在探讨精氨酸(Arg)对冷应激腹泻仔猪肠道功能的调节作用。选取28日龄、体重约6.5 kg的大约克冷应激中等腹泻仔猪24头,挑选其中3头屠宰(腹泻起始组),21头仔猪随机分成3个组,每组7头仔猪,分别饲喂Arg水平为1.1%、1.4%和1.7%的饲粮,试验14 d。试验第1天和饲喂14 d后各处理组分别选3头猪,灌服10%木糖,1 h后前腔静脉采血,测定D-木糖含量,屠宰取小肠,检测小肠形态和肠道发育指标。结果表明:Arg水平显著影响仔猪肠道结构,1.1%Arg组、1.4%Arg组小肠绒毛高度和绒隐比均高于1.7%Arg组和腹泻起始组(P<0.05),其中1.7%Arg组与腹泻起始组无显著差异,Arg对隐窝深度无显著影响;1.4%Arg组仔猪血浆D-木糖高于1.1%、1.7%Arg组(P<0.01);肠道黏膜蛋白质和DNA含量均随Arg增加呈先升高再降低的变化规律,以1.4%Arg水平为最高,高于1.1%Arg组、1.7%Arg组和腹泻起始组(P<0.01),添加Arg亦可提高小肠RNA含量(P<0.05);提高Arg水平激活诱导型一氧化氮合成酶和总一氧化氮合成酶(P<0.05),促进一氧化氮释放(P<0.01)。综上,适宜的Arg水平可改善仔猪肠道结构和吸收功能,过高则加剧肠道损伤,28~42日龄中等腹泻仔猪Arg适宜水平为1.4%。Arg可能通过激活一氧化氮合酶,分泌适量一氧化氮合成酶,促进小肠绒毛生长发育,改善肠道吸收功能。  相似文献   
9.
为建立快速、灵敏且特异的检测猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)检测方法,本试验扩增SADS-CoV N基因保守区域将其克隆至pMD18-T载体。所构建的重组质粒pMD18-T-SADS-qN作为阳性质粒标准品,以其为模板建立一种SYBR Green荧光定量PCR检测方法。结果显示,所建立方法在3.31×101~3.31×107拷贝·μL-1模板量时,呈良好的线性关系,相关系数(R2)为0.997,斜率为-3.318。该方法特异性检测SADS-CoV;而猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)检测结果均为阴性。所构建的标准品检测灵敏度下限可以达到3.31×101拷贝·μL-1,组内和组间变异系数均小于1%,表明其具有良好的灵敏性和重复性。用该方法检测SADS-CoV感染IPI-2I和IPEC-J2细胞后不同时间点和不同接毒剂量的复制情况,结果显示,SADS-CoV感染细胞后2 h病毒含量较低,在12~36 h病毒含量迅速增长,36 h后增长速度减缓且病毒含量维持在较高水平。分别用0、0.1、1 MOI SADS-CoV感染细胞结果显示病毒的mRAN转录水平呈现剂量依赖性增加,当MOI为1时,IPI-2I和IPEC-J2细胞病毒含量分别为106.7、105.3拷贝·mL-1。进一步利用所建立的方法对经口服攻毒SADS-CoV仔猪的临床样本进行检测,结果发现病毒在空肠回肠含量较高,表明病毒主要定殖于空肠和回肠。综上表明,本研究建立SYBR Green荧光定量PCR检测方法能灵敏特异地检测SADS-CoV,为SADS-CoV的诊断和病毒相关基础研究提供可靠的检测手段。  相似文献   
10.
旨在构建以乙肝核心抗原(HBcAg)为载体呈现猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1抗原表位的病毒样颗粒。将PEDV S1蛋白中含B细胞表位的270 bp片段插入到HBcAg主要免疫显性区域(MIR),构建重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-PEDV S1,转化到感受态细胞BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定纯化后的重组蛋白,通过透射电镜观察其形态结构。结果显示,成功构建重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-PEDV S1,并在BL21(DE3)中以包涵体形式表达,纯化、复性后的重组蛋白经过2%磷钨酸负染后透射电子显微镜检测到病毒样颗粒结构。HBcAg-PEDV S1重组蛋白能够自发形成病毒样颗粒,在原核表达中,乙肝核心抗原可作为载体呈现PEDV S1抗原表位,为今后新型PED疫苗的研究提供了思路。  相似文献   
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