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1.
禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究   总被引:47,自引:1,他引:46  
用表达禽流感病毒(AIV)核蛋白基因的杆状病毒感染Sf9昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术(rNP-ELISA)。其抗原最适包被量为0.6μg/孔,等检血清最适稀释度为1:200,酶标抗体使用浓度为1:1000。根据对140份SPF鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为OD均为阴性;检测A型AIV15个不同亚型(H1 ̄H15)毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种AIV的SPF鸡第3天即能检出抗体,到第162天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在2.9% ̄7.2%和3.4% ̄9.8%之间。对3138份鸡血清进行监测,rNP-ELISA与全病毒间接ELISA与全病毒间接ELISA(AIV-ELISA)、琼脂扩散  相似文献
2.
应用正向间接血凝试验检测来自6个省(市)的44个规模化猪场共754份血清中的猪瘟抗体水平,其中331份猪瘟血清抗体低于或等于1:8,占44.16%,低于临界保护线,421份血清的抗体水平大于或等于1:16,占55.84%,可视事格;母猪、育肥猪和仔猪的免疫合格率分别为66.7%、37.96%、22.02%。母猪、育肥猪、仔猪血清中猪瘟抗体为零的百分比和份数分别为7.26%(32/441)、15.3  相似文献
3.
用于检测猪瘟抗体的免疫金标试纸条的研制与应用研究   总被引:20,自引:2,他引:18  
以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜的检测区,在其下端附着胶体金标记的猪瘟抗原,组成免疫金标试纸条,根据胶体金免疫层析原理,用该试纸条建立检测猪瘟抗体水平的免疫金标检测法。再用本试纸条检测法与Dot-ELISA及间接血凝法对298份猪、鸡、鸭、鹌鹑、兔、鼠、羊血清进行猪瘟抗体检测,结果符合率达100%。试验结果表明,本法与Dot-ELISA及间接血凝法一样特异、敏感和微量,而且检测时间短、直观,结果容易判定,适用于大面积猪瘟抗体监测普查。  相似文献
4.
重组M蛋白-乳胶凝集试验检测PRRS病毒血清抗体的研究   总被引:18,自引:0,他引:18  
利用纯化的 PRRS病毒重组 M蛋白致敏乳胶制成乳胶抗原 ,成功地建立了一种检测 PRRS病毒血清抗体的乳胶凝集试验 (L AT)诊断方法。用制备的乳胶 M抗原分别检测猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪弓形体病、猪衣原体病、猪乙型脑炎阳性血清 ,结果均为阴性 ,无交叉反应 ,说明建立的 L AT方法具有良好的特异性。用建立的乳胶凝集试验方法与国外IDEXX公司 PRRS病毒抗体检测试剂盒同时对 76份猪血清样本进行检测 ,结果表明建立的 L AT方法的特异性和敏感性均为 95 % ,两种方法的总符合率为 87% ,检出率基本一致。研究结果表明 L AT方法具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强、价格低廉且可用于现场检测等优点 ,是一种适合基层兽医单位用于 PRRS病毒血清抗体检测的新方法  相似文献
5.
将猪细小病毒在IBRS-2细胞上同步培养增殖,待出现细胞病变后,反复冻融,收获病毒液,用甲醛灭活。随后用经硫酸胺沉淀、透析后浓缩的细小病毒液进行方阵滴定,选择致敏乳胶的最佳条件,制成细小病毒乳胶凝集试验(LAT)抗原。抗原与细小病毒阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒,而与生理盐水、PBS、犊牛血清、猪瘟、衣原体、口蹄疫、伪狂犬病、弓形体及萎缩性鼻炎等阳性血清不出现凝集现象。用所建立的细小病毒乳胶凝集试验(LAT)与血凝抑制试验检测了203份猪血清,其中血凝抑制抗体阳性为161份,阴性为42份,阳性率为79.31%;乳胶凝集抗体阳性为150份,阴性为53份,阳性率为73.89%,两种方法阳性符合率为93.16%,经统计学检验P>0.05,两者差异不显著。结果表明,乳胶凝集试验可以作为临床上大量血样进行血凝抑制试验前的初筛,具有简便、准确的优点,在检测细小病毒(PPV)抗体上具有较好的应用前景。  相似文献
6.
本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3周抗体阳转,第3周~10周抗体阳性检出率为92.8%(52/56),对照组猪血清抗体检测均为阴性(33/33)。试剂盒在-20℃稳定保存18个月与其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中猪圆环病毒2型污染相当严重。该试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。  相似文献
7.
乳胶凝集试验检测鸡新城疫病毒血清抗体的研究   总被引:13,自引:1,他引:12  
用硫酸铵沉淀、透析浓缩的鸡新城疫病毒(NDV)抗原致敏乳胶,然后所鸡新城疫阳性血清进行方阵滴定,选择出最佳致敏条件并制成新城疫病毒乳胶抗原,由此建立超乳胶凝集试验(LAT),用来检测新城疫血清抗体;用所建立的乳胶凝集试验(LAT)和血凝抑制试验(HI)同步检测69份鸡血清,结果乳胶凝集试验阳性62份,阴性7份;血凝抑制试验阳性66份,阴性3份,两者的总符合率为94.2%(65/69),且两者的检出率基本一致。结果表明,乳胶凝集试验具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强且可用于现场检测等优点,是一种适合基层单位用来检测鸡新城疫病毒血清抗体的新方法。  相似文献
8.
斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究   总被引:12,自引:0,他引:12  
以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记SPA,建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色,阳性者出现红色斑点,结果易于判断。整个试验过程仅需5min,操作简单,与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较,符合率达98.4%和98.9%。说明该法微量、特异、敏感可靠,检测时间短,效果直观,非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。  相似文献
9.
检测肠炎沙门氏菌ELISA方法的建立与应用研究   总被引:10,自引:0,他引:10  
从已建立的抗沙门氏茵单抗中筛选出适用于肠炎沙门氏菌ELISA检验的3—47—26单抗.采用筛选强阳性杂交瘤细胞株制备了高效价的3—47—26单抗.改进用辣根过氧化物酶标记高效价单抗的方法,进行了HRP标记单抗的免疫生物学特性的鉴定。确定了包被浓度和酶标抗体的工作浓度:HRP-3—47—26为1:100;LPS的包被浓度为400ng/mL。试验中采用LPS与多聚赖氨酸的结合,解决了包被过程中的解吸附作用,增强了包被的稳定性,同时也减少了假阳性反应,优化了包被过程。建立了检测肠炎沙门氏菌的抗原竞争ELISA方法,利用样品中的LPS抑制酶标抗体与包被的LPS结合,以降低底物反应的颜色从而达到检测的目的。通过对210份肠炎沙门氏菌感染鸡泄殖腔棉拭子、羽毛和组织样品先筛选后鉴定的方法进行检测具有明显的抑制作用,通过与国标法对大量的样品检测结果比较表明,竞争ELISA方法的检出率为18.09%;检出阳性样品36份,国标法检出率为17.14%;两者符合率为97.14%。竞争ELISA敏感性和特异性分别为94.4%和97.7‰从而为肠炎沙门氏菌的检测提供了一种敏感、特异的检测方法。  相似文献
10.
牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用   总被引:10,自引:0,他引:10  
为了建立一种快速检测牛分支杆菌抗体的新方法用于诊断牛结核病,利用胶体金免疫层析技术原理,用原核诱导表达的牛分支杆菌抗原蛋白MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条.结果表明,粒径为40 nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.0,MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5 μg,MPB70抗原的最适包被浓度为3.0 mg/mL,抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5 mg/mL,交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性.比较试验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条.在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较.本试纸条与牛分支杆菌分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%.快速检测牛结核抗体的免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核病根除计划中具有良好的应用前景.  相似文献
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