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1.
规模化猪场猪圆环病毒2型感染的流行病学调查   总被引:75,自引:3,他引:72  
20 0 1年 11月至 2 0 0 2年 8月 ,对北京、天津、广东、深圳、山东、山西等地 12个规模化猪场猪圆环病毒 2型 (PCV2 )感染发病群猪进行了临床发病情况调查 ,并采用 PCR方法对所收集的 5 5份组织病料进行 PCV2的检测 ,结果表明 ,12个猪场中有 11个猪场发病猪群表现为断奶后多系统衰竭综合征 ,1个猪场表现为皮炎和肾病综合征。由此可见 ,PCV2感染在我国规模化猪场已普遍存在  相似文献
2.
PCR和斑点杂交检测鸡传染性贫血病毒   总被引:38,自引:3,他引:35  
通过聚合酶链反应(pcR)扩增鸡传染性贫血病毒(cAV)DNA特定片段,将此pcR产物用Digoxigenin标记后作为探针进行斑点杂交,以此检测CAV并作流行病学调查。对从江苏省不同地市随机采集的2月龄左右不同疾病的病鸡DNA样品进行检测,在被检的52个不同鸡群来源的病料中,有36个鸡群来源的病料DNA显示CAV阳性(群阳性率为69.2%);备组织中CAVDNA含量有所差异,依次为胸腺>脾、骨髓、肝>肾、法氏囊、脑。用PCR检测得到的阳性鸡的组织病料感染SPF鸡,在感染后第24天检查,出现贫血症状。初步调查表明,在江苏一些地区CAV感染已相当普遍,但它与发病的关系还有待于进一步研究。  相似文献
3.
我国首例小反刍兽疫诊断报告   总被引:38,自引:10,他引:28  
2007年7月我国西藏发生不明山羊疫情,国家外来动物病诊断中心对当地动物疫病控制中心送检的14只病死山羊病料和一批血清样品分别进行病原学和血清学检测。利用较敏感的小反刍兽疫病毒(PPRV)特异性荧光定量RT-PCR方法,在11只病羊组织中检测到小反刍兽疫病毒核酸。利用次敏感的PPRV普通RT-PCR方法,从8只病羊组织中检测到PPRV核酸。针对1号样本病原核酸N基因和F基因片段进行遗传发生分析,该病原属于4系。利用竞争ELISA试剂盒对送检的13份血清样本进行抗体检测,结果全部阳性。将1号组织样本接种Vero细胞分离病毒,透射电镜观察下,发现了500纳米左右的病毒粒子。对分离毒株进行PCR检测同样证实其为PPRV。  相似文献
4.
猪链球菌2型的PCR快速检测   总被引:36,自引:4,他引:32  
根据猪链球菌 2型的荚膜多糖抗原基因 cps2 J,合成 1对可扩增长度为 6 75 bp目的片段的引物 ,建立了检测猪链球菌 2型的 PCR法。应用 PCR对 9株经玻片凝集试验检测为猪链球菌 2型的菌株进行了检测 ,均呈阳性 ;而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪葡萄球菌、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等检测结果均呈阴性 ,表明了本方法的特异性。用此法对 88份正常猪的扁桃体样品的细菌分离物进行了检测 ,36份呈阳性 ,同时用玻片凝集试验进行对照检测 ,也全部呈阳性。而此法不需进行细菌的纯分离培养 ,即可用于猪链球菌 2型的快速诊断以及流行病学调查。  相似文献
5.
鹅副粘病毒F蛋白基因的克隆和序列分析   总被引:35,自引:7,他引:28  
鹅副粘病毒分离株YG97经10日龄鸡胚增殖后纯化,提取病毒的基因组RNA,采用RT-PCR一次性扩增出与预期设计的1.7kb大小相符的特异性条带。将扩增产物提纯后克隆入pCEM^R载体,经转化、筛选及酶切鉴定后,初步获得了含鹅副粘病毒F基因的阳性克隆。将所获得的阳性重组质粒进一步进行了序列鉴定。序列分析表明扩增的F基因片段的长度为1695bp,共编码533个氨基酸,F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为^112R-R-Q-K-P-F^117,与NDV强毒株特征相符,同时也与鹅副粘病毒分离株致病性实验结果相符,同源性分析表明,与国内标准强毒株F48E9的核苷酸同源性为86%,与国内外其它毒株的核苷酸同源性在82%~89%之间,表明该毒株相对于经典的NDV在F片段上发生了较大的变异。  相似文献
6.
牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系的优化研究   总被引:31,自引:2,他引:29  
根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物,根据牛酪蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。同时对常规PCR和巢式PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的实用性进行比较。15头公牛、13头母牛的DNA样品检测结果表明:使用巢式PCR公牛可以扩增出205bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段,母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段;而使用常规PCR时公牛扩增出255bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段,母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段,其性别鉴定结果和实际完全一致。由于巢式PCR只需10个细胞就可以在紫外透射分析仪下看到扩增结果,而常规PCR则需要20~30个细胞,所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。试验采用巢式PCR鉴定了10个奶牛胚胎的性别,同时还对血清是否会对试验结果产生影响进行了研究。  相似文献
7.
PCR制备地高辛标记的探针检测禽流感病毒核酸   总被引:30,自引:0,他引:30  
用聚合酶链反应(PCR)技术,制备了广东禽流感无致病力分离株A/goose/China/24/96(H7N3)核蛋白基因片段(NPc)的地高辛标记的cDNA探针。建立并优化了检测禽流感病毒核酸的探针杂交法,探针杂交法能鉴别出非免疫鸡胚和SPF鸡胚尿囊液中的病毒,攻毒后第3天的SPF和非免疫鸡泄殖腔拭子中AIV的最大检出率为1/10,对临床样品中的AIV的最大检出率为1/7,而直接HA和HI法及AGP试验检不出临床样品的AIV。该探针具有较好的特异性和敏感性,为从分子水平探讨AIV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。  相似文献
8.
应用PCR技术检测沙门氏菌   总被引:30,自引:0,他引:30  
参照文献报道的根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因片段所设计的引物序列,合成了1对长25bp的引物,对沙门氏菌属A-F各群中共16株沙门氏标准菌株和其他12株非沙门氏菌标准菌株进行DNA抽提扩增、结果沙门氏菌PCR产物都出现495bp的特异性DNA扩增带,而非沙门氏菌均未出现扩增条带,证明这对引物具有沙门氏菌属特异性。  相似文献
9.
猪繁殖—呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH—1a株基因型鉴定   总被引:29,自引:4,他引:25  
根据猪繁殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株和欧洲型毒株的基因组序列设计合成了2对引物,即1008PS/1009PR和1010PLS/1011PLR。我国分离的CH-1a株用这2对引物均能扩增出与预期大小相符的RT-PCR产物,分别与美洲型代表株(VR-2332)的RT-PCR产物大小相当。特异性试验表明,这2对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的RNA或DNA以及未感染的MARC-145细胞RNA。间接免疫荧光试验也证明,CH-1a株与PRRSV核衣壳蛋白特异性单克隆抗体以及美洲型毒株抗血清均呈阳性反应。因此初步证实CH-1a株为美洲型PRRSV。  相似文献
10.
用PCR方法检测猪圆环病毒Ⅱ型   总被引:28,自引:2,他引:26  
建立了一种能特异性地扩增猪圆环病毒 型 (porcine circovirus type 2 ,PCV- 2 )核酸片段的 PCR方法 ,从疑似断奶猪多系统衰竭综合征 (PMWS)的感染病例的淋巴结和脾脏中扩增出了预期长度的 PCV- 2 DNA片段 ,用限制性内切酶 Eco R 酶切鉴定了 PCR产物的特异性。 PCR产物的核苷酸序列分析表明 ,与已报道的 PCV- 2 (Gen Bank Ac-cession num ber AF0 2 72 17)相关区域的核苷酸序列同源性均大于 96 %。首次证实了我国猪群中存在 PCV- 2感染的PMWS。  相似文献
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