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1.
应用实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测口蹄疫病毒   总被引:10,自引:0,他引:10  
按照口蹄疫病毒(FMDV)聚合酶3D基因序列,设计合成了引物和探针,经各反应务件的优化,建立了实时荧光定量RT-PcR技术,对细胞培养物、水泡液、水泡皮及分泌物、血液中的FMDV进行了特异性检测和敏感性试验。结果,用300nmol/L的引物浓度和200nmol/L探针浓度,获得的CT值较小,而△Rn最大;可检测到相当于9.1TCID50的病毒RNA;与VSV和其他水泡性病毒不发生交叉反应;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.984;组内和组间试验重复性的变异系数(CV)分别为5.4%和6.7%;与常规RT-PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,并可同时检测大量样品等优点。  相似文献
2.
Microarray-based detection and typing of foot-and-mouth disease virus   总被引:8,自引:0,他引:8  
Foot-and-mouth disease virus (FMDV) is the most economically important veterinary pathogen because of its highly infectious nature and the devastating effects the virus has on the livestock industry. Rapid diagnostic methods are needed for detection and typing of FMDV serotypes and differentiation from other viruses causing vesicular diseases. We developed a microarray-based test that uses a FMD DNA chip containing 155 oligonucleotide probes, 35-45 base pair (bp) long, virus-common and serotype-specific, designed from the VP3-VP1-2A region of the genome. A set of two forward primers and one reverse primer were also designed to allow amplification of approximately 1100 bp of target sequences from this region. The amplified target was labelled with Alexa-Fluor 546 dye and applied to the FMD DNA chip. A total of 23 different FMDV strains representing all seven serotypes were detected and typed by the FMD DNA chip. Microarray technology offers a unique capability to identify multiple pathogens in a single chip.  相似文献
3.
口蹄疫病毒基因组结构及其功能   总被引:8,自引:0,他引:8  
口蹄疫病毒的基因组结构和功能是开展口蹄疫其他研究如鉴别诊断、新型疫苗研制和疫源追踪等工作的基础。口蹄疫病毒的基因组由5′UTR、ORF和3′UTR及Po ly(A)组成,全长约8 500 nt。VPg可能充当RNA合成引物的作用, 5′UTR 内的Poly(C)和内部核糖体进入位点(internalribosomaentrysite, IRES)是当前研究的热点之一。Poly(C)可能与病毒的感染性有关,IRES 对翻译的起始有重要作用。一般认为Poly(A)越长,病毒的感染性越强。病毒的ORF包括P1、P2、P3基因。L、P2、P3研究的相对较少,其中3A与病毒的宿主嗜性有关,3D为RNA聚合酶,可作为免疫和自然感染动物的鉴别诊断抗原。P1 为口蹄疫病毒的抗原结构,是研究口蹄疫免疫机制和新型疫苗的基础。VP1 可以作为分子流行病学调查,被很多国家所采用。  相似文献
4.
口蹄疫研究进展   总被引:7,自引:0,他引:7  
从口蹄疫的病原学、流行病学、临床症状、诊断、疫苗及免疫预防等多方面全面阐述口蹄疫的特点,特别突出地介绍了国际上(或国际组织)对该病的认识、流行情况以及在诊断和预防等多方面的相关规定,对于全面了解该病有参考价值.  相似文献
5.
RT-PCR快速检测口蹄疫病毒   总被引:6,自引:0,他引:6  
根据口蹄疫病毒VP1基因的序列,设计了1对引物,建立了检测口蹄疫病毒的RT-PCR方法。对FMDV各毒株检测,结果均为阳性,而对猪病毒性疾病相关病毒进行检测,结果均为阴性;检测19份已知阳性样品,检出率100%;与动物接种试验比较,符合率100%,证明该方法特异,与经典方法动物接种试验比较,其灵敏度提高100倍左右;对O3I3株的细胞毒进行检测,其敏感度达10个TCID50。初步结果表明所建立的RT-PCR技术可用于口蹄疫的诊断和流行病学调查。  相似文献
6.
口蹄疫病毒抗原位点研究进展   总被引:5,自引:3,他引:2  
抗原位点是在空间结构上相互独立的蛋白结构域,并决定了蛋白的抗原特性。口蹄疫病毒有A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3型7个血清型,口蹄疫病毒的抗原结构十分复杂,不同的血清型有着不同的抗原位点,并且存在广泛的抗原变异。对口蹄疫病毒的抗原位点进行分析一直是口蹄疫病毒研究领域中的热点,该研究将有助于了解病毒的致病机理和推动新型疫苗的研制。文章对病毒的基本特性、抗原位点的研究方法和研究概况做一综述。  相似文献
7.
将本课题组构建的共表达FMDV衣壳蛋白前体P1—2A基因以及蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1以及共表达P1—2A和猪白介索18基因的重组DNA疫苗(pVIRIL18P1),分别以单独及混合的共3种方式接种牛,然后通过间接ELISA、中和试验和T淋巴细胞增殖试验评价其诱导的特异性体液和细胞免疫水平。结果表明这2种基因工程疫苗均能诱导牛产生特异性的体液及细胞免疫应答。其中重组鸡痘病毒vUTAL3CP1免疫组以及联合免疫组(vUTAL3CP1/pVIRIL18P1,pVIRIL18P1/vUTAL3CP1)诱导的中和抗体滴度分别达到1:64、1:64和1:54,已接近于常规灭活疫苗水平(1:90),而特异性的T淋巴细胞增殖反应则比后者高得多(P〈0.01)。该研究结果为进一步进行免疫攻毒试验,并最终筛选出最佳疫苗和免疫程序奠定了基础。  相似文献
8.
口蹄疫病毒特异性抗体间接ELISA检测方法的建立   总被引:4,自引:2,他引:2  
以Chap10-VP1融合蛋白为包被抗原。建立了检测口蹄疫病毒特异性抗的间接ELISA方法。抗原包被浓度为50μg/L时。血清最佳稀释度为1:400,病毒与阳性血清的反应可被Chap10-VP1蛋白阻断,检测的灵敏度为1:1600。  相似文献
9.
口蹄疫病毒特异性抗体间接ELISA检测方法的建立   总被引:4,自引:2,他引:2  
以Chap10-VP1融合蛋白为包被抗原。建立了检测口蹄疫病毒特异性抗的间接ELISA方法。抗原包被浓度为50μg/L时。血清最佳稀释度为1:400,病毒与阳性血清的反应可被Chap10-VP1蛋白阻断,检测的灵敏度为1:1600。  相似文献
10.
口蹄疫诊断技术研究进展   总被引:4,自引:0,他引:4  
口蹄疫的有效控制关键在于早期检测 ,然而有很多疾病症状与口蹄疫相似 ,仅靠临床症状难以确诊 ,因此必须进行实验室诊断。实验室诊断包括病毒学诊断和血清学诊断。病毒学诊断方法有病毒分离、补体结合试验、酶联免疫吸附试验 ( EL ISA)、RT-PCR以及乳胶凝集试验 ( L AT)。 RT-PCR有待进一步完善 ,而用于野外检测的现场诊断方法已取得可喜进展。血清学诊断包括中和试验和 EL ISA,中和试验已经被 EL ISA方法取代 ,并且通过检测非结构蛋白的抗体可以区分感染动物和免疫动物。更加快速、敏感、可靠以及用于检测潜伏感染的诊断技术将是今后研究的热点。  相似文献
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