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1.
种公猪精液中猪瘟和蓝耳病病毒混合感染的快速检测   总被引:3,自引:3,他引:2  
参考GenBank公布的猪蓝耳病病毒(PRRSV)VL2332株、LV株以及猪瘟兔化弱毒(CSFV)C株的基因序列,各设计合成了一对引物,建立了在相同PCR扩增条件下能同时检测PRRSV和CSFV的RT-PCR方法。对2003~2004年期间江苏、浙江、安徽、福建、上海等省市的17个大中型猪场送检的186份种公猪精液进行了检测,结果18份呈PRRSV阳性,24份呈CSFV阳性,其中有11份为PRRSV和CSFV的混合感染,约占送检精液样品的5.91%。试验结果表明,所建立的RT-PCR方法可用于精液中这2种野毒感染的快速鉴定和分子流行病学调查。  相似文献
2.
猪瘟病毒单克隆抗体及其应用   总被引:1,自引:1,他引:0  
自1985年wenvoort G C等首次应用细胞培养猪瘟病毒接种小鼠的方法建立并制备13株单克隆抗体以来,猪瘟单克隆抗体不仅越来越多的应用于猪瘟的鉴别诊断,而且还用于猪瘟病毒的分子生物学研究.论文对猪瘟病毒的单克隆抗体在猪瘟的鉴别诊断和猪瘟病毒抗原结构蛋白、保护性抗原蛋白、抗原变异以及Ez囊膜糖蛋白抗原表位分析等方面进行综述.  相似文献
3.
为研究猪霍乱沙门菌C500(S.C500)运载猪瘟病毒(CSFV)新型基因疫苗口服免疫家兔的体内免疫应答特点,采用电转化法将CSFV新型基因疫苗转化到S.C500,构建重组工程菌,口服免疫接种家兔,检测CSFV、S.C500特异性抗体;并用猪瘟兔化弱毒疫苗及猪伤寒沙门菌野毒株依次进行攻毒试验。结果显示,成功构建CSFV新型基因疫苗重组菌S.C500/pCB-ME2-IL-15,S.C500/pCC-ME2-IL-15。口服免疫家兔可以诱导产生抗CSFV和S.C500的特异性ELISA抗体,且S.C500/pCC-ME2-IL-15略显优势。经三免后免疫家兔能够部分抵抗猪瘟兔化弱毒疫苗与猪伤寒沙门菌野毒株的攻击。试验提示以S.C500为CSFV新型基因疫苗运载体的猪用重组活菌苗具有可行性。  相似文献
4.
分子克隆猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)四川分离株E2基因,并对其进行原核表达及免疫学活性分析。PK-15细胞培养增殖CSFV四川分离株提取总RNA,运用RT-PCR扩增E 2基因,定向克隆构建原核重组表达载体,转化E.coli Rosetta-gami-TM(DE3) plysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达,Western blotting分析表达蛋白的免疫学活性。试验结果表明,成功克隆了E 2基因,共1119 bp,包含有编码E2蛋白的完整序列,编码373个氨基酸;成功构建了CSFV E2基因完整阅读框、主要抗原区原核表达载体pET-E2(pe)、pET-mE2(pe);蛋白质电泳结果显示,成功表达出约45.32、28.49 ku两目的蛋白,而且表达的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白均能被CSFV阳性血清所识别,具有良好的免疫学反应活性。因此,本试验成功获得CSFV四川分离株E2基因,表达出具有生物学活性的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白。  相似文献
5.
为建立同时检测猪捷申病毒(PTV)、猪瘟病毒(csFv)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRSV)的多重RT-PCR (mRT-PCR)检测方法,本研究以PRRSV ORF6基因、CSFV Ems基因和PTV 5'-UTR基因为对象,建立检测3种病毒的mRT-PCR方法.特异性试验表明,该方法可以特异扩增3种病毒的基因,对大肠杆菌、猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒和猪流感病毒呈阴性反应;敏感性试验表明,PRRSV、CSFV和PTV的最低核酸检出量分别为7.11×102拷贝、7.81×103拷贝和8.43×102拷贝,略低于单一RT-PCR敏感性;应用该方法对69份送检样品进行检测,其中PRRSV、CSFV和PTV单纯感染检出率分别为28.99%、27.54%和56.52%,PRRSV和CSFV混合感染检出率为4.35%,PRRSV和PTV的混合感染检出率为11.59%,CSFV和PTV的混合感染检出率为13.04%,3种病毒的混合感染检出率为8.70%,与单一RT-PCR检测结果符合率为98.6%.本研究建立的检测方法快速简便,可以用于疾病的初步筛选,对临床早期诊断和流行病学调查具有重要意义.  相似文献
6.
用荧光定量RT-PCR方法检测猪瘟病毒   总被引:1,自引:1,他引:4  
为了建立能特异检测不同基因型猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV),同时又能区分其他瘟病毒的基因检测方法,本实验针对CSFV基因组5′端非编码区设计并合成了简并引物和TaqMan探针,在优化反应条件的基础上,成功地建立了特异检测CSFV的荧光定量RT-PCR检测方法。再以已知滴度的CSFV石门株血毒总RNA反转录产物建立标准品,该标准品可以用于定量临床样品中的CSFV滴度,所建立的荧光定量PCR方法可以灵敏地检测出10~(-0.82)个TCID_(50)病毒含量。最后用建立的方法对108份临床样品进行检测并同时进行病毒分离,荧光定量PCR方法检测出73份阳性样品且与病毒分离的符合率为100%,而常规RT-PCR只检测出54份阳性样品,表明本荧光定量RT-PCR法在检测猪瘟病料上具有潜在的应用价值。  相似文献
7.
猪瘟病毒NS3蛋白ATPase/RNA解旋酶功能区的表达与纯化   总被引:1,自引:1,他引:0       下载免费PDF全文
采用RT-PCR 技术扩增出猪瘟病毒石门株和C株NS3基因的ATPase/RNA解旋酶功能区,将其克隆到表达载体pET-28a(+) 中,获得重组质粒pET-NS3SM和pET-NS3C;PCR、酶切鉴定和序列分析结果表明目的基因插入位置、方向和读码框完全正确;0.8 mmol/L IPTG诱导得到分子量为54kD 的目的蛋白,Western blotting结果表明,表达的目的蛋白与猪瘟高免血清没有出现肉眼可见的反应;通过ELISA试验结果表明,重组蛋白能被CSFV 阳性血清识别。  相似文献
8.
猪瘟病毒阳性血清的热加速稳定性试验   总被引:1,自引:1,他引:0  
采用热加速稳定性试验,以ELISA抗体效价为考察指标,确定猪瘟病毒阳性血清的贮存有效期,并拟合抗体效价随时间失活的线性回归方程及不同温度下失活速率常数k值的线性回归方程.从较高温度下的k值估算较低温度下的k值,由k值计算该血清在-20℃下的贮存有效期.结果表明,该血清在-20 ℃下的有效期约为16.8年.1年的持续稳定性监测结果也与热加速稳定性试验预期一致.该阳性血清可以用于制备猪瘟病毒阴性、阳性血清国家参考品.  相似文献
9.
Recently, it has been noted that porcine circovirus type 2 (PCV2) infection adversely affects the protective efficacy of Lapinized Philippines Coronel (LPC) vaccine, an attenuated strain of classical swine fever virus (CSFV), in pigs. In order to investigate the possible mechanisms of the PCV2-derived interference, an in vitro model was established to study the interaction of LPC virus (LPCV) and PCV2 in porcine alveolar macrophages (AMs). The results showed that PCV2 reduced the LPCV infection in AMs and the levels of PCV2-derived interference were dose-dependent. The PCV2-derived interference also reduced the replication level of LPCV in AMs. The full-length PCV2 DNA and its fragment DNA C9 CpG-ODN were involved in the reduction of LPCV infection in AMs, whereas UV-inactivated PCV2 was not. In addition, a moderate negative correlation between the LPCV antigen-containing rate and IFN-γ production was observed, and had a dose-dependent trend with the level of PCV2-inoculation. The results of the present study may partially explain how PCV2 infection interferes with the efficacy of LPC vaccine.  相似文献
10.
CP7_E2alf is a promising marker vaccine candidate against classical swine fever (CSF). To better understand the mechanisms of protection, cytokine and isotype-specific antibody profiles were investigated in CP7_E2alf vaccinated pigs before and after challenge with the highly virulent CSFV strain “Koslov” at 14 days or 6 months post-vaccination. The interference of vaccination with CSFV pathogeny-related cytokine responses, previously described following a moderately virulent challenge, was confirmed. However, the levels of additional cytokines, TNF-α and IL-6, were significantly attenuated by vaccination following highly virulent challenge. This vaccine interference with cytokine response was not dependent on the immunization route or the consequence of competition between vaccine and challenge strain. Interestingly, IFN-γ enhancement and persistent high IgG2 levels suggested an important role of cell-mediated immunity in long-term protection against CSFV induced by CP7_E2alf vaccination. IgA production also revealed a stimulation of mucosal immunity, especially after oral administration of the vaccine.  相似文献
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