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1.
PCR技术检测猪伪狂犬病毒及其潜伏感染部位的研究   总被引:21,自引:1,他引:20  
本研究合成了伪狂犬毒糖蛋白gp50基因引笺,该引物能够扩增糖蛋白gp50基因中434-651之间的217bpDNA片段,该片段含 SalI酶切位点,应用引物对几种不同的伪狂犬病毒株多聚酶链式反应扩增结果全为阳性。  相似文献
2.
检测伪狂犬病病毒双抗体夹心间接ELISA方法的建立与应用   总被引:10,自引:0,他引:10  
以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrV IgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏度达15.6ng(0.156μg/mL),与乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪流感病毒(SIV)等无交叉反应。批间和批内变异系数较小,分别为6.39%和4.1%。应用本方法对人工感染PrV的40日龄仔猪组织进行检测,肺和脑PrV抗原检出率最高,其次是脾、心、肝和肌肉。应用该方法和PrV对159份临床样本进行平行检测,发现二者的符合率可达到77.4%,比PCR敏感。实验结果表明:双抗体夹心间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点,可广泛应用于动物组织中PrV的检测。  相似文献
3.
PCR检测猪伪狂犬病病毒方法的研究   总被引:10,自引:0,他引:10  
根据编码猪伪狂犬病病毒gH基因保守序列,设计合成一对引物,通过改进病毒核酸提取方法和优化PCR反应条件,成功的从猪伪狂犬病毒感染的细胞中扩增出预期的355bp片段。而猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒和正常细胞均未扩增出相应的片段,经NaeⅠ酶切鉴定,证实了该扩增片段的特异性;敏感性实验表明,该体系可检测到0.48Pg的猪伪狂犬病毒DNA。本方法的建立使猪伪狂犬病病毒的检测更为快速、简便、经济、实用。  相似文献
4.
PCR法对伪狂犬病病猪不同部位的检测及敏感性试验   总被引:8,自引:0,他引:8  
应用PCR方法对PRV感染细胞及自然发病猪不同组织样品进行检测,感染细胞毒最低检出是为10^5个TCID50病料组织样最低取样0.1mg时,仍能得阳性结果其敏感性显著高于微量血清中和试验。PRV在自然发病猪体分布很广,脑,三叉神经节(三叉N节)。嗅球,扁桃体,心脏,肝,脾肺,肾均有PRV在存在的,PRV的检出率最高的组织为三叉神经节,其检了率为100%,其它对照病毒及传代细胞PCR反应产物电泳结果  相似文献
5.
将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2 DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒,将其中一株(命名为SA215-B)DNA用BamHI酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功,并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约93ku的融合蛋白,同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性,表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。  相似文献
6.
PRV、PPV双重PCR检测方法的建立及其应用   总被引:8,自引:0,他引:8  
为建立一种能够快速诊断猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的方法,根据GenBank上发表的PRV、PPV核苷酸序列分别设计并合成了两对能特异性扩增PRV、PPV的引物,经过条件优化后,建立检测PRV、PPV的双重PCR方法,扩增两种病毒的片段分别为570bp、748bp。试验证明,该方法具有良好的特异性和敏感性,省时、省力、快速、敏感、高效的特点,为PRV与PPV的快速诊断试剂盒组装及流行病学的研究提供了技术支持。  相似文献
7.
乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒的构建   总被引:7,自引:0,他引:7  
设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将NS1基因插入到中间转移载体pUSK中,获得重组中间转移质粒pUSK—NS1。将pUSK—NS1与伪狂犬病毒Ea株TK/gG/LacZ^ 突变株基因组共转染真核细胞IBRS-2,通过空斑纯化得到了乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒株TK/gG^-/NS^ 1。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的NS1蛋白。该重组病毒可作为猪乙型脑炎和伪狂犬病双价基因工程疫苗用毒株。  相似文献
8.
猪伪狂犬病毒的分子生物学进展   总被引:6,自引:0,他引:6  
猪伪狂犬病一种由猪伪狂犬病毒(Psendorabies virus,PPV)引起的急性传染病,可引发妊母猪流产、死胎以及呼吸道症状.该病在猪群中具传播快、死亡率高、流行范围广、传播途径多、病原体顽固等特点,每年给养猪业造成了巨大损失.  相似文献
9.
10.
猪伪狂犬病病毒桂W株的分离鉴定   总被引:6,自引:0,他引:6  
从南宁市霜猪场采集的发病仔猪大脑和内脏病料中分离到一株病毒。病毒接种家兔后引起典型的伪犬病症状而死。病毒接种RK细胞出现典型的细胞病变,感染细胞形成合肥体。毒价(TCID50)为10^7.86/0.1ml。病毒能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和,血清中和效价为1:107。电镜观察到圆形、有囊膜、直径80~120nm大小的病毒颗粒。PCR反应可扩增特异性217bpDNA片段。证实分离的病毒株为伪犬病病  相似文献
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