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1.
一种新发现的鱼类病毒KHV在国外的流行和研究现状   总被引:5,自引:0,他引:5  
1锦鲤疱疹病毒 (KHV)简介锦鲤疱疹病毒 (KoiHerpesVirusKHV)是近三年做为锦鲤的致死病因而被鉴定发现的 ,是一种新发现的烈性水生动物疱疹病毒。在英国、以色列、美国和欧洲等国家和地区都曾暴发过这种病毒。2001年夏末 ,设在英国的国际观赏鱼贸易协会 (OATA)报道 :这种专门危害锦鲤等鱼类的病毒感染鱼后 ,超过50%的病例表现出发病快和死亡率高的特点。然而 ,只有极少数研究机构在研究该病毒及所致疾病。目前 ,在我国尚未发现有关报道。2KHV病毒的生物学特点及其所致疾病的临床症状2.1KHV病毒的生…  相似文献
2.
新城疫病毒通用型实时RT-PCR检测方法的建立与应用   总被引:3,自引:0,他引:3  
采用TaqMan方法,经引物和探针的设计、筛选及反应条件优化,研究了检测活禽和禽产品中新城疫病毒的通用型实时RT-PCR(RRT-PCR)方法。结果显示,对12株分别为速发型、中发型、缓发型和疫苗株新城疫病毒的尿囊液倍比稀释液的检测极限在10-5~10-7之间;建立的方法与常见禽类病毒无交叉反应,特异性良好;在检测人工感染肉鸡的脏器组织、咽喉、泄殖腔拭子中病毒的灵敏度同鸡胚分离试验基本一致;弱毒疫苗免疫鸡群在免疫后14 d,应用本方法不能从咽喉、泄殖腔拭子中检测到病毒;临床样品检测表明,该方法不仅可以检出中强毒力新城疫毒株,也可检出缓发型野毒株和疫苗毒株。  相似文献
3.
采用RT-PCR扩增我国H5N1禽流感病毒NP基因,亚克隆于含有组氨酸标签的原核表达载体中,在大肠杆菌中高效表达。所表达的蛋白经Ni 亲和色谱法纯化,SDS-PAGE电泳分析其纯度达95%以上,Western-Blotting鉴定具有良好的免疫反应活性。利用纯化蛋白作为诊断用抗原,建立了禽流感的琼脂扩散诊断方法。所建立的诊断方法在对禽流感强阳性和弱阳性血清的检测中,均出现了致密而清晰的沉淀线,且沉淀线的亮度与所加入的重组抗原的量成正比;而对鸡新城疫、鸡传染性法式囊等8种禽疫病阳性血清和SPF鸡血清的检测中,无沉淀线出现且没有交叉反应;利用该方法对30份进出口送检样品进行检测,其结果与国内同类试剂盒相符性达100%。实验室和现地使用证明,利用纯化的重组NP抗原所建立的方法简便、可靠、易于标准化,可为我国禽流感的兽医诊断、流行病学普查和出入境检验检疫提供有力的保障。  相似文献
4.
荧光RT-PCR检测活禽和禽产品中新城疫病毒中强毒株的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
本研究中,采用TaqMan方法,根据新城疫病毒F基因核苷酸序列,设计合成多对引物,在上游引物和下游引物之间设计多条探针,通过对引物、探针的筛选,反应条件的选择和优化,建立了检测活禽和禽产品中中强毒力新城疫病毒的荧光RT-PCR方法。经对10株倍比稀释的中强毒力新城疫病毒的尿囊液进行检测后,表明所建立的荧光RT-PCR方法的检测极限在10^-5~10^-7”之间,略低于鸡胚病毒分离方法(10^-8~10^-9);对收集到的所有新城疫病毒株和常见禽类病毒(包括禽流感病毒H5、H9亚型、IBDV、IBV、KIBV、CAAV、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒)进行检测,结果表明建立的方法不能检出其他的常见禽类病毒,特异性良好。进一步用建立的荧光RT-PCR检测人工感染SPF肉鸡的组织脏器、咽喉及泄殖腔拭子及临床样品中的中强毒力的新城疫病毒,并同鸡胚分离结果比较,结果表明荧光RT-PCR的敏感性同鸡胚分离试验基本一致。由于荧光RT-PCR方法快速,从处理样品开始到出结果只需不到4小时,而且检测样品量大,这就充分显示了其快速、敏感、特异的优势。在强调口岸快速通关的今天,该方法的建立无疑为活禽或禽产品的快速检验检疫提供了有效的手段。  相似文献
5.
荧光RT-PCR检测活禽和禽产品中新城疫病毒中强毒株的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
本研究中,采用TaqMan方法,根据新城疫病毒F基因核苷酸序列,设计合成多对引物,在上游引物和下游引物之间设计多条探针,通过对引物、探针的筛选,反应条件的选择和优化,建立了检测活禽和禽产品中中强毒力新城疫病毒的荧光RT-PCR方法。经对10株倍比稀释的中强毒力新城疫病毒的尿囊液进行检测后,表明所建立的荧光RT-PCR方法的检测极限在10^-5~10^-7”之间,略低于鸡胚病毒分离方法(10^-8~10^-9);对收集到的所有新城疫病毒株和常见禽类病毒(包括禽流感病毒H5、H9亚型、IBDV、IBV、KIBV、CAAV、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒)进行检测,结果表明建立的方法不能检出其他的常见禽类病毒,特异性良好。进一步用建立的荧光RT-PCR检测人工感染SPF肉鸡的组织脏器、咽喉及泄殖腔拭子及临床样品中的中强毒力的新城疫病毒,并同鸡胚分离结果比较,结果表明荧光RT-PCR的敏感性同鸡胚分离试验基本一致。由于荧光RT-PCR方法快速,从处理样品开始到出结果只需不到4小时,而且检测样品量大,这就充分显示了其快速、敏感、特异的优势。在强调口岸快速通关的今天,该方法的建立无疑为活禽或禽产品的快速检验检疫提供了有效的手段。  相似文献
6.
采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒(AHSV)含有绝大多数线性抗原表位的VP7编码基因片段,克隆于pET-30a构建重组质粒pET-30a-VP7,将pET-30a—VP7转化BL21(DE3),经1.0mmol/LIPTG诱导,外源基因以包涵体的形式获得高效表达。通过Dot-EuSA以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测AHSV抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳包被浓度为0.25μg/mL,血清的最佳稀释度为1:40,待检血清阳性临界值初步定为0.25。用此方法和商品化ELISA试剂盒检测了184份血清样品,结果完全符合。  相似文献
7.
口蹄疫病毒非结构蛋白基因的克隆表达及免疫活性的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
从口蹄疫病毒(FMDV)细胞培养物中提取总RNA,设计简并引物通过RT-PCR获得了完整的3ABC基因片段,将3AB基因和部分3ABC基因分别克隆到原核表达载体上构建重组表达质粒pET-3AB和pET-3ABC,然后转化BL21(DE3)plysS进行诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定.结果表明,3AB基因和3ABC基因可以在大肠埃希菌中高效表达,且表达产物能够与FMDV阳性血清产生免疫反应.进一步摸索重组蛋白的纯化条件,制备纯化蛋白,以纯化的表达产物为包被抗原进行间接ELISA检测,结果表明,重组蛋白具有特异的免疫学活性,能够用于鉴别FMDV感染动物血清和免疫动物血清.  相似文献
8.
基于VP1重组蛋白的口蹄疫病毒O型间接ELISA检测技术   总被引:1,自引:0,他引:1  
采用RT-PCR方法扩增O型口蹄疫病毒VP1基因片段,将其克隆于pET-32a.将重组质粒转化宿主菌Rosetta,经1.0 mmol/L IPTG诱导,外源基因获高效表达.通过Western-blot以及ELISA试验证明,重组VP1蛋白与标准阳性血清发生反应.以纯化的VP1蛋白作为检测抗原包被酶标板建立了检测口蹄疫病毒O型抗体的间接ELISA方法.对355份临床血清样品的检测结果显示,建立的方法与口蹄疫病毒O型液相阻断试剂盒符合率为98.87%.表明建立的方法能够用于口蹄疫病毒O型抗体的快速分型检测.  相似文献
9.
牛肠道病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
为建立快速、准确地检测牛肠道病毒(BEV)及对北京周边地区牛群中BEV感染情况进行检测,本研究通过设计合成扩增BEV 5'UTR序列的引物及探针建立了检测BEV的通用型TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测方法并对反应条件进行了优化.该方法对BEV的最小检测量为0.1 TCID50/0.1mL,敏感性比病毒分离法高10倍.而且该方法对其他牛相关病毒均无交叉反应.用3批试剂对3个稀释度的BEV培养物进行批内和批间重复性试验,其变异系数均小于1.1%,表明该方法具有良好的重复性.采用该方法对北京周边地区牛群采集的852份临床样品进行检测,并与病毒分离方法比较,两种方法检测结果完全一致.因此,本研究所建立的BEVTaqMan RT-PCR检测方法具有快速、准确、特异性强、敏感性高、重复性好的优点,为国内BEV的检测提供了有力的技术支持.本研究首次通过病毒核酸检测证明了我国部分地区的牛群中存在BEV感染.  相似文献
10.
国际间实验室禽流感能力验证样品制备技术的研究与应用   总被引:1,自引:1,他引:0  
通过对禽流感病毒基因序列的比较分析,在其血凝素(HA)基因保守区,设计引物,通过基因克隆,体外转录等技术,制备出病毒HA基因的RNA片段,并对体外转录的RNA进行了定量、稀释,以作为用于国际间实验室禽流感能力验证的样品,并建立了绝对定量实时荧光RT-PCR检测方法。样品的均匀性和稳定性实验结果证明了样品制备技术的可行性,并为我国首次成功组织实施国际间实验室禽流感能力验证计划奠定了基础。  相似文献
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