家畜繁殖生物技术研究现状及趋势

牛胚胎移植技术已趋于成熟。我国新疆牧科院用一步细管法移植牛冻胚受胎率达41%;牛和羊鲜胚四分胚移植也产下1头犊牛和6只羔羊。家畜体外受精,因卵子体外成熟和受精卵体外培养尚不过关,目前仍停留在实验室阶段。胚胎性别鉴定,1990年Koopman发现单拷贝基因,该基因是Y染色体的性决定区,命名为SRY,可利用PCR技术制成雄性特异DNA探针盒,进行马、牛、羊、猪早期胚胎性别鉴定。北京农学院等单位用PCR扩增牛SRY序列进行奶牛胚胎性别鉴定准确率达100%。英、日、法等国已获得牛胚胎细胞核移植后代;我国也获得1只核移植兔。北农大和新疆牧科院合作以绵羊精子为载体导入牛生长激素基因rMTbGH DNA成功,外源基因整合率为3%。     

微卫星DNA在动物亲子鉴定中的应用及研究进展

本文概述了微卫星DNA进行亲子鉴定的基本原理与方法,将其用于亲子鉴定的优点以及研究进展,最后对未来的应用进行了展望。     

番茄匍柄霉叶斑病拮抗细菌的筛选与鉴定

应用平板对峙法从连作多年的番茄根际土样中筛选得到对番茄匍柄霉叶斑病具有较强拮抗活性的细菌菌株ZF161,该菌株对番茄匍柄霉的平板抑制率达到70.51%。离体叶片试验显示,菌株ZF161对番茄匍柄霉叶斑病防治效果达到69.83%。通过菌落形态观察、生理生化特性、Biolog测定和多基因系统发育树综合分析,鉴定菌株ZF161为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。番茄盆栽试验结果表明,菌株ZF161对番茄匍柄霉叶斑病的防治效果达到63.27%。进一步平板对峙抑菌谱试验结果显示,菌株ZF161对其他7种病原真菌也具有较好的抑制效果。上述结果说明,菌株ZF161对番茄匍柄霉叶斑病具有良好的防治效果,且对多种病原真菌也具有抑制作用,具有开发应用的潜力。     

桃红叶植原体检测及鉴定

对表现红叶的桃植株进行植原体16SrRNA基因PCR扩增,得到1.2kb的特异片段.将此片段与pGEM T Easy载体连接并转化到大肠杆茵DH5α感受态细胞中.通过酶切、PCR鉴定,对筛选得到的重组阳性克隆进行序列测定及同源性比较分析,确定该株系属于翠菊黄化植原体组(Aster yellows group,16SrI).在国内首次报道了翠菊黄化组中的植原体侵染桃树.     

灵芝提取物对人肝癌SMMC─7721细胞DNA合成的影响

本文以人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞为材料，对水溶性灵芝提取物（ＥＧＬ）抗癌作用机理进行了研究。结果表明，ＥＧＬ能明显抑制ＳＭＭＣ－７７２１细胞的ＤＮＡ合成：ＥＧＬ在５０ｕｇ／ｍｌ到３００ｕｇ／ｍｌ范围表现出明显的剂量效应；ＥＧＬ最小有效作用剂量为１００ｕｇ／ｍｌ，最大有效作用剂量为３００ｕｇ／ｍｌ。结果提示ＥＧＬ的抗癌机理主要是通过抑制癌细胞ＤＮＡ合成而起作用的。     

利用流式细胞术鉴定桦木染色体倍性和DNA含量

基于流式细胞术（FCM）研究体系,构建能快速、准确鉴定桦木属植物倍性和测定DNA含量的研究体系,是测定不同桦木属植物倍性与基因组大小的有效方法。使用流式细胞术检测7种桦树属类物种,以物种不同生长状态（嫩叶、幼叶、成熟叶）为实验材料,不同存储方式（常温、冷藏和聚乙烯吡咯烷酮保存PVP）进行实验处理,对9种常用的裂解液进行筛选与优化。结果表明：桦木属植物DNA含量测定中,新鲜幼叶以1% PVP浸泡常温保存,并使用MgSO₄裂解液制备细胞核悬浮液上机效果最佳;桦木属植物中,基因组倍性依次为黑桦（(2.09 ± 0.04) Gb,8倍体） > 坚桦（(1.53 ± 0.08) Gb,6倍体） > 光皮桦（(0.87 ± 0.05) Gb,4倍体）=岳桦（(0.80 ± 0.07) Gb,4倍体） > 垂枝桦（(0.46 ± 0.03) Gb,2倍体）=河桦（(0.51 ± 0.01) Gb,2倍体）。因此,桦木属植物DNA倍性和DNA含量可以通过FCM研究体系进行测定,且3倍体（(0.66 ± 0.02) Gb）子代的鉴定结果表明光皮桦与河桦之间不存在生殖隔离。     

凡纳滨对虾微卫星DNA的筛选及其特性的研究

采用小片段克隆法构建凡纳滨对虾的部分基因文库,用放射性同位素[y-^12P]ATP标记的（CA）15（AT）12（AG）12、（AAT）8、（AAG）8做探针筛选阳性克隆。共获得微卫星序列152个,其中二核苷酸为核心的微卫星序列：（AG）a〉（AC）a〉（AT）a,三核苷酸为核心的微卫星序列：（AAT）a〉（CAT）a〉（AAG）a应用引物设计软件primer3．0设计引物105对。选择合成10对理论上易出现影子带的引物,筛选后用31个凡纳滨对虾个体对这些引物进行了评估,结果10对引物中有8对引物能扩增出谱带,其中1对扩增产物出现影子带,1对扩增产物为单态．有6对扩增产物出现多态。     

表观遗传学的分子机制及其研究进展

表观遗传学(epigenetics)是指不涉及DNA序列改变、可以通过有丝分裂和减数分裂进行遗传的基因表达变化的遗传学分支领域。目前研究主要集中在DNA甲基化、组蛋白密码、染色质重塑和非编码RNA调控等方面。副突变、亲代基因印记、性别相关性基因剂量补偿效应和转基因沉默等都是典型的表观遗传现象。相关研究有利于揭示生物生长发育、多倍体植物基因组进化、杂种优势以及人类疾病等许多生命现象的本质。     

江苏省小麦禾谷孢囊线虫群体核糖体DNA-ITS区序列分析

对采集自江苏省徐州、宿迁、连云港和盐城4个地区的15个小麦禾谷孢囊线虫群体进行核糖体DNA-ITS区的RFLP分析。结果表明:测定的所有群体均具有相同的酶切图谱,既具有与国外B型群体(印度群体)相同的AluⅠ和RsaⅠ酶切图谱,同时也具有中国群体独特的HinfⅠ和Tru9Ⅰ酶切图谱(C型)。采用Neighbor-Joining法(MEGA4.0)构建的ITS序列系统进化树显示:所有15个江苏群体均聚在小麦禾谷孢囊线虫组(Heterodera avenae group)下的小麦禾谷孢囊线虫复合种群(H.avenae complex)分支内,且多数江苏群体与草地孢囊线虫(H.pratensis)德国和俄罗斯群体的遗传距离相对较近。通过江苏群体与其他近源群体的ITS序列分析比较,河南郑州群体与澳州孢囊线虫(H.australis)的遗传距离较近,青海群体和河南郑州群体在分子遗传水平上具有明显的地域性,而江苏省和我国其他省份的小麦孢囊线虫群体具有丰富的遗传多样性。     

NaCl胁迫对三种胡颓子属植物幼苗活性氧清除酶与渗透调节物质含量的影响

为研究胡颓子属植物的耐盐性,以三种胡颓子属植物一年生幼苗为材料,在不同浓度的NaCl胁迫(0,50、100、200、300和350 mmol/L)处理30 d后,测定其叶片的膜脂过氧化产物、活性氧清除酶活性和渗透调节物质含量的变化.结果显示,在NaCl胁迫下,三种胡颓子属植物叶片的膜透性、MDA和H2O2含量均随NaCl浓度的升高而增加,表明NaCl胁迫致使胡颓子属植物膜脂过氧化程度加强,细胞膜稳定性受到破坏,其中东方沙枣的膜透性和MDA含量增加幅度较大,受到的盐害较大.而三种胡颓子属植物经受30 d盐胁迫后,其叶片中活性氧清除酶的活性变化似乎存在着不同的特性,在盐胁迫下除东方沙枣叶片SOD活性比对照低以外,其余的活性氧清除酶的活性始终高于对照,但变化幅度不一致;脯氨酸和可溶性糖含量随着胁迫程度的加重而不断增加,其中尖果沙枣叶片中的脯氨酸含量成倍增长,且可溶性蛋白含量缓慢增加,而大果沙枣与东方沙枣叶片可溶性蛋白含量先减后增的趋势.总之,NaCl胁迫下三种胡颓子属植物幼苗各项指标变化幅度的综合比较,尖果沙枣相对大果沙枣和东方沙枣显示较强的耐盐能力.