栉江珧研究现状及开发利用前景

对广泛分布于温、热带近海海域的大型深水贝类栉江珧的分类地位和地理分布作了介绍，并就栉江珧栖息状况，对水温、盐度、pH、溶解氧等各种环境因子适应性的生态习性作了详细描述。论述了水温对栉江珧的生长、性腺周期发育的影响。对栉江珧人工繁育过程中的亲贝暂养、催产及幼体培育的技术和养殖现状进行了总结。简要概述了江珧科物种同工酶的研究进展，并对栉江珧资源保护及可持续利用和今后研究方向作了探讨。     

栉江珧(Atrina pectinata)EST-SSR标记的开发与应用

本研究以前期获得的栉江珧(Atrina pectinata)转录组数据为基础,筛选获得10550条微卫星标记(SSR),检出率为8.2％,平均9.01 kb出现1个SSR位点.设计并合成120对SSR引物,筛选得到36对能够稳定扩增的引物,并利用已获得的36对SSR引物对青岛海区栉江珧进行了群体遗传多样性分析.结果显示,12对引物的扩增片段表现出多态性,共产生42个等位基因,平均每个位点产生3.5个等位基因,平均观测杂合度(Ho)、平均期望杂合度(He)和平均多态信息含量(PIC)分别为0.417、0.604和0.526,表明青岛海区栉江珧群体的遗传多样性较高.本研究获得的EST-SSR标记和群体遗传信息为栉江珧的种质资源保护提供了重要的参考资料.     

不同铵离子浓度与pH人工海水对栉江瑶精子激活效果的比较

栉江瑶(Atrina pectinata)为我国重要的海洋经济双壳贝类,近年来,其养殖生产活动备受养殖企业关注,为发展和优化其人工繁殖技术,本研究探究了人工海水中铵离子浓度和pH的变化对栉江瑶新鲜精子游泳运动的激活作用,定量描述了高度活化状态下精子曲线运动速率(VCL)、直线运动速率(VSL)、平均路径运动速率(VAP)和鞭毛摆动频率(BCF)的运动学特征,并对精子ATP含量、ATP酶与超氧化物歧化酶(SOD)活性进行了记录。结果显示,简单提高海水pH可略微提高栉江瑶精子运动率,但无法使精子进入高度活化状态;含有铵离子的碱化海水可有效激发精子游泳运动,3 mmol/L氨海水激活效果最佳。经3 mmol/L氨海水激活后,精子活力等级(MI)在21 min内一直保持在≥4的状态,在激活的前3 min内精子运动率都在80%以上,VCL>56 μm/s,VSL>17 μm/s,VAP>30 μm/s,BCF>6 Hz。精子ATP含量在激活5 min后降低至初始含量的30.29% [(128.80± 66.92) μmol/g prot],随后,无显著变化(P>0.05)。精子Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性在运动过程中较为稳定,其中,Na+-K+-ATP酶活性较低[(0.62±0.03) U/mg prot],Ca2+-Mg2+-ATP酶活性较高[(6.08± 0.04) U/mg prot]。精子SOD活性在15 min内逐步降低至[(1.23±0.73) U/mg prot],随后维持稳定。本研究可为栉江瑶精子激活机制深入研究提供基础,助力发展栉江瑶人工繁育技术。     

栉江珧和近江牡蛎的精子超低温冷冻保存

栉江珧(Atrina pectinata)和近江牡蛎(Crassostrea rivularis)是我国重要的海产经济贝类,建立其精子冷冻保存技术及精子冷冻库,对种质资源的保护和遗传育种具有重要意义.本研究对其精子冷冻保存过程中冷冻剂种类和浓度的选择、冷冻程序、平衡时间、保存体积、精液稀释方式、保存时间等多个影响因素进行了比较筛选,并利用显微镜直接检测和曙红Y(eosin Y)染色检测结合的方式检验精子存活率.结果表明,二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)作为抗冻剂的保存效果要明显优于甘油(glycerol,Gly),终浓度为8％～10％的二甲亚砜保存效果最好,其栉江珧和近江牡蛎精子活率均可达60％以上,而甘油保护下精子活率小于40％.精液的稀释方式采用将抗冻液等分为3份,依次与精液混合,每次间隔8 min,整个过程约30 min;此种精液稀释方式与一次性混合方式相比,精子活率可提高约30％.稀释后精液需要在4℃下平衡15～25 min,平衡样品与直接冷冻样品相比,精子活率提高约50％.精液降温程序为在样品投入液氮前,于液氮面以上15 cm处停留5 min,5 cm处停留10 min,精子活率可达60％以上;而未经此降温程序直接投入液氮中的样品精子活率接近0.与此降温程序相对应的样品冷冻体积在1.0～1.4 mL范围内为宜.冷冻180 d内复苏的精子活率由90％左右(鲜精)下降至60％左右,180 d后精子活率下降至56％左右.研究结果为栉江珧和近江牡蛎精子超低温冷冻保存、双壳类种质保护和遗传育种提供了理论和技术依据.     

Use of marine by‐product meals in diets for juvenile longfin yellowtail Seriola rivoliana

A 60‐day feeding trial to determine the nutritional value of marine by‐product meals in diets for longfin yellowtail Seriola rivoliana juveniles (48.1 ± 0.6 g initial weight) was conducted. Five diets were evaluated: a reference diet (RD; 500 g kg^?1 CP, 130 g kg^?1 L), containing 500 g kg^?1 of fish meal (FM); three experimental diets with 125 g kg^?1 of shrimp head (SM), Catarina scallop viscera (CM) or Pen shell viscera (PM) meals; and one diet (SCP) containing 125 g kg^?1 of each of the experimental meals, to partially replace FM. Survival was not significantly affected by any treatment. Individual weight gain per day was high for the PM (5.3 ± 0.51 g d^?1) and SM (4.7 ± 0.32 g d^?1) diets, being significantly higher than the RD (3.5 ± 0.23 g d^?1) and the other treatments (<1.2 g d^?1). Feed intake was high in PM and SM diets, and very low in SCP and CM diets. Biochemical and haematological parameters were similar among treatments RD, PM and SM, while fish fed CM and SCP exhibited lower levels of total protein, cholesterol, haematocrit and haemoglobin. The results indicate that SM or PM can be used to partially replace FM in diets for yellowtail juveniles.     

人工诱导栉江珧雌核发育的初步研究

利用紫外线诱导进行栉江珧(Atrina pectinata)雌核发育单倍体的研究,用强度为2 561μW/(cm2.s)的紫外线(254nm)照射不同时间的精子与正常卵子受精展开实验。结果发现随照射时间的增加,卵裂率、早期胚胎存活率和D型幼虫发生率总体呈下降趋势,遗传失活的精子与正常卵子受精后其胚胎发育至D型幼虫前期停止。经紫外线照射的精子受精后所产生的单倍体胚胎发育速度慢于正常受精所产生的二倍体胚胎,各照射组均出现非整倍体。40 s照射组中卵裂率达到51.2%,D型幼虫发生率为0,单倍体率最高,达到36.8%,出现“Hertwig效应”。由于雌核发育单倍体的有效诱导既需要精子遗传物质失活、又需要保证较高的卵裂率,因而在强度2 561μW/(cm2.s)的紫外线下照射40 s是获得栉江珧雌核发育单倍体的最佳条件。     

Amino Acid Profiles and Biopotentiality of Hydrolysates Obtained from Comb Penshell (Atrina pectinata) Viscera Using Subcritical Water Hydrolysis

The recovery of amino acids and other important bioactive compounds from the comb penshell (Atrina pectinata) using subcritical water hydrolysis was performed. A wide range of extraction temperatures from 140 to 290 °C was used to evaluate the release of proteins and amino acids. The amount of crude protein was the highest (36.14 ± 1.39 mg bovine serum albumin/g) at 200 °C, whereas a further increase in temperature showed the degradation of the crude protein content. The highest amount of amino acids (74.80 mg/g) was at 230 °C, indicating that the temperature range of 170–230 °C is suitable for the extraction of protein-rich compounds using subcritical water hydrolysis. Molecular weights of the peptides obtained from comb penshell viscera decreased with the increasing temperature. SDS-PAGE revealed that the molecular weight of peptides present in the hydrolysates above the 200 °C extraction temperature was ≤ 1000 Da. Radical scavenging activities were analyzed to evaluate the antioxidant activities of the hydrolysates. A. pectinata hydrolysates also showed a particularly good antihypertensive activity, proving that this raw material can be an effective source of amino acids and marine bioactive peptides.     

栉江珧同工酶多态性的分析

采用垂直板聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳对栉江珧(Atrina pectinata Linnaeus)消化盲囊进行了5种酶(SOD、EST、MDH、ME、LDH)的同工酶分析。结果表明不同个体的同工酶表达呈现多态现象,个体间酶带带型既有相一致的共同特征谱带,又有较多的变异．5种酶均可把样品大致区分为差异明显的2种或3种类型,而且酶谱类型与形态类型基本对应,同工酶表达上的多样性表明栉江珧种内在生化遗传上存在较大的变异,具有较丰富的遗传多态性。     

栉江珧(Atrina pectinata)催产方法及幼虫培养条件

为探究江珧亲贝的最佳催产方法及减少工厂化育苗过程中栉江珧幼虫上浮粘连现象,分别研究了不同催产方法对受精率和胚胎发育的效果,不同培育密度和培育方式对幼虫生长发育的影响。结果显示,阴干4 h后用升温3℃的次氯酸钠中和海水,可诱导亲贝大量排放精卵。并且对卵子受精及胚胎发育影响较小。幼虫培养实验结果显示,幼虫最适培育密度为1 ind/ml,在降低幼虫培育密度的同时,在培育池内安装造浪泵,使培育水体流动起来,能够有效减少幼虫的相互粘连提高幼虫的成活率。     

栉江珧染色体制备及核型分析

为了解栉江珧(Atrina pectinata)的细胞遗传学特征,取暂养促熟的雌雄亲贝共12枚为研究对象,通过调节暂养水温、采用鳃丝及鳃丝对应部位创面的愈合增生组织为染色体制备材料来改良染色体制备方法,采用常规的热滴片法制备出大量形态好且分散均匀的染色体标本,并进行染色体核型分析。结果显示,适度调节暂养水温和给鳃组织制造微创并以创面愈合增生组织为染色体制备材料均能有效增加组织细胞的分裂增生能力,为染色体制备提供了充足的材料;栉江珧二倍体染色体数目2n=34,雄性染色体组型为2n=8m+10sm+16st,雌性染色体组型为2n=6m+10sm+18st,染色体组型中,雌雄两性中期分裂相的染色体排序基本一致,都有1对染色体相对长度明显大于其他染色体;两性染色体组型有两处明显不同,其一,雄性第14对染色体为中着丝粒染色体,而雌性相对应的是亚端着丝粒染色体;其二,雄性栉江珧相对长度最大的染色体存在异形情形,雌性最大的染色体对则为同形,基本确定栉江珧存在初级的性染色体分化,属于XX/XY型性别决定方式。大型贝类染色体制备方法的改进将有助于丰富贝类细胞遗传学和分类学的研究内容。