不同蛋白源对生长大鼠骨骼肌蛋白质代谢相关基因表达的影响

本试验旨在研究酪蛋白(CAS)、大豆分离蛋白(SPI)和玉米醇溶蛋白(ZEIN)对大鼠骨骼肌蛋白质代谢基因表达的影响。试验选用60只生长大鼠进行饲养试验,按照体重一致原则随机分为3个处理,每个处理20只大鼠,饲喂等能等氮半纯合日粮。结果表明:玉米醇溶蛋白(ZEIN)日粮使试鼠腓肠肌具有较高的mTOR、RhebmR NA水平及磷酸化mTOR蛋白量(P<0.01)和较高的Atrogin1(MAFbx)、MuR F1、pUb和FoxO mR NA表达量(P<0.05或P<0.01)。本研究揭示出蛋白源对蛋白质代谢基因表达产生的差异,可能主要由饲料蛋白质氨基酸组成模式不同所体现,尤其表现为亮氨酸(Leu)对组织蛋白质代谢进行调控。可见,蛋白质合成代谢调控与mTOR途径有关,蛋白质分解代谢与泛素-蛋白酶蛋白降解途径(UPP)有关。     

泛素-蛋白酶体通路在神经系统中的生物学功能

概述了泛素一蛋白酶体通路（ubiquitin—proteasome system，UPS）的组成及其作用机理，着重阐述了其在神经系统中的生物学功能，主要包括UPS在神经元发育、突触的功能、突触的可塑性以及神经性疾病等方面的研究现状，为进一步揭示神经元的生长发育机理以及神经性疾病的研究提供参考。     

猪ASC及Ub基因的克隆及真核表达重组质粒的构建

炎症小体不仅参与机体的天然免疫反应,同时还参与机体抗病毒等多种宿主防御反应。在多种疾病相关信号通路反应中都伴随着蛋白质的泛素化修饰。NOD样受体(NLRs)介导的炎症小体信号通路中,凋亡相关点状样蛋白(ASC)是关键的接头蛋白。为了解猪瘟病毒(CSFV)感染对ASC泛素化水平的影响,通过RT-PCR从猪血管内皮细胞(ECs)中扩增获得ASC和泛素(Ub)的全长cDNA双链片段,连接至克隆载体pMD-18T,获得重组克隆质粒pMD-ASC和pMD-Ub。双酶切pMD-ASC获得ASC目的序列,连接至pcDNA3.1-Flag,双酶切pMD-Ub获得Ub目的序列,连接至pcDNA3.0-HA,获得重组表达质粒pcDNA3.1-Flag-ASC和pcDNA3.0-HA-Ub。将pcDNA3.1-Flag-ASC和pcDNA3.0-HA-Ub转染ECs,Western blot在蛋白水平检测ASC和Ub的表达。结果表明,成功构建了带有Flag标签的ASC真核表达质粒和带有HA标签的Ub真核表达质粒,且在ECs中获得高效表达,为进一步体外研究CSFV调控猪血管内皮细胞ASC泛素化的机制提供了实验基础。     

Smad泛素化调节因子2siRNA的筛选及转染原代肾小管上皮细胞条件的优化简

试验旨在优化Smad泛素化调节因子2（Smurf2） siRNA最佳转染条件,筛选最佳siRNA干扰片段,进而实现对Smurf2基因的瞬时沉默,为研究Smurf2基因在马兜铃酸肾病（aristolochic acid nephrohathy,AAN）中的作用奠定基础。本研究通过培养小鼠原代肾小管上皮细胞（renal tubular epithelial cells,RTECs）,并以脂质体Lipofectamine^TM 2000为转染介质,将Smurf2 siRNA转染入RTECs;通过观察绿色荧光的表达量及Real-time PCR反应优化转染条件,转染后Real-time PCR检测mRNA表达抑制率。CCK-8法检测Smurf2 siRNA复合物对RTECs活性的影响;同时,用Real-time PCR和Western blotting检测不同位点Smurf2 siRNA对Smurf2 表达的影响。结果显示,当Lipofectamine ^TM 2000与siRNA比例为1.5 μL∶30 pmol时,转染效率最高,为70%～80%;Smurf2-619 siRNA干扰效果最明显;与正常组相比,转染siRNA组的Smurf2蛋白表达水平显著下降（P<0.05）。最终确定了Smurf2 siRNA最佳转染条件,其中Smurf2-619 siRNA对Smurf2 表达的抑制率最高。     

泛素-蛋白酶体系统对精子获能的作用

泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome system,UPS)参与了许多精子相关的获能和受精过程,并在获能和受精中起到一定作用.本文综述了精子获能过程中UPS的参与以及发生的相关变化,包括一系列已知的蛋白酶体相关的精子蛋白,并讨论了这些蛋白质与蛋白酶体之间的关系.蛋白酶体抑制剂能显著改变获能并阻止...     

桑树多聚泛素基因的克隆及序列分析

将蒙古桑于-3℃诱导48 h后,提取幼茎RNA反转录合成cDNA(第一链),以cDNA为模板,利用RT-PCR技术克隆桑树的泛素基因(mUb)。研究结果表明:克隆片段序列为泛素基因的阅读框架,其中有2个起始密码子(ATG)和1个终止密码子(TAA),长度为459个碱基;序列与菠萝、三叶胶树、烟草等物种的泛素基因相比较,有84%以上的同源性。进一步分析表明,该基因是桑树的二串泛素基因。该基因已被GenBank收录(登录号DQ104334)。     

基于连接酶检测反应的PRL基因多态与清远麻鸡繁殖性能的相关性研究

旨在建立一个基于聚合酶链反应-连接酶检测反应的基因多态性并行检测系统,探讨鸡催乳素(PRL)基因的多态性,并分析其对优良地方鸡种——清远麻鸡繁殖性能的遗传效应。本研究应用PCR-LDR方法检测PRL8052T/C和PRL8113G/C基因型,并使用SAS软件进行最小二乘分析。结果,在8052T/C位点上,CT基因型个体的52周产蛋数显著高于TT型个体;在8113G/C位点上,CG基因型个体的开产日龄显著低于GG型个体,而其52周龄产蛋数却显著高于GG型个体。2个位点的单倍型对开产日龄和52周产蛋数也存在显著的效应,CTCG型个体具有较早的开产日龄和最高的52周龄产蛋数。结果表明,PRL基因多态性与清远麻鸡繁殖性状有相关关系,PRL 8052T/C和PRL 8113G/C杂合基因型可能是提高鸡繁殖性能的分子标记,利用单倍型进行标记辅助选择可能会获得更大的遗传进展。     

Effects of UCHL1 Inhibition on Porcine Oocyte Matuation in vitro,Zona Pellucida Ubiquitination and Polyspermy

This study was aimed to examine the effects of UCHL1 inhibition on porcine oocyte maturation in vitro, zona pellucida (ZP) ubiquitination and polyspermy. DAPI staining, Hoechst staining and SDS-PAGE methods were used to detect the matuation rate of porcine oocytes in vitro, the level of ubiquitination of zona pellucida (ZP) and polyspermy. The results showed that after different concentrations UCHL1 inhibitor (10, 20, 25 and 30 μmol/L, DMSO and control group) were added into maturation medium for culturing 46 h in vitro, the mature rate of control group was 86.22%, while the maturation rate of 30 μmol/L group was 15.30%, and the maturation rate of every treatment group had significant difference (P<0.05). Western blotting result showed that every group generated ubiquitin markers of ZP were about 61, 80 and 106 ku in different degree. According to the analysis of gray value, the result had significant difference (P<0.05). Conducting fertilization in vitro, the number of sperm adhered on oocyte ZP in control group was the most, the number of sperm running into oocyte was fewer, the number of sperm adhered on oocyte ZP with 30 μmol/L UCHL1 inhibitor was the fewest, and there was almost no sperm running into the oocyte. The results showed that UCHL1 inhibitor had an impact on maturation of porcine oocytes in vitro. With the higher concentration of UCHL1, the lower degree of ZP protein ubiquitinated, UCHL1 could regulate sperm attachment and polyspermy.     

家蚕微孢子虫Ubc9蛋白的基因克隆与功能研究

SUMO(small ubiquitin-like modifier)修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰,Ubc9(ubiquitin-conjugating enzyme)是SUMO修饰靶蛋白过程中唯一的E2结合酶,在SUMO修饰过程中发挥关键作用。本研究克隆了家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)NbUbc9基因的完整开放阅读框。序列分析表明,NbUbc9与所有来源于微孢子虫属(Nosema)的Ubc9聚类在同一大分支上,与同为Nosema属的西方蜜蜂微孢子虫(Nosema apis)和东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)Ubc9同源性最高,说明NbUbc9蛋白在进化上高度保守。qRT-PCR分析表明,家蚕内源性Ubc9的表达量在Nb感染后有所下降,而Nb自身NbUbc9的表达显著增加。对NbUbc9基因RNAi后,Nb基因组DNA的复制水平显著下降,说明NbUbc9在Nb的细胞增殖中起着关键作用。经Pull-down和质谱分析,初步鉴定出有46个家蚕蛋白和8个Nb蛋白可能与NbUbc9相互作用,涉及蛋白质折叠与转运、去泛素化、信号转导等。研究结果为进一步研...