基于 CRISPR/Cas13 的 RNA 编辑系统及其在核酸检测中的应用

核酸检测技术在农业、医药、环境等多个领域均有广泛应用,传统的核酸检测技术存在设备昂贵、操作复杂和灵敏度低等诸多局限性。成簇规律间隔短回文重复序列及其相关基因 13（CRISPR/Cas13）是一种只靶向 RNA 的新型 CRISPR 系统,能在 CRISPR RNA（crRNA）引导下特异切割单链靶 RNA,并有非特异性的“附带切割”能力。基于 CRISPR/Cas13 的核酸检测技术具有灵敏度高、特异性强、操作方便、成本低廉等优点,具有广阔的应用前景。阐述了 CRISPR/Cas13 系统的类别归属及其亚型,组分特征及其分子作用机制,介绍了基于CRISPR/Cas13 系统的特异性高灵敏度酶报告解锁（SHERLOCK）技术的产生和发展,综述了 CRISPR/Cas13 系统在病原体检测、耐药突变检测、物种识别和转基因鉴定方面的应用,同时指出了目前基于 CRISPR/Cas13 核酸检测技术存在的问题,并对未来应用进行了展望。     

通过CRISPR/Cas系统构建miR-17-92基因簇双切载体

通过CRISPR/Cas系统来构建miR-17-92基因簇的双切载体,研究结果表明:在miR-17-92基因簇的序列上找到了2个PAM(TGG和GGG)位点,从而得到了2个原间隔序列,设计合成基因簇双链crRNA;合成该片段并将其插入到p X260载体,使得在同一个载体上虽然只有一个g-RNA,但能够同时切割两个不同的靶位点;将该载体转染NIH3T3细胞验证切割效率,PCR结果和测序结果显示,所构建的CRISPR系统可以对基因片段进行有效切割。