稻瘟菌糖原合成酶激酶MoGSK3功能探究

【目的】观测稻瘟菌（Magnaporthe oryzae）糖原合成酶激酶基因MoGSK3敲除突变体表型,明确MoGSK3在稻瘟菌中的潜在生物学功能,为挖掘防治稻瘟菌新型药剂的潜在靶标提供参考。【方法】基于同源重组原理,用split-PCR方法获得稻瘟菌MoGSK3敲除突变体菌株,将MoGSK3基因克隆到pFL2载体上得到MoGSK3-C融合载体,并将其通过PEG介导的原生质体转化法导入MoGSK3突变体中得到回补菌株。培养观察野生型菌株Guy11、突变体菌株G3-9及回补菌株GC-1的菌落形态和生长状况,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测稻瘟菌产孢相关基因的表达量;观察稻瘟菌不同菌株的分生孢子形态,通过附着胞洋葱表皮穿透试验及接种水稻叶片,研究其致病力;通过KI-I-2染色对野生型菌株Guy11及突变体菌株G3-9分生孢子和附着胞中的糖原运输能力进行观测。【结果】稻瘟菌MoGSK3突变体存在多个表型缺陷,与野生型菌株Guy11相比,MoGSK3突变体菌株G3-9菌落直径显著变小,生长缓慢,产孢相关基因表达量下降且分生孢子出现末端伸长畸形的状态。MoGSK3基因缺失还会导致稻瘟菌菌丝末端无法形成正常的分生孢子梗,附着胞无法穿透洋葱表皮形成侵染菌丝,接种划伤水稻叶片也无法形成褐色病斑。对MoGSK3突变体菌株G3-9分生孢子及附着胞进行糖原染色后发现,突变体菌株G3-9在糖原转运能力方面存在明显缺陷。【结论】MoGSK3基因参与稻瘟菌的生长、分生孢子形成及形态建成、侵染、糖原转运等过程,是稻瘟菌重要的毒力因子。     

副猪嗜血杆菌脂酰辅酶A合成酶活性质谱定性分析

利用已纯化的FadD1和FadD2进行体外重构生化反应,通过质谱分析技术对2个脂酰辅酶A合成酶进行活性定性分析。体外酶活反应产物经UPLC-MS/MS质谱分析显示,全扫描模式,中性丢失扫描模式或多反应监测模式均显示酶活反应产物有脂酰辅酶A的生成,而且FadD1对脂酰辅酶A的转化效率要明显高于FadD2。质谱分析数据进一步确认脂酰辅酶A合成酶的生化功能,表明其在HPS存活过程中发挥着重要的生理功能,是其致病的关键蛋白之一。成功建立了脂酰辅酶A合成酶体外质谱分析方法,可为病原细菌相关基因功能研究提供技术基础。     

注射生长激素对猪脂肪组织中脂肪合成酶的影响

注射重组猪生长激素(rpGH)能加快生长速度、降低脂肪率、提高瘦肉率。本试验测定了北京黑猪60头,其中试验组30头,每天注射rpGH2毫克,对照组30头注射1毫升75mMNaHCO_3,均连续注射28天后屠宰,在屠宰时测定了血浆游离脂肪酸(FFA)含量(试验组为673.16±232.35微克当量/升,对照组为412.09±241.84微克当量/升),试验猪比对照猪FFA含量增高63.04％,差异极显著(P<0.01)。取肩背部皮下脂肪组织,分别测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(0.313±0.064IU/毫克蛋白),NADP-苹果酸脱氢酶(1.199±0.208 IU/毫克蛋白),NAD-苹果酸脱氢酶(0.9425±0.233 IU/毫克蛋白),异柠檬酸脱氢酶(0.324±0.104 IU/毫克蛋白)的活性,试验猪4种酶活性均低于对照组,差异极显著,(P<0.01),上述酶活性与胴体瘦肉率 呈负相关趋势。     

猪硫辛酸合成酶基因的克隆及组织表达

本试验通过电子延伸及RT-PCR技术克隆猪硫辛酸合成酶(lipoic acid synthase,Lias)基因,并进一步研究了该基因在猪体内组织的表达分布。基于电子延伸序列设计1对引物,成功克隆了猪Lias基因(GenBank登录号:JN797612.1),并进行了序列分析,同时利用RT-PCR方法分析了Lias基因的组织表达规律。克隆的猪Lias基因长度为1119 bp,包括1个完整的开放阅读框,编码372个氨基酸;克隆的猪Lias基因与小鼠、褐鼠、人、牛的核苷酸序列同源性分别为71.5%、69.0%、77.3%、70.4%;推导的cDNA编码区(CDS)的氨基酸序列与小鼠、褐鼠、人、牛的同源性分别为91.5%、79.4%、89.4%、88.2%;构建的系统进化树结果显示,猪与小鼠、褐鼠的亲缘关系最近;组织表达分布结果表明,Lias基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、空肠、直肠、回肠、脂肪、皮肤和肌肉中都有表达;Gel-Pro软件分析结果表明,Lias基因在肾脏和脂肪组织中表达丰度最高,其次是直肠和回肠。     

日粮对脂肪酸合成酶(FAS)基因的表达调控及其应用

脂肪酸合成酶（ＦＡＳ）催化乙酰酶Ａ和丙二酸单酰辅酶Ａ转变成脂肪酸,从而在动物体脂沉积中发挥重要作用。动物体内脂肪酸合成酶受激素和日粮因素的调控。本文介绍日粮（碳水化合物、蛋白质、脂肪和微量元素）对脂肪酸合成酶的活性和基因表达调控的影响,并就日粮脂肪酸合成酶基因表达调控在实际生产中的应用也进行了探讨。     

富硒麦芽对二乙基亚硝胺致SD大鼠肝癌细胞因子和血管生成的影响

雄性SD大鼠193只，体质量100～120g，随机分为5组。Ⅰ～Ⅲ组，日粮中添加富硒麦芽至硒含量分别为0．3、1．0、3．0mg／kg；Ⅳ组为模型组；Ⅴ组为正常对照组，不加硒也不诱癌，日粮中分别添加亚硒酸钠至硒含量达0．1mg／kg。Ⅰ～Ⅳ组，饮水中添加二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DEN，100mg／L）诱癌，维持DEN摄入量按体质量每天约10mg／kg，连续16周，然后改饮普通灭菌水至18周末。Ⅴ组始终以普通灭菌水自由饮用。每4周每组取5只鼠眼眶采血；18周末采血、处死所有大鼠。测定血清肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNFα）、白介素-2（interleukin-2，IL-2）、胰岛素样生长因子-Ⅱ（insulin—like growth factor-Ⅱ，IGF-Ⅱ）、一氧化氮（nitricoxide，NO）、一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase，NOS）等的含量，并以免疫组化法观察大鼠肝肿瘤组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达。结果发现，某些剂量富硒麦芽能有效地抑制肝癌大鼠TNFα、IGF-Ⅱ、NO和NOS水平的上升，提升血清IL-2水平，抑制肝肿瘤组织中VEGF的表达。结果提示，富硒麦芽能促进肝癌大鼠免疫功能，抑制肿瘤血管生成，从而发挥其抗癌作用。     

SMS、SRM和SMOX基因mRNA在鹅等级前卵泡中的表达

为研究精胺、亚精胺和腐胺对鹅等级前卵泡发育的作用,通过荧光定量PCR对其合成代谢关键酶亚精胺合成酶(spermidine synthase,SRM),精胺合成酶(spermine synthas,SMS)和精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)基因mRNA在鹅等级前卵泡中的表达情况进行检测分析。结果发现:SMS,SRM和SMOX基因mRNA在鹅等级前卵泡中均有表达,通过差异分析发现SMS基因mRNA在PE等级卵泡中的表达量最高,且表达量显著高于其他4个等级卵泡(P0.05);而在SY,L,M和S这4个等级卵泡中表达量差异不显著(P0.05)。SRM基因mRNA在PE和L等级卵泡中的表达量较高,差异不显著(P0.05),但显著高于其他3个等级卵泡(P0.05);而在SY,M和S等级卵泡中SRM基因mRNA的表达量差异不显著(P0.05)。SMOX基因mRNA在5个等级卵泡中表达差异显著(P0.05)。     

脂肪酸合成酶基因的研究进展

在脂肪酸的合成过程中,脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)是一种多功能的复合酶,是合成脂肪酸的关键酶,因此,动物体内脂肪酸合成酶蛋白的多寡、活性的高低对动物脂肪酸的合成及体脂的沉积具有重要的意义。近年来,国内外大量的研究报道了脂肪酸合成酶对脂肪合成、代谢的调控。作者将从脂肪酸合成酶基因结构特征,其与能量代谢及体脂沉积的关系,以及日粮养分与激素对脂肪酸合成酶基因的表达调控研究进行综述。     

多不饱和脂肪酸调控脂肪基因表达的研究进展

<正>多不饱和脂肪酸PUFAs(Polyunsaturated Fatty Acids,PUFAs)是18,24碳脂肪酸家族,其脂肪酸链中含有2个或2个以上的双键〔1〕。其主要包括n-3、n-6、n-7和n-9系列,其中具有重要生物学功能的主要有n-3和n-6两种系列〔2〕。n-3系列主要包括α-亚麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA);n-6系列主要包