苦豆子内生真菌对宿主培养物生长及喹诺里西啶类生物碱合成的影响

利用苦豆子健康植株中分离鉴定的8株内生真菌菌株为真菌诱导子,分别制备灭活菌丝和菌液浓缩物,研究内生真菌诱导子不同种类、浓度和诱导时间对苦豆子无菌苗和愈伤组织的生长以及喹诺里西啶生物碱含量的影响。结果表明:8株苦豆子内生真菌诱导子中,菌液浓缩物的诱导效果要强于灭活菌丝。菌株HMGKDF1菌液浓缩物和灭活菌丝都能明显促进愈伤组织的生长,净生长率是对照的1.82和1.42倍;菌株NDZKDF13菌液浓缩物对愈伤组织生物碱的合成效果明显,生物碱含量为0.5483 mg·g-1,是对照的23.8倍;在一定浓度范围内(0.01~1.0 mg·L-1),苦豆子内生真菌诱导子能够促进宿主植物喹诺里西啶生物碱的合成。内生真菌诱导子处理苦豆子无菌苗12 d时,喹诺里西啶生物碱含量最高,是对照的2.65倍。在苦豆子无菌苗或愈伤组织中添加一定量的苦豆子内生真菌诱导子,对宿主的生长以及提高喹诺里西啶生物碱含量是一种有效的方法。     

HPLC法分离测定苦豆子愈伤组织喹诺里西啶生物碱含量及体系优化

以苦豆子愈伤组织为试材,采用高效液相色谱法,分离并测定苦豆子愈伤组织中氧化槐果碱、氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱和苦参碱,建立了这5种单碱分离、测定的色谱方法。结果表明:色谱条件为UltimateAQ-C18(4.6μm×250mm×5mm);流动相为0.01mol·L~(-1)磷酸缓冲液(K2HPO4=5.59g·L~(-1),KH2PO4=0.41g·L~(-1),pH 7.5)-甲醇(50∶50,V/V);检测波长为216nm;柱温为35℃;流速为1.0mL·min-1,检测苦豆子愈伤组织中含有5种生物单碱,其中氧化槐果碱和槐定碱在苦豆子愈伤组织继代培养第4代时含量相对较高,分别为1.205 6mg·g-1和0.116 5mg·g-1,氧化苦参碱、槐果碱、苦参碱的含量略有波动,大致呈下降趋势。