基于非靶向代谢组学的特色寒地浆果滋味品质分析

为探究笃斯越橘、蓝靛果、树莓、黑加仑4种特色寒地浆果滋味特点,及其滋味形成的特征性物质组成,该研究基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（ultra-high-performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry, UPLC-QTOF-MS）和气相色谱质谱法（gaschromatography-mass spectrometry, GC-MS）分别对4种浆果的非挥发性和挥发性物质进行鉴定和筛选,并进行公因子分析;同时进行4种浆果的电子舌分析及感官评价,得出4种浆果滋味品质模糊综合得分。结果显示：笃斯越橘糖酸比为4.41,特征性挥发性物质为α-松油醇和苯甲醛,电子舌酸味响应值最强;黑加仑糖酸比为3.80,特征性挥发性物质为苯乙醇和乙酸,各滋味响应值相当;蓝靛果糖酸比为3.37,总酚含量最高,特征性挥发性物质为正己醇和3-己烯-1-醇,咸味和鲜味响应值最高;树莓糖酸比为8.19,特征性挥发性物质为乙酸和α-紫罗酮,甜味和苦味响应值最高;经筛选鉴定及统计分析得出4种浆果的非挥发性物质中有显著差异的化合物有10种,分别为塔格糖、乳酸、阿洛酮糖、草酸、柠檬酸、天冬氨酸、茜草苷、6α-甘露二糖、蔗糖和异槲皮素。滋味感官模糊综合评分由大到小为树莓、蓝靛果、笃斯越橘、黑加仑;因子分析结果表明4种浆果滋味组成得分由大到小排序依次为黑加仑、蓝靛果、笃斯越橘和树莓。该研究结果可为4种寒地浆果的产品开发滋味调控提供理论依据。     

地方高校图书馆数字化保护非物质文化遗产探析

以保定市为例.本研究从非物质文化遗产的概念出发,阐述了非物质文化遗产数字化保护的意义和目前国内及保定市的研究现状,指出图书馆在非物质文化遗产保护中的优势、作用及措施.     

Endogenous hydrogen sulfide regulates oxidant/antioxidant balance in rat with chronic obstructive pulmonary disease

AIM: To investigate the role of hydrogen sulfide (H₂S) in the protection against oxidative stress in rats with chronic obstructive pulmonary disease (COPD).METHODS: The rat model of COPD was established by cigarette smoking (CS) combined with lipopolysaccharide (LPS) instillation. Thirty-two healthy male Sprague-Dawley rats were randomly divided into 4 groups: control group, CS+LPS group, CS+LPS+NaHS (H₂S donor) group and CS+LPS+PPG (DL-propargylglycine, an inhibitor of cystathionine-γ-lyase) group. After 30 days, the lung functions of the rats were measured, the histological changes of lungs were observed under light microscope and the pathological scores were calculated. The H₂S level in plasma and the protein expression of cystathionine-γ-lyase (CSE) in the lung tissues were measured. The content of malondialdehyde (MDA), the activity of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) were detected to reflect oxidative stress.RESULTS: Compared with control group, the peak expiratory flow (PEF) decreased by 24% and intra-pressure (IP) increased by 66% in CS+LPS group. The pathological scores of the lung tissues also increased. Compared with CS+LPS group, no change in the lung function was observed after given NaHS or PPG, but the pathological scores decreased in CS+ LPS+ NaHS group. Compared with control group, the content of H₂S in plasma was increased by 26% on day 16. Compared with CS+LPS group, the content of H₂S in plasma of CS+LPS+PPG group was decreased by 22% after 30 days. Compared with control group, the protein expression of CSE increased, and no statistical difference among CS+LPS group, CS+ LPS+ NaHS group and CS+LPS+PPG group was observed. Compared with control group, MDA content in the lung tissues was increased by 24% in CS+LPS group, the activity of SOD was increased by 47% and the activity of CAT was increased by 52%. Compared with CS+LPS group, the MDA content in CS+LPS+NaHS group was decreased by 21%, and no statistical difference in the activity of SOD and CAT was observed. The activity of SOD decreased by 33% after given PPG.CONCLUSION: H₂S plays a role as anti-oxidant in the rats with COPD. The CSE/ H₂S pathway may be involved in the development of COPD.     

猪结合珠蛋白基因的克隆、原核表达及单克隆抗体制备

本研究的目的在于利用重组猪结合珠蛋白(Haptoglobin,Hp)制备特异性单克隆抗体.以梅山猪肝脏总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增猪hp基因,将其克隆到原核表达栽体pGEX-KG和pET-32a上,转化至E.coli BL21中,IPTG诱导下高效表达重组GST-Hp和HIS-Hp蛋白.用纯化的重组GST-Hp免疫BALB/c小鼠,用纯化的HIS-Hp作为包被抗原进行间接ELISA检测,通过淋巴细胞杂交瘤技术筛选阳性细胞株,制备单克隆抗体.结果表明筛选到2株高效分泌抗猪Hp单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3B4和3C8.Western-blot和间接ELISA检测均表明制备的单克隆抗体具有良好的特异性.     

环形泰勒焦虫对奶牛免疫水平的影响

本试验选择5头感染环形泰勒焦虫的奶牛和5头健康奶牛,在第0天、第5天、第10天、第15天、第20天分别进行红细胞C3b受体花环率试验、红细胞免疫复合物花环试验、T淋巴细胞EA花环率试验和淋巴细胞转化率的测定。结果表明,感染环形泰勒焦虫的奶牛其红细胞免疫复合物花环、红细胞C3b受体花环率和淋巴细胞转化率明显低于健康奶牛,差异极显著。这说明环形泰勒焦虫对奶牛的免疫水平有明显的抑制作用。且随着检测时间的变化,免疫水平逐渐降低。     

CDV、CPV和CPIV多重PCR检测方法的建立

为了建立一种快速诊断犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的多重PCR方法,参照GenBank中的犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬副流感病毒(CPIV)基因序列,设计了3对引物分别用于特异扩增犬瘟热病毒F基因、犬细小病毒VP2基因和犬副流感病毒F基因上的目的片段.通过优化反应条件,建立同时扩增CDV(740 bp)、CPV(419 bp)和CPIV(559 bp)的多重PCR方法.结果表明特异性和敏感性良好,对CDV、CPV、CPIV3种病毒的最低核酸检测量为1 ng/μL.临床样品的多重PCR检测结果表明,建立的多重PCR方法能够对CDV、CPV、CPIV单个感染或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断.     

日粮中添加不同浓度吡啶甲酸铬对生长肥育猪氧化作用的影响

本研究旨在观察日粮中持续添加不同浓度吡啶甲酸铬对生长肥育猪氧化作用的影响.选取30头(30±1)kg三元杂交型(杜×长×大)生长肥育猪,按体重、遗传基础和性别随机平均分成5个处理.5个处理分别饲喂铬的添加水平为0、200、800、1 600、3 200 ug/kg(以吡啶甲酸铬的形式添加)的日粮,试验期为80 d.试验第35天和第80天时,测定吡啶甲酸铬对动物血清中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力和丙二醛(MDA)的含量,以及动物尿液中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的水平.试验结束时,屠宰动物并取肝脏和肾脏样品,分别测定这些组织中的SOD、GSH-Px、CAT的活力和MDA的水平.结果表明,日粮中长期添加高剂量(≥800 ug Cr/kg)的吡啶甲酸铬显著降低第80天时肥育猪血清中的SOD和肾脏中CAT的活性(P<0.05),但对其他指标都没有显著影响(P>0.05).结果提示,在生产肥育期全程(80 d)添加适宜量(200 ug Cr/kg)的吡啶甲酸铬不会造成猪的氧化损伤;添加16倍适宜量的吡啶甲酸铬导致猪血清SOD和肾CAT活性降低,但不引起脂质过氧化和DNA损伤.     

三种猪Ⅰ型干扰素基因的克隆与序列分析

根据GenBank中收录的三种猪Ⅰ型干扰素（porcine interferon,pIFN）基因序列,设计了3对特异性引物。运用RT—PCR技术从长白猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到了三种猪干扰素基因,并将其克隆至pGEM-T Easy载体上。序列测定结果显示,获得的猪干扰素α1基因序列全长570bp,编码189个氨基酸,获得的猪干扰素α2基因序列全长540bp,编码179个氨基酸,获得的猪干扰素β基因序列全长563bp,编码186个氨基酸。三种猪Ⅰ型干扰素基因与已知猪Ⅰ型干扰素核苷酸序列和氨基酸序列的相似性最高可达99％～100％。     

二维薄层色谱法分析分枝杆菌脂质成分

为探讨卡介苗巴氏德菌株(Bacillus Calmette-Guérin-pasteur,BCG-pasteur)和耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegma-tis,mc^2155)两种菌株的脂质成分,且通过比较脂质成分差异为研发新型牛结核病脂类疫苗佐剂提供试验基础。本文通过石油醚,氯仿,甲醇,丙酮等有机溶剂萃取BCG-pasteur和mc^2155两种菌株脂质,采用薄层色谱法分析其非极性脂质成分的差异。结果显示,BCG-pasteur中脂质成分富含三酰甘油,甲硫酚二角酰亚胺,PAT家族蛋白,甘油二酯,游离脂肪酸,游离分枝菌酸,葡萄糖单霉菌酸酯以及硫脂I类和硫脂III类等物质;mc^2155脂质成分除了硫脂I类,其他成分均有表达,但相对于BCG-pasteur其含量明显减少。本萃取方法简便稳定,适用于分枝杆菌的非极性脂质提取,为分枝杆菌脂质成分的分析提供基础;本试验通过薄层色谱法分析显示卡介苗和耻垢分枝杆菌细胞壁脂质成分差异明显,表明不同结核分枝杆菌的细胞壁脂质成分存在明显差异,从而可以引起不同的免疫反应,可为新型牛结核病疫苗提供方向。     

猪细小病毒BQ-C毒株VP2基因的鉴定及表达

本研究从临床发病猪采集病料,以PK15传代细胞进行病毒分离,通过PCR、血液凝集试验(HA)和电镜鉴定为1株猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV),命名为BQ-C。对分离的毒株进行测序,结果显示该毒株与GenBank登录的PPV BQ株同源性为100%。为获得该毒株结构蛋白VP2基因的表达产物,将VP2基因片段插入到原核表达载体pET-30a(+),得到表达重组质粒。经双酶切和测序鉴定,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE结果表明,获得的重组蛋白分子质量约为71.5 ku,与预期大小相符。Western blotting结果显示获得的重组蛋白能与PPV阳性血清特异性结合,表明重组蛋白具有良好的反应原性。结果表明,本研究成功分离了1株PPV BQ-C株,且表达的VP2重组蛋白可用于PPV血清学诊断和疫苗的研发。