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近年来,重组 VP28和 VP26蛋白作为蛋白亚单位疫苗,在增强对虾抗白斑综合征病毒(WSSV)感染的过程中具有重要作用。本研究根据GenBank中WSSV的基因序列设计引物,以WSSV粗提液为模板进行普通PCR扩增,得到VP28和VP26基因,再用引物悬挂法将EcoRⅠ和XbaⅠ酶切位点分别添加到 VP28和 VP26基因的5¢端和3¢端。目的基因经双酶切后插入到表达载体pGAPZαA,转化TOP10大肠杆菌,经博莱霉素(Zeocin)抗性筛选阳性重组酵母表达载体。AvrⅡ酶切线性化之后,电击转化 X-33毕赤酵母感受态细胞,经 Zeocin 抗性筛选得到阳性重组酵母。SDS-PAGE电泳分析重组酵母表达上清液的目的蛋白,没有检测到VP28和VP26重组蛋白。随后,采用蛋白质银染法,结果显示,与空载pGAPZαA组相比,VP28和VP26表达上清液组有明显的条带,证明VP28和VP26在毕赤酵母中成功表达,蛋白分子量大小约为32 kDa。 相似文献
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[目的]探讨2-十三烷酮、槲皮素和单宁酸3种植物次生物质与杨扇舟蛾谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)的关系。[方法]用0.01、0.10和1.00 mg/ml浓度的2-十三烷酮、槲皮素和单宁酸处理的杨树叶子分别饲养杨扇舟蛾幼虫,测定喂饲后72 h内杨扇舟蛾虫体GSTs的活性。[结果]低浓度的2-十三烷酮和槲皮素对杨扇舟蛾体内GSTs活性有抑制作用,且随着浓度升高,杨扇舟蛾体内GSTs活性又略有回升,具有一定的诱导作用;而单宁酸的浓度越大,杨扇舟蛾体内GSTs活性越低,不存在诱导作用。[结论]为杨扇舟蛾的有效防治提供了参考。 相似文献
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以泥鳅为试验材料,利用嗜水气单胞菌和右旋糖酐铁作为诱导刺激物,以不同浓度嗜水气单胞菌菌液和右旋糖酐铁对泥鳅进行腹腔注射,研究病原细菌和金属离子对泥鳅GSTs酶活性的影响。在分别注射病原微生物后0,2,6,10,16,24,40,50 h以及注射右旋糖酐铁后1,2,3,4,5 d取泥鳅肝胰组织,测定其谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)的活力,并研究其变化规律。结果表明:不同浓度的嗜水气单胞菌对泥鳅GSTs均有诱导作用,2.1×109 cfu·mL-1浓度组对泥鳅GSTs的诱导作用最大,2.1×107和2.1×105 cfu·mL-1浓度组则相对来说诱导作用较小。各处理组GSTs活力在处理后一段时间内达到峰值后逐渐降低到正常水平,实验组的GSTs活力均显著高于对照组。不同浓度的右旋糖酐铁对GSTs的作用不同,低剂量组(10 μg·g-1)对GSTs活性有显著性的诱导作用(P<0.05),且在第1天时诱导作用达到最大,随后逐渐降低到正常水平;中剂量组(25 μg·g-1)和高剂量组(50 μg·g-1)对GSTs活性有一定抑制作用,且在第4天时抑制作用达到最大,但随后逐渐增加而趋近于正常水平。 相似文献
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