条纹锯精液超低温冷冻保存研究

为建立条纹锯精液超低温冷冻保存方法,实验采用计算机辅助精子分析系统（CASA）分析了采用6种抗冻保护剂（GLY[甘油]、DMSO[二甲基亚砜]、PG[丙二醇]、EG[乙二醇]、METH[甲醇]、DMA[二甲基乙酰胺]）在4种浓度（5%、10%、15%、20%,v/v）下对条纹锯精液的冷冻保存效果。结果发现,以HBSS为稀释液,采用程序降温仪分步降温冷冻保存条纹锯精液,37℃水浴解冻后的精子中,15% PG 作为抗冻保护剂的精子运动率最高,达到（93.1±0.9）%,与鲜精差异不显著（P>0.05）,15% PG 作为抗冻保护剂的精子水浴解冻后精子的运动速度最高,平均直线速度、平均曲线速度、平均路径速度分别达到了（88.3±0.3）μm/s、（76.2±0.5） μm/s、（86.7±0.7） μm/s,与鲜精差异不显著（P>0.05）。在不同种类及不同浓度抗冻保护剂保护下,15% PG 作为抗冻保护剂的精子解冻后 1 min内运动率变化与鲜精差异不显著（P>0.05）。研究表明,15% PG为条纹锯最佳抗冻保护剂,可用于条纹锯精液的超低温冷冻保存。     

精子顶体相关基因DKKL1在正常人和男性不育患者睾丸组织中的表达差异

Dkkl1基因在哺乳动物睾丸发育和精子发生过程中扮演着重要角色,然而其在龟鳖类动物中的研究十分有限。为探索龟鳖类Dkkl1基因的潜在功能和作用机制,克隆了中华鳖 (Pelodiscus sinensis) Dkkl1基因的cDNA片段,分析其序列特征、表达模式以及对外源性激素处理的响应。克隆获得的Dkkl1基因cDNA序列长度为823 bp,其中3'-非编码区(UTR)为67 bp,5' UTR为90 bp,开放阅读框为666 bp,共编码222个氨基酸。中华鳖Dkkl1蛋白是一种稳定性较差、亲水性较强的碱性蛋白,其二级结构和三级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主。氨基酸序列同源性比对结果显示其与中华草龟 (Chinemys reevesii) Dkkl1蛋白的相似性较高 (81%),与棱皮龟 (Dermochelys coriacea) Dkkl1蛋白的同源性较低 (70%)。通过RT-PCR和RT-qPCR分析发现,中华鳖Dkkl1 mRNA在 3 冬龄成体精巢中极显著性高表达 (P<0.001),而在其余体组织中几乎不表达。并且随着年龄的增长,中华鳖精巢中Dkkl1基因的表达量逐渐上升,并在3冬龄时达到顶峰。此外,17β-雌二醇 (E₂) 和17α-甲基睾酮 (17α-MT) 处理均可显著抑制成体中华鳖精巢中Dkkl1基因的表达 (P<0.05)。研究表明,Dkkl1基因可能在中华鳖睾丸发育和精子发生过程中起着重要作用。

     

β-葡聚糖对杀鲑气单胞菌感染后虹鳟应激过程的调节作用

为研究不同浓度的β-葡聚糖对感染杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)的虹鳟(Oncorhynchus mykiss)应激过程的调节作用,在虹鳟饲料中添加不同浓度的β-葡聚糖(0,0.05%,0.1%,和0.2%),投喂42 d后感染杀鲑气单胞菌,在感染后第2,4和6天取样检测血清应激指标的变化,第7天时统计虹鳟的存活率。结果表明,添加β-葡聚糖能显著提高感染杀鲑气单胞菌后虹鳟的存活率,其中0.2%剂量的保护效果最好(P0.05)。感染后第4天β-葡聚糖组的血清总蛋白(total protein,TP)浓度显著高于对照组(P0.05)。0.1%和0.2%组的血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)活性在感染后第2天达到峰值,早于0.05%和对照组。0.1%和0.2%组血清髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性在感染后显著上升,而0.05%和对照组却显著下降(P0.05)。β-葡聚糖组在感染后血清乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性一直显著低于对照组(P0.05)。β-葡聚糖组血清甘油三酯(triglycerides,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TCH)感染后下降程度显著低于对照组(P0.05)。感染后第4天,β-葡聚糖组的血清尿素氮(urea nitrogen,BUN)浓度显著低于对照组(P0.05)。总胆红素(total bilirubin,T-BIL)浓度在感染后显著下降(P0.05),其中0.2%组下降幅度最小。各组肝脏和脾脏热休克蛋白70基因(heat shock protein 70,HSP70)表达量在感染后都显著升高(P0.05),0.1%和0.2%组表达峰值出现时间早于其他组,且其峰值高于其他组峰值。综上所述,本实验中,添加β-葡聚糖能显著提高感染杀鲑气单胞菌的虹鳟的存活率和有效减弱细菌感染引起的机体应激反应,其中0.2%剂量的保护效果最好且对应激过程的减弱效果最明显(P0.05)。     

饲料中添加β-葡聚糖对虹鳟部分生长指标和血液生理指标的影响

选择初始体重为(454±52)g的虹鳟(Oncorhynchus mykiss),分别投喂添加不同浓度β-葡聚糖(0.05%、0.1%和0.2%)的饲料,饲养30 d后进行取样,分析虹鳟部分生长指标及血液生理指标。结果显示,投喂对应饲料30 d后,0.2%葡聚糖添加组增重率最高,显著高于其他实验组及对照组(P0.05),0.05%葡聚糖添加组增重率最低。0.2%葡聚糖添加组特定生长率显著高于其他组(P0.05),0.05%和0.1%组与对照组无显著差异(P0.05)。0.2%葡聚糖添加组的肝体比显著高于其他实验组及对照组(P0.05)。各添加组的肥满度随着葡聚糖投喂量的增多而升高,其中,最大值出现于0.2%葡聚糖添加组,但各添加组肥满度均显著低于对照组(P0.05)。投喂30 d后,0.05%葡聚糖组白细胞数量显著高于0.2%葡聚糖组及对照组(P0.05),与0.1%葡聚糖组差异不显著(P0.05),0.1%葡聚糖组红细胞数量最高,显著高于其他实验组及对照组(P0.05),葡聚糖组红细胞数量显著高于对照组(P0.05)。0.1%葡聚糖组血红蛋白浓度显著高于其他实验组及对照组(P0.05),对照组鱼的血红蛋白浓度显著低于各实验组(P0.05)。研究表明,在循环水养殖模式下,饲料中添加β-葡聚糖可提高虹鳟的生长性能并改变其部分血液生理指标,本研究中0.2%β-葡聚糖的效果最好。