鉴定猪产毒素大肠杆菌多重PCR方法的建立

根据GenBank数据库的基因序列建立了一种快速鉴定仔猪产毒素致病性大肠杆菌 3种常见毒素LTⅠ、STa和VT2e的多重PCR方法。将待检样本接种麦康凯琼脂平板 ,然后挑取单一的红色菌落直接作模板 ,加入预混好的PCR反应液进行PCR即可对产生这 3种毒素的猪大肠杆菌进行鉴定。 3种毒素基因的PCR产物的大小分别是 2 83bp、2 2 1bp和 4 87bp。     

微小牛蜱铁蛋白编码基因的克隆和分析

从微小牛蜱克隆到1个新的铁蛋白编码基因，cDNA全长642bp，编码区为123-639bp，编码172个氨基酸残基，该蛋白预测的分子量为19．9ku，等电点为4．24。经过分析，其预测氨基酸序列与已报道的变异革蜱、非洲钝缘蜱和蓖子硬蜱铁蛋白同源性分别为93．60％、88．37％和83．72％。且核苷酸序列在mRNA 5’未翻译区(5’UTR)的茎环结构存在铁应答元件(IRE)，其氨基酸序列上带有典型的亚铁氧化酶中心结构的保守序列。RT-PCR分析表明，该基因在微小牛蜱卵、幼蜱、半饱血雌蜱、饱血雌蜱和雄蜱这几个阶段均有表达。     

猪瘟病毒E^ms基因RNase酶活性位点的定点突变对其原核表达的影响

利用重组PCR技术将猪瘟病毒兔化弱毒株（Hog cholera virus lapinized Chinese strain,HCLV）ETM编码区30位His残基密码子CAT突变为Pro残基密码子CCC,将突变后的基因克隆至原核表达载体pET-28a（＋）qb,构建成重组质粒pETmE^ms,并将此重组子转入宿主菌BL21（DE3）plysS中,在IPTG的诱导下表达重组转化菌．结果：突变的mE^ms基因能在pET表达系统成功表达．用Western blotting检测表明,所表达的蛋白是猪瘟病毒特异性的,但克隆于pET-28a（＋）d？未突变的E^ms基因却不能表达,说明E^ms基因的RNA酶活性是影响该基因在Escherichia coli中表达的因素之一．     

卵黄抗体和灭活疫苗同时注射紧急预防H5N1亚型禽流感

禽流感(AI)是由A型流感病毒所引起的各种家禽及野生禽类的感染和疾病综合征.高致病性禽流感已被OIE列为I类烈性传染病,对养禽业构成了严重的威胁,近几年我国养禽业由此蒙受了重大的经济损失[1].1997年我国香港特区发生18例H5N1亚型禽流感病毒直接感染人群的病例,其中死亡6例[2],所以有效地防控高致病性禽流感具有重要的公共卫生意义.     

O型口蹄疫病毒代表性抗原VP1基因的人工合成与表达及其免疫原性检测

通过对GenBank近10年内收录的O型口蹄疫(FMD)病毒 VP1基因序列的同源性比较分析,并根据中国、老挝、缅甸等国家FMDV流行毒株的基因序列,设计并合成了有群内抗原代表性的结构蛋白VP1全基因序列.将合成的序列克隆到原核表达载体pET-28a( )中,构建了VP1的表达质粒pETVP1.SDS-PAGE和Western-blot分析表明,该质粒的BL21(DE3)LysS转化菌在IPTG诱导下可特异性表达VP1蛋白,该重组蛋白以包涵体的形式存在,相对分子质量约30 000,能与口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清发生特异性反应.动物接种试验表明,重组蛋白能诱导小白鼠产生特异性抗FMDV抗体.     

3种亚群PCV-2感染性克隆的构建及体内外感染性

通过PCR扩增出猪圆环病毒2(PCV-2)3个亚群(1A、1B、1C)毒株的全基因组DNA序列,并分别克隆入pMD-18T载体,获得含有PCV-2全基因组的3个重组质粒,分别命名为RP8(1A)、P0(1B)和P4-1(1C).将3个重组质粒分别用SacⅡ切出1767 bp的PCV-2全基因组,并在体外分别用T4连接酶连接而环化.用脂质体将3种自身环化的基因组转染无PCV-1污染的PK-15细胞,并按常规病毒培养方法分别传代,第5代细胞培养物分别用间接免疫荧光试验(IFA)及PCR方法检测转染的细胞,检测结果均为阳性,说明已获得PCV-2共3个亚群1A、1B、1C的感染性克隆.用1A、1B、1C感染性克隆的第5代细胞培养物分别接种小鼠,可在接种小鼠的血液中分别检测到相应PCV-2亚型的基因组DNA,表明本试验构建的自身环化的1A、1B、1C亚型的PCV-2的全基因组DNA在体内、体外均具有感染性.     

血根碱的急性毒性研究

为评价血根碱的安全性,采用改良寇氏法进行了血根碱的急性毒性试验。分别采用腹腔注射与灌胃两种给药方式,一次性对小鼠给予不同剂量血根碱,连续观察7 d。结果表明,小鼠腹腔注射血根碱的最大耐受量为15.0 mg/kg,其LD50为9.4 mg/kg,LD50的95%可信限为8.6-10.3 mg/kg;灌胃给药的最大耐受量为2 000 mg/kg,其LD50为1 029.7 mg/kg,LD50的95%可信限为903.7-1 173.2 mg/kg。该结果为血根碱临床剂量的选择奠定了基础。     

几种药品对鸡隐孢子虫卵囊体外杀灭试验

隐孢子虫寄生于鸡的呼吸道、盲肠、法氏囊和泄殖腔。我国及全世界普遍分布。据报道 ,美国鸡隐孢子虫的感染率为 6 .4 % ,我国鸡隐孢子虫的感染率为8%～ 6 7.2 7%。隐孢子虫病对鸡的危害很大 ,人工感染试验表明 ,严重发病者在发病后 2～ 3日死亡 ,死亡率达 5 0 .8% [1～ 3 ]。隐孢子虫主要的感染方式为粪便中的卵囊污染饲料、饮水等经消化道感染。因此寻找有效的杀灭卵囊的药物 ,是防治该病的重要途径。隐孢子虫病的抵抗力很强 ,很多消毒剂不能将其杀灭 ,如碘酊、氢氧化钠、煤酚皂、次氯酸钠等。本试验选用了国内新近研制使用的一些消毒剂分别处理卵囊 ,以观察对鸡隐孢子虫卵囊的体外杀灭效果。报告如下。1　材料与方法1.1　化学试剂　菌毒敌 (农乐 ) ,湖南资江氮肥厂消毒剂分厂生产 ;强力清洁液 ,湖南省卫生防疫站健卫日用化工厂生产 ;速尔 2号、速尔 3号 ,湖南化工研究院研制并提供 ;漂白粉 ,市售 (含氯 ) ,优氯净 ,湖南化工研究院研制并提供 ;洗衣粉 ,湖南日用化工厂总厂生产 ;氨水 ,长沙二十二中化学试剂厂生产 ;甲醛 ,湖北大学化工厂生产。1.2　雏鸡　长沙鸡场购入的 5 5羽 1日龄长...     

樟子松大苗移植技术

樟子松别名海拉尔松,为松科、松属,常绿针叶大乔木,是抗旱造林的珍贵树种。它在北方的山地、黄土丘陵、沙地、平原上均能生长,特别是在沙地造林实践中占据着越来越大的优势,它是"三北"地区营造防风固沙林、水土保持林难得的重要树种之一。     

大肠杆菌野生株F18菌毛蛋白粘附亚单位基因的克隆与表达

根据Z26520中fedF序列设计1对引物,从发病仔猪的腹泻粪便分离获得的大肠杆菌中扩增得到fedF基因,经纯化、连接、转化,将其成功克隆到pMD18-T中,所克隆fedF基因序列与GenBank中收录的其他fedF基因序列的同源性达97.8%～99.2%.另设计1对引物,利用基因工程方法将所克隆的fedF的编码序列亚克隆到表达载体pBV220中,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达重组菌.测序结果表明,插入编码序列与预期序列一致.SDS-PAGE电泳及Western-blotting分析表明,重组菌在诱导后可以表达特异性的相对分子质量为30 100的FedF蛋白.