水貂绿脓杆菌（PASD03株）鞭毛蛋白的提取与分析

本试验以水貂绿脓杆菌PASD03株为研究对象,对其鞭毛蛋白的提取方法进行研究,分别通过酸裂解、差速离心以及酸裂解结合机械振荡三种方法,用（NH4）2SO4盐析来获得鞭毛蛋白,采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对提取的绿脓杆菌鞭毛蛋白进行分离纯化,并进行电镜鉴定。结果显示：成功分离出水貂绿脓杆菌的鞭毛蛋白,获得了绿脓杆菌鞭毛蛋白的初提液.绿脓杆菌鞭毛蛋白经SDS-PAGE提示纯化的鞭毛蛋白为一条相对分子质量（Mr）为53×103蛋白带,透射电镜（SEM）观察发现该鞭毛蛋白呈丝状。结论：经酸裂解法并结合机械振荡和硫酸铵沉淀法简便、耗时短、纯度高、产量高,适用于绿脓杆菌鞭毛蛋白的提取。     

猪圆环病毒2型山东分离株全基因组的克隆与序列分析

根据猪圆环病毒2型(PCV-2)全基因组序列,设计一对特异性引物,从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病料中扩增出PCV-2基因组DNA,将基因片段克隆于pMD18-T载体,筛选获得含有相应片段的阳性重组质粒pMD18-T-PCV-2。对筛选出的阳性质粒进行测序。结果表明,PCV山东株的全基因组为1 767 bp,与国内外毒株核苷酸同源性高达99.6%。     

水貂绿脓杆菌(PASD03)鞭毛蛋白免疫原性的研究

为了研究水貂绿脓杆菌(PASD03)鞭毛蛋白的免疫原性,采用酶联免疫吸附试验、琼脂扩散试验、试管凝集试验和免疫印迹试验,对鞭毛蛋白免疫的兔抗血清进行了检测。结果表明:酶联免疫吸附试验呈阳性反应,血清稀释倍数在1∶80~1∶100之间最好;免疫扩散试验抗体效价达1∶64,试管凝集试验抗体效价在1∶1 600~1∶3 200之间;免疫印迹试验在53.0 ku左右出现1条特异性条带。说明检测的鞭毛蛋白具有较高的抗原性,为有效控制水貂绿脓杆菌病提供了新型候选疫苗源。     

枯草芽孢杆菌pgsA基因的克隆及序列分析

根据GenBank中已发表的枯草芽孢杆菌pgsA的基因序列,设计合成了一对能扩增1 225 bp基因片段的引物。以枯草芽孢杆菌染色体DNA为模板,经PCR扩增得到目的片断,然后将其克隆到pMD18-T载体上,经蓝白斑筛选和酶切鉴定选择阳性克隆进行序列测定。经DNA Star软件将其与Gen-Bank上的pgsA序列进行同源性比较,结果表明,核苷酸同源性均在90%以上,氨基酸同源性为94%以上。核苷酸序列系统进化树分析,发现该试验株与浙江株亲缘关系最近。经ProtScale软件分析表明,该基因所编码蛋白在靠近其N端存在一个跨膜区,为跨膜表达体系的建立和新型口服基因工程疫苗的研制奠定了一定的基础。     

PRRSV tGP5基因克隆及pcDNA3.1-tGP5真核表达载体的构建

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)S1株ORF5基因的核苷酸序列设计一对特异性引物,用PCR扩增PRRSV GP5蛋白非中和性表位缺失的tGP5基因,将基因定向连接在真核表达载体pcDNA3.1的HindⅢ和EcoRⅠ多克隆位点之间,构建重组质粒pcDNA3.1-tGP5。转化DH5α感受态大肠埃希菌,提取质粒。重组质粒经PCR、双酶切鉴定及DNA序列测定,成功构建了pcDNA3.1-tGP5基因的重组体。     

动物传染病成人教学改革探讨

该文通过调查问卷的方式,分析总结成人教育学员的学习心理特点,介绍了动物传染病实行教学改革的对策。     

血清4型和5型副猪嗜血杆菌易感仔猪发病模型的建立

为建立副猪嗜血杆菌(HPS)的仔猪发病模型,本试验使用HPS血清4型(SD-05、ZC-7)、血清5型(HB-08、PZ-26)菌株对仔猪进行毒力测定,然后以2种血清型最适菌株的最适剂量通过腹腔注射,对21～28日龄健康易感断奶仔猪开展攻毒试验,观察其临床症状和剖检变化,并对死亡仔猪进行细菌分离及PCR鉴定.结果显示:...     

犬瘟热病毒F蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

[目的]获得犬瘟热病毒F蛋白特异性单克隆抗体。[方法]用纯化的大肠杆菌BL21表达的犬瘟热病毒重组F蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用传统的杂交瘤技术制备单克隆抗体。用ELISAI、FA、Western-blot、细胞中和试验鉴定各株单抗的生物学特性。[结果]获得7株稳定分泌犬瘟热F蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2D6,3E10,3A2,5B7,5F6,6H8,9B6);单抗亚类鉴定结果分别为IgG2a,IgG1,IgG2b,IgG1,IgG1,IgG2a和IgG1;细胞中和试验初步证实2株单抗(5B7,9B6)具有中和犬瘟热病毒感染Vero细胞的作用,中和效价分别为1∶320和1∶640;经ELISA相加试验证实7株单抗的作用位点不同,其中2D6,5F6的作用位点非常相近。[结论]该研究成功制备了7株抗犬瘟热F蛋白特异性单抗,为进一步研究犬瘟热病毒F蛋白和临床诊断打下良好的基础。     

动物传染病学存在的问题及提高实践教学环节质量对策

为适应国内外社会对动物传染病防控水平不断提高的要求和增强动物医学专业学生在未来兽医人才队伍中的职业素质,基于动物传染病实践教学环节中存在的传染病新规律、新技术、临床实践经验等问题,从实践教学的综合性、案例模板、试验基地以及本科生导师制等方面进行了研究和探讨,旨在提高动物传染病实践教学质量,为培养新型创新型专业人才提供参考。     

猪2型圆环病毒与O型口蹄疫病毒二联重组鸡痘病毒的构建和筛选

以pUTA2LacZ为真核表达载体,以中国流行株O型口蹄疫病毒(FMDV)NY00株结构蛋白前体P1基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和复制蛋白基因为目的基因,构建了2个重组质粒作为中间转移质粒,标记为pUTALP1-ORF2和pUTALP1-ORF20RF1.将这2个重组转移质粒分别酶切鉴定后,与鸡痘病毒野毒(FPV)282E4株共转染鸡胚成纤维细胞.结果显示,重组核酸质粒构建正确,并能进行表达.经5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)加压筛选,挑取单个蚀斑,3次纯化,获得2株重组毒vpUTALP1-ORF20RF1和vpUTALP1-ORF2.结果表明,这2株重组鸡痘毒在电镜下可形成完整的病毒粒子.