黑龙江省牛羊东毕吸虫病流行情况与地理分布特征的调查研究

对黑龙江省牛、羊东毕吸虫病的流行情况及地理分布特进行了调查研究，初步认定我省有三种东毕吸虫，即程氏东毕吸虫（O.cheni)、土耳其斯坦东毕吸虫（O.turkestanica)和土耳其斯坦东毕吸虫结节变种（O.turkestanica var.tuberculata)。中间宿主螺类有三种，即耳萝卜螺、卵萝卜螺和小土窝螺；东毕吸虫病在黑龙江省分布较广，在调查的34个县（市）中有27个县（市）的牛、羊感染东毕吸虫，平均感染率分别为43．97％和61．98％，齐齐哈尔地区最为严重，牛、羊、的平均感染率分别达到62．73％和76．36％，大庆，绥化，哈尔滨，北安地区感染率也较高，佳木斯，黑河，鸡西地区属零星发生，牡丹江地区未检出。     

土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白基因的克隆及其序列分析

目的利用RT-PCR和RACE技术克隆土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白基因全长序列并进行序列分析.方法根据日本血吸虫和曼氏血吸虫肌动蛋白基因的保守区设计引物,利用RT-PCR扩增出土耳其斯坦东毕吸虫的肌动蛋白基因的大片段,再结合RACE技术分别得到肌动蛋白的3＇端和5＇端,将三部分序列拼接后获得肌动蛋白基因的全长cDNA序列并进行序列分析.结果成功克隆了土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白的全长cDNA并提交GenBank,登录号为DQ017265,核酸序列比对表明东毕吸虫肌动蛋白基因的核苷酸序列和日本血吸虫、曼氏血吸虫的同源性分别为90%和91%.结论土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白的全长cDNA的克隆为进一步表达及其生物学性能的分析提供了理论基础.     

中华血吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫节变种扫描电镜观察及与其它血吸虫的比较

中华血吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫节变种分别收集于四川和黑龙江省，按常规电镜方法处理后，以日立JSM－800扫描电镜观察并摄片。观察显示中华血吸虫体表无结节，其雄性成虫体表结构近似于日本血吸虫等亚洲血吸虫。与文献描述的采集于泰国的中华吸虫也无明显差异。观察同时表明土耳其斯坦东毕吸虫节变种与程氏东毕吸虫基本无差别，二者的感觉球种类与土耳斯坦东毕吸虫一致，但数目较后者为多。同时结合已发表的有关裂体属血吸虫SEM研究结果，对裂体属血吸虫SEM超微结构特点列表进行了比较，按照Rollinson分的组方法，中华血吸虫属于无结节组，而东毕吸虫属于不带棘的有结节组。     

大庆市羊东毕吸虫病流行病学调查

对大庆市羊东毕吸虫病的流行病学进行了调查研究。结果表明，大庆有3种东毕吸虫，即程氏东毕吸虫（O.cheni)、土耳其斯坦东毕吸虫（O.turkestanica)和土耳斯坦东毕吸虫结节变种（O.turkestanican var.thuberculata)；中间宿主螺类有1种，即卵萝卜螺；东毕吸虫病在大庆分布很广，所调查的4区2县均有发生，羊东毕吸虫平均感染率分别为50．33％，平均死亡率为21．12％，大庆羊急性病例发病时间为8月上旬至10月下旬，慢性病例为11月上旬至翌年2月中旬。     

中华血吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫结节变种扫描电镜观察及与其它血吸虫的比较

中华血吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫结节变种分别收集于四川和黑龙江省,按常规电镜方法处理后,以日立JSM-800扫描电镜观察并摄片.观察显示中华血吸虫体表无结节,其雄性成虫体表结构近似于日本血吸虫等亚洲血吸虫,与文献描述的采集于泰国的中华血吸虫也无明显差异.观察同时表明土耳其斯坦东毕吸虫结节变种与程氏东毕吸虫基本无差别,二者的感觉球种类与土耳其斯坦东毕吸虫一致,但数目较后者为多.同时结合已发表的有关裂体属血吸虫SEM研究结果,对裂体属血吸虫SEM超微结构特点列表进行了比较.按照Rollinson的分组方法,中华血吸虫属于无结节组,而东毕吸虫属于不带棘的有结节组.     

齐齐哈尔市羊东毕吸虫病流行情况调查及综合防治措施的研究

对齐齐哈尔市羊东毕吸虫的种类、中间宿主螺类及羊东毕吸虫的感染率、感染强度、死亡率进行了调查，结果齐齐哈尔市羊有程氏东毕吸虫、土耳其斯坦东毕吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫结节变种3种；中间宿主有卵萝卜螺和小土窝螺2种；在调查的9县(市、区)中有8县(市、区)有东毕吸虫病发生，羊平均感染率和死亡率分别为76．36％和19．31％，除拜泉没有检出虫体外，依安、齐齐哈尔市建华区、甘南、克东、富裕、讷河、龙江等地感染率均很高，泰来最为严重，感染率达到94．05％。根据调查结果，制定了齐齐哈尔市羊东毕吸虫病综合防治措施。     

东毕吸虫抗原特异性的研究──土耳其斯坦东毕吸虫成虫抗原SDS-PAGE分析

为了探明东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组分,供今后在免疫诊断和防治东毕吸虫的应用,本试验应用ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ首次对绒山羊体内寄生的土耳其斯坦东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组分进行了分析。结果表明该抗原有１７ 条多肽带,其分子量范围２５～９３ＫＤ．其中主带７ 条,分别为２９、３０、３８、４０、６７、７８、９１ＫＤ。本试验初步阐明了土耳其斯坦东毕吸虫成虫抗原的多肽组分,为进一步对该病免疫诊断用抗原的分离、纯化,提高抗原的敏感性和特异性奠定了基础     

东毕吸虫抗原特异性的研究：土耳其斯坦东毕吸虫成虫抗原SDS—PA …

为了探明东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组分，供今后在免疫诊断和防治东毕吸虫的应用，本试验应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ首次对绒山羊体内寄生的土耳其斯坦东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组进行了分析。结果表明该抗原有１７条多肽带，其分子量范围２５－９３ＫＤ。其中主带７条，分别为２９，３０，３８，４０，６７，７８，９１ＫＤ。     

绵羊胃肠道内发现东毕吸虫

东毕吸虫(orientobilharzia)因寄生于动物血管内故称血吸虫。1984年4月在酒泉县调查绵、山羊寄生虫的过程中,在3只绵羊的真胃、小肠和大肠内发现东毕吸虫96个(成对),其中以小肠寄生最多。这些绵羊的肠系膜静脉内均寄生有程氏东毕吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫,但以程氏东毕吸虫居多。     

大庆地区绵羊,山羊中首见土耳其斯坦东毕吸虫病

羊土耳其斯坦东毕吸虫病是由寄生于羊门脉和肠系膜静脉内的土耳其斯坦东毕吸虫引起的,对发展养殖业危害极大的一种血吸虫病。以往一直认为大庆地区无家畜血吸虫病的发生,但１９９８年１２月２日到１９９９年３月８日,通过外检,首次对１个单位和４家养羊户送检的３只绵羊和２只山羊进行诊断,确诊为土耳其斯坦东毕吸虫病。５群羊的总饲养数为６３７只（８７～１６０只）,到送检时已死亡３１１只,死亡率高达４８．８２％（２２．６７％～７１．４３％）。现将对５群羊发病死亡情况的调查和诊断过程报道如下。１　流行病学调查１．１　发…     

黄华属植物叶表皮特征及其生物学意义

在光学显微镜下观察披针叶黄华复合体、高山黄华复合体及黄华属其它种的叶表皮特征。结果表明,表皮细胞形状、垂周壁式样及气孔器类型具有重要的分类学意义。表皮细胞形状为多边型和不规则型,垂周壁式样为平直或具波纹。黄华属植物除新疆黄华,之字枝黄华,东亚黄华,柔毛黄华上表皮无气孔外,其余的上下表皮均具气孔,气孔器类型多为不规则型,只有紫花黄华为不等细胞型,有些无规则型中稍混有不等细胞型。笔者认为气孔器类型对划分属内种上等级具有一定价值。对披针叶黄华复合体、高山黄华复合体和黄华属不同种间气孔指数方差分析结果表明,气孔指数在居群水平及不同种间变化差异极显著,气孔大小及气孔指数主要受环境因子的控制。     

镇赉县片形吸虫和东毕吸虫幼虫在螺体内发育的季节动态调查研究

对吉林省镇赉县两牧场的小土蜗(Galba pervia)和耳萝卜螺(Radix auricularia)体内片形吸虫(Fasciolas sp)、东毕吸虫(Orientobicharzia sp)幼虫做了调查。结果为,东毕吸虫尾蚴6月下旬开始从螺体内逸出,8月中旬达最高峰,9月下旬逐渐减少。片形吸虫尾蚴7月中旬开始从螺体内逸出,9月上旬达最高峰,10月上旬阳性螺逐渐减少。含两种吸虫幼虫的阳性螺率与气温和降雨量呈正相关关系;片形吸虫幼虫可以以雷蚴的形式在螺体内越冬,该地区含东毕吸虫幼虫的阳性螺率比含片形吸虫幼虫的阳性螺率高。含东毕吸虫尾蚴的阳性螺率最高达52.52%(252/480), 而含片形吸虫尾蚴的阳性螺率最高只达17.33%(52/300)。     

基于线粒体nad4基因探讨土耳其斯坦东毕吸虫的系统发生位置

为探讨土耳其斯坦东毕吸虫在血吸虫中的系统发生位置,本研究设计一对特异性引物,通过PCR方法对土耳其斯坦东毕吸虫(绵羊源)线粒体烟酰胺脱氢酶亚基Ⅳ基因(nad4)进行扩增和测序分析,并与GenBank中相关血吸虫nad4基因进行比对。结果显示,本研究克隆的该吸虫线粒体nad4基因序列大小约为1030bp,与已发表的其它血吸虫线粒体nad4基因的同源性为51.6%～66.7%,其系统发生位置属于非洲血吸虫种群。     

Rapid identification and differentiation of Fasciola hepatica and Fasciola gigantica by a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay

The present study developed and validated a species-specific loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for the rapid detection and discrimination of Fasciola hepatica and Fasciola gigantica. The LAMP assay is inexpensive, easy to perform and shows rapid reaction, wherein the amplification can be obtained in 45 min under isothermal conditions of 61 °C or 62 °C by employing a set of four species-specific primer mixtures and results can be checked through naked-eye visualization. The optimal assay conditions with no cross-reaction with other closely related trematodes (Clonorchis sinensis, Opisthorchis viverrini, Orientobilharzia turkestanicum and Schistosoma japonicum) as well as within the two Fasciola species were established. The assay was validated by examining F. gigantica DNA in the intermediate host snails and in faecal samples. The results indicated that the LAMP assay is approximately 10(4) times more sensitive than the conventional specific PCR assays. These findings indicate that this Fasciola species-specific LAMP assay may have a potential clinical application for detection and differentiation of Fasciola species, especially in endemic countries.     

Experimental infection of rhesus monkeys with Schistosoma incognitum and Orientobilharzia dattai

Rhesus monkeys inoculated subcutaneously with 800-2500 cercariae of Schistosoma incognitum did not yield adult worms. Percutaneous exposures, however, resulted in the presence of adult flukes 21-35 days post infection. The infection became very mild (0-4 flukes) 45-100 days after exposure and no eggs were excreted. Monkeys percutaneously exposed to cercariae of Orientobilharzia dattai and treated with prednisolone yielded a very small number of flukes 22 days after exposure while non treated controls yielded no adult worms.     

土耳其东毕吸虫原肌球蛋白基因的克隆

根据日本血吸虫原肌球蛋白cDNA序列和曼氏血吸虫的原肌球蛋白cDNA序列M27512的保守区设计引物，采用RT-PCR方法，成功克隆了土耳其东毕吸虫的原肌球蛋白全长cDNA序列。测序结果表明，TM序列全长1125bp，5’非翻译区为1bp～124bp，3’非翻译区为980bp～1125bp，开放阅读框为125bp～979bp，编码284个氨基酸。将该序列与其他血吸虫的序列进行同源性比较，结果与埃及血吸虫的TM同源性为90％，与曼氏血吸虫、日本血吸虫的TM同源性均为88％，该基因已经提交GenBank，序列号为》N560898。     

土耳其斯坦东毕吸虫磷酸丙糖异构酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

利用RT-PCR技术从土耳其斯坦东毕吸虫（Orientobilharzia turkestanicum）成虫总RNA中扩增磷酸丙糖异构酶基因（TPI），鉴定后将目的片段与毕赤酵母表达载体pPIC9k连接，构建重组表达质粒pPIC9k-TPI，并将其电击转化到毕赤酵母GS115中，重组菌株经甲醇诱导后表达的TPI蛋白，经SDS-PAGE、Western-blotting检测，并利用葡聚糖凝胶层析柱纯化。结果显示，成功地克隆了土耳其斯坦东毕吸虫TPI；重组毕赤酵母表达了分子质量为43ku的TPI蛋白；葡聚糖凝胶层析过滤得到单一的TPI蛋白。     

多雨年份牛羊主要寄生虫病综合防制措施

由于今年我省降雨量偏多,部分地区已发生洪涝灾害,极易引发牛羊主要寄生虫病的暴发流行。为防止寄生虫病暴发造成重大经济损失,本文详细阐述了阻断牛羊主要寄生虫病传播的关键因素,并针对历年危害严重的东毕吸虫、肝片吸虫、胃肠道线虫和疥癣等几种主要寄生虫病的流行病学特点提出了综合防制措施,以期降低牛、羊主要寄生虫病的发生,提高牛、羊养殖业的经济效益。