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相似文献
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1.
本研究直接从浓缩的鸡胚尿囊液中提取H14禽流感病毒的RNA,并根据已发表的A型流感病毒株的核苷酸序列,设计一对引物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术成功地扩增了AIV的核蛋白(NP)基因,以pUC119为载体,以大肠杆菌JM83为受体菌,并通过限制性分析证实,成功地克隆了该NP基因  相似文献   

2.
禽流感病毒核蛋白基因在重组杆状病毒中的表达   总被引:11,自引:3,他引:8  
利用RT-PCR方法成功地扩增了我国禽流感病毒分离株A/Xingjiang/1/96(H14N5)的核蛋白(NP)基因,其限制性内切酶图谱和核苷酸序列与鸭源的标准H14N5毒株几乎完全一致,与其它毒株则有较大差异,说明该鸡源分离株与鸭源毒株有非常近的亲缘关系。将NP基因定向克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中,再与杆状病毒线性DNA(BAC-N-BlueDNA)共转染于Sf9昆虫细胞中,经过三次蚀斑筛选,获得重组病毒rB2。用其细胞表达产物裂解后作SDS-PAGE蛋白电泳、Western-blot和dot-ELISA,结果表明NP基因在杆状病毒系统中获得了表达。同时用表达产物作琼脂扩散试验,结果表明表达产物与现行标准禽流感琼扩抗原具有相同的生物学活性。  相似文献   

3.
为了迅捷地诊断犬瘟热病毒(CDV)感染,本研究采用及转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测犬外周血液核细胞(PBMC)中CDV核衣壳蛋白(NP)基因。以两套引物针对CDVOnderstepoort毒株NP基因的两个片段。应用RT-PCR〉以6株CDV毒株感染Vero细胞,用CDV人工感犬染的的PBMC,在这两处细胞的提的RNA中,手增NP基因片段,取得了较好的结果。在32例临床疑为CDV感染  相似文献   

4.
本研究采用PT-PCR法从禽流感A/鸡/北京/1/96(H9N2)株克隆了核蛋白(NP)基因。NP基因全长1497bp,编码498个氨基酸。将其序列与数株A型流感病毒NP序列进行比较,相互间同源性在96.6%~95.4%。这一结果为研究核酸探针和其它方法诊断禽流感奠定了基础  相似文献   

5.
根据反义RNA作用原理,以禽流感病毒(AIV)H14N5 cDNA全长及5’端235个bp为目的基因,反向插入反转录病毒载体 pLXSN中,命名为 pLXSN-NP及 pLXSN-NP,用脂质体包裹重组质粒转染包装细胞 PA317,G418筛选抗性克性,扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒RNA(vRNA),以巢式PCR方法检测,以及用包装细胞上清(重组病毒)感染滴定细胞系NIH3T3,表明已筛选出产毒的的克隆细胞质,得到重组逆转录病毒,为反义RNA抑制禽流感病毒复制的实验研究奠定了物质基础。  相似文献   

6.
家蚕核多角体病毒DNA聚合酶基因的克隆   总被引:9,自引:3,他引:6  
从家蚕核多角体病毒(BmNPV)基因组中克隆了完整的BmNPVDNA聚合酶基因。详细的限制性内切酶酶谱分析表明:BmNPVDNA聚合酶基因的限制性内切酶图谱与苜蓿尺蠖核多角体病毒(AcM-NPV)DNA的聚合酶基因图谱完全一致,且在基因组中的位置亦相似。DNA聚合酶基因的部分测序结果显示:BmNPV与AcMNPV的DNA聚合酶有高度的同源性,远高于AcMNPV和舞毒蛾核多角体病毒(LdMNPV)两者的DNA聚合酶间的同源性,说明AcMNPV和BmNPV间的亲缘关系比LdMNPV要近,从分子进化的角度来看,用表型性状进行杆状病毒科属以下的分类似乎并不适宜。  相似文献   

7.
中国农业大学动物医学院吴清民、高齐瑜等将禽流感病毒H9N2亚型毒株核蛋白(NP)基因3’端较为保守的,约350 bp的编编序列通过限制性内切酶HaeⅢ切割、分离后,用随机引物法制备 Dlgoxigenin -11-duTP标记探针。测定该探针的浓度为100μg/mL。特异性试验发现该探针只能与实验室构建的、含有NP基因的重组载体PGEM-TE-NP和pBacPAk-NP以及A到流感病毒H9N9型、N3N2亚型以及H9N3亚型毒株基因组RNA结合出现特异性的颜色反应,而与实验室常用的载休pGEM-T…  相似文献   

8.
本试验直接从细胞培养液中提取猪瘟兔化弱毒(HCLV)RNA,并根据猪瘟病毒(HCV)Alfort株和Brescia株的核苷酸序列,将EI基因分两段,设计并合成了4条引物。采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR),成功地扩增出了HCLV保护性囊膜糖蛋白EI基因。以pGEM-T和pUC19为载体,将EI基因的两个片段分别进行克隆并转化到大肠杆菌JM101。经过分析鉴定,证明所扩增的片段为HCLVEI基因  相似文献   

9.
诺氟沙星软膏的透皮吸收试验   总被引:1,自引:0,他引:1  
不同浓度氮酮(Azone)及不同浓度N-甲基-2-砒咯烷酮(NP)对诺氟沙星(Nor)体外透皮吸收试验结果表明,1%-5%(质量分数)的Azone对Nor透皮吸收均有一定促进作用,但在统计学上无显著差异,Nor累积透皮释药量与时间呈良好的线性关系,符合零级动力学过程;NP对Nor无透皮促渗透作用。  相似文献   

10.
乙脑病毒PrME基因在杆状病毒表达系统中的表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
本试验将乙型脑炎病毒(JEV)的PrM/E基因的HindⅢ-BglⅡ片段(2.1kb)插入到杆状病毒载体pAcUW31的BamHI位点,使外源基因置于多角体蛋白启动予下游,构建成转移载体pAcUW31JE,以Lipofectin作为共转染试剂,将纯化的pAcUW31JE与Bsu36I线性化的杆状病毒AcMNPV.LacZDNA共转染昆虫sf9经病毒蚀斑纯化技术和X-gal与中性红双重染色技术,随机  相似文献   

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