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相似文献
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1.
间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件   总被引:2,自引:0,他引:2  
禽流感病毒(AIV)感染的鸡胚尿囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯AIV,纯化的AIV经NP40处理并反复冻融,即为AIELISA抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板。将健康鸡IgG提纯后免疫兔,制备兔抗鸡IgG,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG。确立了间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测禽流感抗体的最适工作条件,即:抗原包被浓度1.9~3.8μg/ml,每孔100μl,4℃冰箱过夜;用含0.5%牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液,37℃封闭60分钟;待检血清最佳稀释度为180~1640,作用60分钟;酶标抗体作12000稀释,作用60分钟。根据对52份SPF鸡血清的检测结果制定了判定标准。  相似文献   

2.
用单抗2B4包被ELISA微孔反应板,将处理后的粪样和酶标兔抗LaRVIgG同时加入包被孔内孵育,置微型振荡器上振摇,建立了检测粪样中兔轮状病毒(LaRV)抗原的单抗-ELISA一步法快速诊断技术,与常规ELSIA、病毒分离培养、电镜、荧光抗体等作了实验室和临床应用比较,结果证明单抗-ELISA一步法敏感、特异、快速、简便、适于基层临床推广应用  相似文献   

3.
Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究   总被引:10,自引:3,他引:7  
用差速离心法提纯PRRS病毒,利用NC膜作为载体,在国内外首次成功建立了检测PRRS血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)。抗原包被浓度为100μg/ml,被检血清工作浓度为1:10,酶标兔抗猪IgG工作浓度为1:600。对72份北京地区猪血清分别用Dot-ELISA和IF检测,Dot-ELISA检测阳性率为33.3%,IF检测阳履率为30.6%,与IF符合率较高,对部分待检血清检测  相似文献   

4.
以SPF鸡抗新城疫病毒IgG为包被抗体,兔抗NDV vero细胞培养纯化毒IgG为第二抗体,酶标记羊抗兔IgG为指示抗体,建立了检测NDV的间接夹心ELISA,并分别以兔抗NDV鸡胚毒纯化HN糖蛋白,F糖蛋白IgG为第二抗体进行了比较试验,并对攻毒鸡外分泌物样品进行了病原检测。  相似文献   

5.
单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体IBVIgG作第二抗体,建立夹心法Dot-ELISA程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测IBV抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为0.5μg,约100个气管环半数感染量(100TOCID50),阳性检出率为96%。  相似文献   

6.
用纯化的伊氏锥虫变异表面糖蛋白(VSG)免疫大白鼠制备出抗血清,经饱和硫酸铰盐析,DE-52纤维素离子交换层析和Sepharose4B亲和层析提取VSG特异性多克隆IgG抗体(Abl)。用Abl免疫大白鼠和家兔制备出抗独特型血清。ELISA抑制试验检测结果表明,8份大白鼠抗独特型血清的抑制率高于25%。用正常大白鼠IgG致敏的醛化绵羊红细胞吸收兔抗独特型血清除去异种抗体,采用Abl-Sepharose4B亲和层析,可从每毫升兔抗独特型血清中获得97.4微克抗独特型抗体(Ab2)。经ELISA抑制试验检测表明,提取的兔抗独特型抗体(Ab2)对Abl与VSG的结合反应可产生明显的抑制效应,能识别Abl的抗原结合部位,其配位的空间构型与VSG表位具有相似性。  相似文献   

7.
禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究   总被引:48,自引:1,他引:47  
用表达禽流感病毒(AIV)核蛋白基因的杆状病毒感染Sf9昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术(rNP-ELISA)。其抗原最适包被量为0.6μg/孔,等检血清最适稀释度为1:200,酶标抗体使用浓度为1:1000。根据对140份SPF鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为OD均为阴性;检测A型AIV15个不同亚型(H1 ̄H15)毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种AIV的SPF鸡第3天即能检出抗体,到第162天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在2.9% ̄7.2%和3.4% ̄9.8%之间。对3138份鸡血清进行监测,rNP-ELISA与全病毒间接ELISA与全病毒间接ELISA(AIV-ELISA)、琼脂扩散  相似文献   

8.
单抗—ELISA一步法检测兔粪样中的轮状病毒   总被引:2,自引:0,他引:2  
用单抗2B4包被ELISA微孔反应板,将处理后的粪样和酶标兔抗LaRVIgG同时加入包被孔内孵育,置微型振荡器上振摇,建立了检测粪样中兔轮状病毒抗原的单抗-ELISA一步法快速诊断技术,与常规ELISA,病毒分离培养,电镜,荧光抗体等作了实验室和临床应用比较,结果证明单抗-ELISA-一步法第三特异,快速,简便1,适于基层临床推广应用。  相似文献   

9.
用建立的斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)法检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)抗原,确定兔抗IBV血清工作浓度为1:400,SPA-胶体金探针的工作浓度为1:80,该法对纯化IBV抗原的最低检出量为0.4314ng/点,用Dot-IGSS与斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)同时检测15只人工感染IBV鸡的气管,肺,肾病科,IBV阳性检出率均为100%,对32份疑似IBV感染鸡病料检测,I  相似文献   

10.
以提纯鸡IgG做抗原免疫Ball/c小鼠,取鼠细胞在PEG1000作用下与小鼠骨髓细胞(Sp2/oAg14)融合,采用间接免疫荧光(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清抗体,阳性孔经有限稀法进行细胞克隆,共获得了7株分泌抗鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞(2H8、4D8、4D8、1B7、2A7、2B3、1G12、3D12)将这些细胞分别接种间系小鼠制备出腹水抗体,ELISA效价可达10^  相似文献   

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