猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗的中试生产及区域试验

按照拟定的猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗制造工艺在辽宁益康生物药品厂进行了5批该疫苗的中试生产,计15万头份,检验全部合格.在北京、河北等地选择9个猪场进行区域试验,共免疫3个品种约3万余头猪,均安全、未显现任何不良反应,跟踪观察,免疫过的猪未发生猪瘟,表明该疫苗安全有效.     

猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗保存期的测定及免疫保护试验

对添加耐热保护剂的猪瘟淋脾毒活疫苗进行保存期的测定和保存后的免疫保护试验.结果表明,研制的猪瘟淋脾毒耐热保护剂活疫苗在2～8 ℃条件下保存24个月后免疫猪,能100%抵抗猪瘟石门系强毒的攻击.     

猪瘟脾淋毒耐热保护剂活疫苗内毒素检测方法的建立与应用

依据《中华人民共和国兽药典》2005年版(一部)附录112-115和《中华人民共和国药典》2005年版(三部)ⅫE收载的细菌内毒素检测方法及指导原则进行实验。研究猪瘟脾淋毒(耐热保护剂)活疫苗对细菌内毒素检查试验的干扰情况,并建立其内毒素检测方法。结果猪瘟耐热保护剂活疫苗在10倍稀释后对灵敏度为0.25EU/ml的鲎试剂无干扰,细菌内毒素检测方法可用于猪瘟耐热保护剂活疫苗内毒素的检测。     

猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗保护剂的研究

自１９８８年我厂对干疫苗保护剂和冻干产品生产工艺进行了研究,以猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗为主进行了保护剂的筛选试验,找出一种保护剂配制方法,冻干曲线和时间及营养血清的配制新工艺。用这种方法生产的猪瘟细胞的毒冻干苗在３７℃环境中可保存１０天,在２２－２５℃条伯下可保存３５天,０－４℃条件下可保护２２个月,达到了国外同类苗的水平。     

病毒保护剂在猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞苗中的研究

将病毒保护剂运用于猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞疫苗生产中，结果表明：20％的病毒保护剂对产毒有轻微损伤作用，10％的病毒保护剂要略好于对照组，通过蛋白浓度测定证实提高22％。试验组和对照组的反复冻融试验表明对照组冻融六次即为临界点，病毒保护剂组达10次。冷冻保存期试验表明对照组保存三个月合格，而病毒保护剂组可达五个月。37℃耐热试验表明对照组在8h内合格，病毒保护剂组达10h。细胞毒电镜观察试验及主要保护性抗原基因E2、E0测序比对结果表明，病毒保护剂不改变病毒粒子形态，且不产生基因突变。抗体水平和免疫攻毒试验结果表明，病毒保护剂能刺激机体早期抗体的产生，且免疫保护力坚强。     

猪瘟大兔脾淋活疫苗——诸稳康

诸稳康系福州大北农生物技术有限公司用猪瘟兔化弱毒C株接种于健康成年家兔,收获感染出现了定型热的家兔的脾脏和肠系膜淋巴结制成乳剂,加适宜稳定剂,经冷冻真空干燥制成的猪瘟疫苗．又称猪瘟兔化弱毒脾淋组织疫苗。     

猪瘟活疫苗耐热保护剂冷冻干燥技术研究

摘　要：随着猪瘟活疫苗耐热保护剂的不断应用,冻干技术的要求也越来越高。通过对冻干工艺的不断研究,采取预冻阶段快速和慢速降温,一期升华阶段选取不同温度等方法,筛选一条合适的冻干曲线,不仅缩短冻干时间,降低生产能耗,而且有利产品质量稳定,为今后耐热保护剂的冷冻干燥提供了研究方向。     

中国株猪瘟兔化弱毒克隆毒的研究

采用终点稀释单细胞微量培养法对中国株猪瘟哆化弱毒（Ｃ株）进行克隆,获１０个克隆株;保持原Ｃ株的免疫原性和其他优良特性;在某些方面并有所提高。随机取６号克隆毒（Ｃ６）进行系列试验,结果表明：（１）对牛睾丸细胞敏感,共收毒批次和合格批次为１５／１９（７９．９％）（２）用兔增殖毒共归兔６４只,发率为９０．６％,用睾丸细胞增殖毒对３８只兔热反应率为８９．４７％,（３）按“规程”安检和增大一倍量对猪均无不良     

“文易宁”猪瘟弱毒活疫苗

“文易宁”是用猪瘟病毒兔化弱毒株（C-株）接种体重15kg的健康家免，收获感染家兔的脾脏及淋巴结．制成乳剂，加入适量保护剂．经冷冻真空干燥制成。     

猪瘟耐热保护剂活疫苗(兔源)免疫效果跟踪监测分析

为了解掌握猪瘟耐热保护剂活疫苗在自然状态下的强制免疫效果,在春秋二季集中免疫之后,跟踪监测了安徽省六安市裕安区50个规模化猪场和380个散养户的仔猪血样2 140份。从监测结果看,春防猪瘟样品抗体监测阳性率为67.4%,其中规模化猪场为79.8%,散养户为56.3%;秋防猪瘟样品抗体监测阳性率为69.1%,其中B苗的抗体阳性率为70.1%(规模化猪场为81.6%,散养户为61.2%),C苗的抗体阳性率为65.8%(规模户猪场为78.5%,散养户为50.9%)。规模化猪场使用A、B疫苗后的抗体离散度均优于C苗和散养户。     

猪瘟兔化弱毒疫苗中病毒含量实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立敏感、特异的评价猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗中病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法,参照中国猪瘟石门株兔化弱毒全长序列,在猪瘟兔化弱毒活疫苗基因组5'非编码区设计1对标准品引物、1对特异性引物和1条探针,建立检测猪瘟兔化弱毒活疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法.该方法检测的敏感度达1.20×10⁵拷贝/mL;对猪繁殖与呼吸综合征、猪乙型脑炎、仔猪副伤寒和猪伪狂犬病4种活疫苗基因组扩增结果均为阴性;重复性试验结果显示,批内变异系数为0.29%～0.39%,批间变异系数为0.32%～0.61%.应用此方法对6个不同厂家生产的7种猪瘟兔化弱毒活疫苗中病毒含量进行了检测,发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量存在较大差异.结果表明,建立的猪瘟兔化弱毒疫苗实时荧光定量RT-PCR方法能特异地检测疫苗病毒含量,可用于初步评价猪瘟兔化弱毒疫苗抗原含量.     

两种脾毒浓度对猪瘟活疫苗原料兔利用率的影响

将原料兔随机分成两组（A、B）,每组各4772只。 A组接种猪瘟活疫苗种毒,每毫升含0.05 g猪瘟兔化脾毒;B组接种的种毒,每毫升含0.02 g猪瘟兔化脾毒。每组分成30个批次,每个批次确定一个反应率。结果表明,A组30个批次的平均反应率（等同利用率）为90.49%,变动幅度为±7.0%;B组的平均反应率为67.71%,变动幅度为±16.24%,差异极显著。同时,A组的变异系数低于B组,表明A组利用率批间稳定性优于B组。     

猪瘟兔化弱毒间接免疫荧光鉴定方法的建立

为快速有效测定猪瘟疫苗病毒含量,建立了猪瘟兔化弱毒(HCLV)间接免疫荧光试验(IFA)方法,并与兔体定型热试验方法进行了初步比较。试验结果表明,以冷甲醇固定ST细胞,将所选猪瘟活疫苗检验用阳性血清1:40倍稀释、荧光二抗1:32倍稀释时,IFA检测HCLV感染的ST细胞清晰、特异,检测猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒感染细胞阴性。对不同猪瘟疫苗半成品的检测结果显示,IFA测定半数组织感染量(TCID50)与兔体定型热试验测定兔体感染量(RID)具有较好的相关性,其拟合曲线为RID/m L=2.783TCID50/m L+110107.213。     

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟疫苗病毒含量

为建立一种能够快速定量检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。对GenBank登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守的5′端非编码区设计1对针对猪瘟兔化弱毒疫苗的特异性引物,扩增片段为245 bp,且不与牛病毒性腹泻病毒以及其他猪源病毒发生非特异性反应。应用实时荧光定量RT-PCR法对16份猪瘟脾淋苗和细胞苗进行定量检测,结果表明,102拷贝/μL的总RNA即能得到特异性扩增,在107~102拷贝/μL线性范围内有良好的扩增曲线,并与兔体定型热反应有良好的相关性。该法具有敏感性、特异性、重复性好等优点,可望取代传统的兔热法用于猪瘟疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供一种新的有效工具。     

IFA和IPMA方法测定猪瘟兔化弱毒病毒含量

本研究使用间接免疫荧光方法(IFA)和过氧化物酶单层试验(IPMA)测定猪瘟兔化弱毒的组织半数感染量(TCID50)。优化了两种方法的一抗使用浓度;筛选了IPMA方法中敏感、易辨识的酶作用底物。优化后的IFA和IPMA方法测定猪瘟兔化弱毒疫苗半成品和成品的TCID50,可以作为兔体感染量(RID)和猪体半数保护量(PD50)效力检验标准的补充,应用到猪瘟兔化弱毒活疫苗生产中,加强质检、质控力度。     

猪瘟兔化弱毒疫苗与我国近年猪瘟野毒的免疫保护相关性试验

２批猪瘟兔化毒睾丸细胞苗分别来自两家兽医生物药品厂，各分别免疫接种猪只，随后以５株猪瘟病毒野毒分别攻击，疫苗接种猪完全存活，对照猪完全死亡。此５株野毒分离自国内不同地区，并皆已经过细致的鉴定，以免疫荧光技术对猪扁桃体进行了活体检查，各对照猪材料上能在攻击后一周时出现病毒，而疫苗接种猪在整个观察期间未出现病毒，据此，显然可见猪瘟兔化毒细胞苗在预防国内猪瘟上极有效力     

荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系

为探讨荧光定量RT-PCR技术与传统兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系,本研究采用荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对5份猪瘟兔化弱毒细胞苗成品和6份半成品样品进行平行检测.结果表明,两种检测方法存在正相关性,最低105个病毒拷贝可以使家兔产生定型热反应,最低103个病毒拷贝可以使家兔产生轻热反应.荧光定量RT-PCR检测方法的检测过程仅需3.5h,大大缩短了猪瘟疫苗的检测时间,该方法可以补充传统的兔体定型热反应用于猪瘟兔化弱毒疫苗半成品与成品的检验.     

鸡痘耐热保护剂活疫苗的研究

选择不同基质组成保护剂与鸡痘抗原进行冻干试验，试制一种适宜鸡痘弱毒株的耐热冻干保护剂。应用耐热冻干保护剂和专用的冻干曲线，制成鸡痘耐热保护剂活疫苗，经37℃保存10d的耐老化试验，每羽份病毒含量下降0．2—0．4个滴度；疫苗在2—8℃保存24个月后，每羽份病毒含量下降0．2-0．4个滴度，且均≥10^3.0EID50／羽，具有良好的热稳定性。19万羽的田间试验证明，鸡痘耐热保护剂活疫苗安全、有效。