食品动物源沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测与分析

为了解食品动物源沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药性(Plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR),采用微量肉汤稀释法和PCR方法,检测了316株食品动物源沙门氏菌对20种抗菌药物的敏感性,以及菌株中PMQR基因的携带率.结果显示:316株沙门氏菌对20种抗菌药物呈不同程度的耐药性,95.57％菌株为多重耐药菌;316株菌中未检出qnrA、qnrC、qnrD、qnrS和qepA基因,7.91％菌株检出qnrB基因,15.19％菌株检出aac(6 ′ )-Ib-cr基因,7.91％菌株检出oqxA基因,8.86％菌株检出oqxB基因,这是首次在沙门氏菌中发现oqxAB基因;98.11％PMQR阳性菌同时携带2种及以上的耐药基因,呈8～17耐的多重耐药性,其中以qnrB和aac(6′)-Ibcr基因型为主;53株PMQR阳性菌分属于5种不同的基因型,耐药表型或耐药基因型不同的菌株却有相同的PFGE谱型.本次检测的316株食品动物源沙门氏菌耐药较为严重;菌株主要携带qnrB、aac(6 ′ )-Ib-cr及oqxAB基因;不同来源菌株存在同一耐药克隆株的流行.     

鸡源印第安纳沙门菌多重耐药性分析

采集山东不同地区鸡源沙门菌,根据Kauffmann-White方法测定分离株血清型,采用肉汤微量稀释法测试分离株对16种抗菌药物的敏感性,PCR方法检测10种耐药基因,分析耐药表型和耐药基因之间的关系。结果显示：共鉴定出沙门菌80株,其中印第安纳沙门菌60株。药敏试验证实：60株印第安纳沙门菌对阿莫西林-克拉维酸、头孢唑啉、多黏菌素、氨苄西林、多西环素和甲氧苄啶等16种抗菌药物普遍耐药。88.33%菌株多重耐药分布在12~15耐,未发现3耐以下的菌株。PCR扩增出int1,blaTEM,aac（6’）-Ib-cr,floR,catA1,tetA,strA,cmlA 8种耐药基因。超过90%的菌株携带int1,blaTEM,floR和aac（6’）-Ib-cr耐药基因。上述结果表明,耐药表型及耐药基因的符合呈现相关性。     

食品动物源沙门菌的分离鉴定及耐药性检测

为了解食品动物源沙门菌血清型分布及耐药状况.采用生化鉴定、血清学及沙门菌invA基因PCR方法对分离自不同食品动物源菌株进行沙门菌鉴定;采用微量肉汤稀释法进行菌株对20种药物的敏感性试验.结果显示,本次研究共鉴定出316株沙门菌,14个血清型,以鸡白痢、菲利斯河沙门菌和吉韦沙门菌为主;316株菌株对20种药物呈不同水平的耐药性,对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、链霉素、四环素、多西环素、奈啶酸、磺胺异噁唑等药物耐药率超过40％;95.5％的菌株呈多重耐药性;猪源、牛源菌株耐药性较禽源严重.以上情况说明,本次分离的食品动物源沙门菌血清型分布广,菌株耐药性较为严重.临床上应把生长周期长的动物体内细菌作为耐药性检测重点,在食品动物生产上应谨慎使用抗菌药物.     

四川部分区域鸽源沙门菌耐药表型及耐药基因检测

为了解四川省成都市及周边区域鸽源沙门菌的耐药表型及耐药基因携带情况,通过常规细菌分离鉴定并结合PCR方法,获得42株鸽源沙门菌,采用K-B纸片法,选取20种抗生素,对42株鸽源沙门菌进行药敏试验,并结合PCR方法对其耐药基因携带情况进行检测。结果显示:受检菌对链霉素、四环素、多西环素耐药率为88. 1%;对阿莫西林耐药率为83. 3%;对头孢拉定、氨苄西林、萘啶酸的耐药率为81. 0%。42株沙门菌皆有不同程度的多重耐药性,其中33株同时耐4种以上抗生素,占检测菌株的78. 6%(33/42),主要的耐药谱为CTX-CRO-FLO-CPIOFL-AKN。42株沙门菌喹诺酮类耐药基因aac (6')-Ib-cr检出率最高,为88. 09%(37/32);氨基糖苷类耐药基因aadA1、aph (3)Ⅱ、aac(3)Ⅱ检出率分别为80. 95%(34/42)、76. 19%(32/42)、16. 67%(7/42);β-内酰胺类耐药基因blaTEM-1、bla CMY-2检出率分别为42. 86%(18/42)、19. 04%(8/42);四环素类耐药基因tet M、tet A、tet B检出率分别为40. 4%(17/42)、38. 09%(16/42)、9. 52%(4/42);磺胺类耐药基因sul2检出率为80. 95%(34/42);喹诺酮类耐药基因qnrA检出率为38. 09%(16/42)。结果表明:四川省成都市及周边区域鸽源沙门菌存在普遍耐药,且多重耐药较为严重,耐药基因携带率高。     

大雁、斑头雁和天鹅源沙门菌的耐药性分析

研究大雁、斑头雁和天鹅源沙门菌的耐药性及其耐药基因的携带情况。采用K-B纸片法对33株大雁、斑头雁和天鹅源沙门菌进行20种抗菌药物敏感性测定,应用PCR对12种耐药基因的携带情况进行检测。结果表明,33株沙门菌分离株对阿莫西林、萘啶酸耐药性最高,分别为93.94%、87.88%,对氨苄西林(54.55%)、四环素(48.49%)、多西环素(48.49%)、卡那霉素(60.61%)、庆大霉素(48.49%)、链霉素(66.67%)耐药性比较严重,对氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星敏感。共检测到9种耐药基因,其中blaCMY-2阳性率为87.88%,qnr、aac(6′)-Ib-cr阳性率分别为17.24%、86.21%,tetA、tetB阳性率分别为45%、20%,aph(3)Ⅱ、aac(3)Ⅱ、aadA1阳性率分别为100%、10%、20%,sul2阳性率为100%,未检出blaTEM-1、tetC、tetG基因。说明大雁、斑头雁和天鹅源沙门菌严重耐药,且携带多种耐药基因。     

乌鲁木齐地区不同健康状态和饲养环境中宠物源沙门菌耐药特征分析

为探究不同健康状态和不同饲养环境下沙门菌对临床常用抗菌药物的耐药情况及耐药基因携带情况,采用琼脂稀释法对健康与患病、家养与流浪宠物粪样中分离出的99株沙门菌进行临床常用12种抗菌药物的耐药性检测;用PCR方法对获得的耐药菌株进行相关耐药基因的检测。结果:分离出的宠物源沙门菌对所有被检的抗菌药物耐药率均未超过10.0%,对头孢噻呋、安普霉素、阿米卡星、卡那霉素和硫酸庆大霉素100%敏感;患病动物源沙门菌对被检抗菌药物的耐药率高于健康动物源沙门菌,家养动物源沙门菌对被检抗菌药物的耐药率高于流浪动物源沙门菌(P<0.05)。耐药基因检测结果显示:floR的检出率为3.0%;ant(3″)-Ia、tetA、tetB检出率均为2.0%;blaTEM、oqxA、aac(6′)-Ib-cr基因检出率均为1.0%,未检出其他被检基因。结果表明,新疆乌鲁木齐市不同健康状态和不同饲养环境下宠物源沙门菌对被检抗菌药物的耐药率及耐药基因携带率低,仅有2株沙门菌存在ant(3″)-Ia+tetA+tetB 3种耐药基因共存情况。根据试验结果发现检出的耐药表型与耐药基因之间存在相关性,可根据药敏试验结果合理选用抗菌药物进行临床细菌病的治疗。     

猪场环境大肠埃希菌耐药质粒消除研究

为了解耐药质粒消除对大肠埃希菌耐药性及其他生理特性的影响,参考前期试验分离出的8株携带aac(6')-Ib质粒耐药基因的大肠埃希菌的药敏试验.选取1株耐药性最强菌株用高温及SDS进行耐药质粒消除,PCR检测aac(6')-Ib基因.结果显示,耐药质粒成功消除,耐药性消失,且细菌在不含抗生素条件下培养,耐药性消除状态可稳...     

猪源大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性以及耐药基因的检测

为指导临床合理用药,根据耐药表型和基因型研究耐氨基糖苷类药物猪源大肠杆菌的流行情况,采用K—B法检测大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性,同时用PCR技术扩增氨基糖苷类药物的耐药基因以明确其基因型。结果显示,60株临床分离菌中,耐氨基糖苷类抗生素菌株54株,耐药率为90％;aac（3）-Ⅰ基因PCR扩增均为阴性;aac（3）-Ⅱ基因检出阳性28例,阳性率为46．7％;aac（6’）-Ⅰ基因检出阳性54例,阳性率为90％。结果表明,耐氨基糖苷类药物的大肠杆菌比较普遍,氨基糖苷类耐药基因以aac（3）-Ⅱ和aac（6’）-Ⅰ为主。     

合肥地区动物源致病性大肠杆菌ESBLs和PMQR基因流行分布

从安徽省合肥地区多个养殖厂分离鉴定了65株致病性大肠杆菌,用PCR方法检测ESBLs和PMQR基因的流行分布情况,用微量肉汤稀释法测定30株ESBLs和/或PMQR阳性菌对16种抗菌药物的最小抑菌浓度.PCR结果显示:ESBLs阳性率为24.6％(16/65),分别为blaOXA(16株)、blaTEM(15株)和blaCTX-M(14株),未检出blaSHV; PMQR的阳性率为46.2％(30/65),分别为qnrA(9株)、qnrS(18株)、aac(6')-Ib～cr(28株),未检出qnrB、qnrC、qnrD和qepA;且携带ESBLs基因的阳性菌株均携带PMQR基因.首次检测出有7株大肠杆菌同时携带ES-BLs基因型(blaOXA、blaTEM、blaCTX-M)和PMQR基因型(qnrA、qnrS、aac(6')-Ib-cr).药物敏感性测定结果显示:30株携带ESBLs和/或PMQR基因的阳性大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药率为16.7％～100％,耐药谱较广,耐药性较严重.16株同时携带ESBLs和PMQR基因的阳性菌株对11种及11种以上药物耐药的菌株占87.5％,14株仅携带PMQR基因的阳性菌株对11种及11种以上药物耐药的菌株占28.5％,表明携带PMQR基因的同时携带ESBLs基因大大增强了菌株的耐药性,携带耐药基因的数量和种类与菌株的多重耐药性相关.     

15株临床分离耐药大肠杆菌耐氟喹诺酮类抗生素基因的检测与序列分析

15株动物源性耐氟喹诺酮类药物大肠杆菌进行PCR检测、测序、WDNASIS软件分析gyrA基因中的氟喹诺酮耐药决定区(QRDR)、AcrA以及编码与质粒介导的氟喹诺酮类药物耐药机制相关的qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因。结果表明,15株耐药菌中,QRDR基因在其编码第72、75、83位或第87位氨基酸均发生突变;AcrA基因未检测到氨基酸的突变;qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr耐药基因阳性菌各检测到1株,序列分析表明不存在氨基酸突变。QRDR基因编码的氨基酸4个位点发生突变,其中Ser83→Leu和Asp87→Asn 2个基因的突变均与文献报道的突变相同,双突变的7个菌株均表现为高度耐氟喹诺酮类抗生素,表明gyrA基因为大肠杆菌耐氟喹诺酮类抗生素的一个重要机制。高度耐氟喹诺酮类抗生素的菌株中有2株没有检测到氨基酸突变的存在,但是aac-(6′)-Ib-cr基因和qnrS检测为阳性,表明质粒介导的喹诺酮类耐药也可单独导致菌株的耐药。存有一个菌株gyrA基因编码的氨基酸发生突变Ser83→Leu,AcrA基因和qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′...