鸡白痢沙门菌研究进展

鸡白痢沙门菌是鸡白痢的病原,具有高度适应专一宿主的特点。它可引起雏鸡的急性全身性感染,发病率和病死率极高;成年鸡被感染后可引起体质量下降、产蛋率和孵化率降低、组织病变、白痢和生殖道畸形等,给很多国家的养鸡业带来巨大危害,并引起严重的经济损失。为了更好的预防和控制、甚至最终净化该病,需要对鸡白痢沙门菌进行深入的研究。本文从病原学及其基因组特征、流行病学、致病性及毒力基因、检测方法和防控措施等方面介绍了鸡白痢沙门菌的研究进展,并对其研究趋势进行了展望。     

鸡白痢沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

本研究采集某鸡场疑似感染鸡白痢的病死鸡组织,进行了沙门菌的分离、鉴定,以及对10种常见抗生素的药物敏感性试验.结果显示:分离株均为鸡白痢沙门菌,对阿米卡星(0％)、庆大霉素(0％)、头孢噻肟(3.70％)的耐药率较低,对链霉素(88.89％)、四环素(62.96％)、阿莫西林(51.85％)的耐药率较高;分离株至少可对...     

鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌PCR-RFLP鉴别

根据鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌flic基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约866 bp的产物,用HinplI对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌.利用该技术对1株鸡白痢沙门菌标准株及2株鸡伤寒沙门菌标准株进行分子鉴别,结果与预计的RFLP模式相符,证明该方法可行.在此基础上...     

鸡白痢沙门菌研究进展

本文就鸡白痢沙门菌的基因组学、与鸡伤寒沙门菌的鉴别方法、感染与致病机制、防治措施等方面的研究进展进行总结,以期为相关研究提供参考。     

河北省保定地区雏鸡鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性检测

为了有效防控雏鸡白痢沙门菌病,试验自保定某蛋种鸡场疑似为鸡沙门菌病雏鸡采取肝脏病料进行细菌的分离培养、生化鉴定、鸡白痢沙门菌多价血清学鉴定及沙门菌inv A基因PCR鉴定,并对分离菌进行致病性检测及对7种抗菌药物的耐药性检测。结果表明,10株分离菌的形态特征、生化特性、血清学鉴定结果符合鸡白痢沙门菌的特征,说明从病死雏鸡组织中分离出的细菌为鸡白痢沙门菌。沙门菌inv A基因PCR扩增出373 bp目的片段,进一步证实分离菌为鸡沙门菌。用分离菌株接种雏鸡,其死亡率高达90%,表明该菌株有很高的致病性。10株分离菌株对阿莫西林和青霉素耐药率达100%,对阿齐霉素的耐药率达90%,而对阿米卡星、头孢唑林和庆大霉素耐药性较弱、对氧氟沙星较为敏感。3耐菌株多重耐药比例为42.86%,4耐菌株多重耐药比例为57.14%,5耐菌株多重耐药比例为71.43%,说明雏鸡沙门菌分离株对所试抗菌药物均表现出不同程度的耐药性,且表现出多重耐药现象。本试验为鸡白痢沙门菌病的防治提供参考。     

2010～2012年苏皖两省鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

通过培养特性、生化反应、血清学试验及PCR检测,对2010年10月～2012年6月江苏、安徽两省送检的禽源病料进行鸡白痢沙门菌的分离鉴定,并对分离株进行药敏试验.结果从1 420份样品中分离鉴定出55株鸡白痢沙门菌;药敏试验结果表明,分离株对萘啶酸、羧苄青霉素、链霉素、磺胺异恶唑和氨苄西林等抗菌药物具有较高的耐药性,而对庆大霉素、头孢曲松、氯霉素和卡那霉素具有较强敏感性.上述鸡白痢沙门菌分离株中,有49株(89.09％)为多重耐药菌株,其中以四耐菌株比例最高(25.45％).本研究对于指导临床合理用药及控制鸡白痢沙门菌发生与流行具有重要的现实意义.     

鸡白痢沙门菌基因组差异片段的筛选与分析

采用抑制性消减杂交技术（SSH）对鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门菌Sg9株进行了基因组差异片段分析.结果,从C79-13株中共检出13个特异性差异片段.经同源分析,这些序列可分为3类：噬菌体相关序列、质粒相关序列和已知功能序列.这些差异片段包含一些重要的沙门菌毒力相关基因,如编码大肠杆菌素、IpaJ蛋白、尾突蛋白、切除酶的基因.结果表明,鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门茵Sg9株基因组问存在较多差异基因,这些差异片段为确定鸡白痢沙门菌特异性遗传标志,建立分子鉴别新体系提供了基础.     

鸡白痢与鸡伤寒沙门菌双重PCR方法的建立和初步应用

分析不同血清型/生物型沙门菌全基因组序列筛选出鸡白痢和鸡伤寒沙门菌特异性基因组序列,设计两对引物,建立双重PCR方法鉴别检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌不同生物型,并进行初步的临床应用。双重PCR方法结果显示,鸡白痢沙门菌显示417 bp条带,鸡伤寒沙门菌显示417 bp和636 bp两个条带,而阴性对照未出现条带,与预期设计相符。双重PCR体系对56株不同血清型沙门菌鉴定结果与细菌学分离的血清型鉴定结果完全一致,说明本试验建立的双重PCR体系特异性良好,应用上述方法检测鸡场疑似20份临床样本,结果发现8株鸡白痢沙门菌阳性,1株鸡伤寒沙门菌阳性。上述结果表明,已建立双重PCR方法特异性检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌。本试验为鸡白痢和鸡伤寒不同生物型沙门菌的检测提供了一种简洁、敏感、特异的新方法。     

鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的验证

为验证鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的准确性,本研究以3株鸡白痢、鸡伤寒沙门菌国际参考菌株和306株国内分离株为研究对象,采用5种已知的分子分型方法开展验证性实验。结果发现,基于特定基因可变区的2种分型方法具有良好的特异性,其检测结果与生化分型结果一致,而3种基于特定基因单核苷酸多态性的分型方法则出现假阳性或假阴性的结果。上述结果表明,鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的准确性仍需进一步验证。     

鸡白痢沙门菌分离株的耐药性及磺胺类耐药机制研究

采用药敏纸片法,对33株鸡白痢沙门菌进行了药敏试验,结果显示丁胺卡那、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、氟苯尼考的抑菌作用较强,所有受试菌株均对其敏感;58%～94%的受试菌株对氯霉素、新霉素、恩诺沙星和羧苄青霉素敏感;61%～88%的受试菌株对四环素、复方磺胺、磺胺异恶唑耐药。33株鸡白痢沙门菌分离株出现了多重耐药性,2耐及以上占85%,3耐及以上占66%,4耐及以上仅占27%。根据发表的序列设计了3对引物,分别扩增磺胺类耐药基因sul1、sul2和Ⅰ类整合子,所选的18个对磺胺及磺胺增效剂均耐药。分离株中94.4%(17/18)的菌株携带sul1基因,没有sul2基因,同时94.4%(17/18)的菌株携带Ⅰ类整合子,大小分别为0.7kb和1.6kb。研究表明这些鸡白痢沙门菌的耐药谱较窄,且Ⅰ类整合子在磺胺类耐药菌株的产生中起到很重要的作用。     

Inductive expression of the NOD1 signalling pathway in chickens infected with Salmonella pullorum

1. The aim of this study was to describe the role of Nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 1 (NOD1) receptor signalling in chicken.

2. Tissue-specific expression analysis of NOD1, receptor-interacting serine-threonine kinase 2 (RIPK2), nuclear factor kappa B (NF-κB) and mitogen-activated protein kinase 11 (MAPK11 or p38) by quantitative real-time PCR (qRT-PCR) revealed their wide distribution in various organs and tissues.

3. Salmonella pullorum infection activated NOD1 receptor signalling in vivo and in vitro, resulting in significant induction of downstream signalling molecules RIPK2, NF-κB/p65, MAPK11/p38 and the effector molecules IL-1b and IL-8.

4. Activation of NOD1 by its agonist bacterial γ-D-glutamyl-meso-diaminopimelic acid (iE-DAP) in HD11 cells induced the adapter molecular RIPK2 and activated the NF-κB/p65 and MAPK11/p38 pathways, resulting in an increase in IL-8 but not IL-1β. Additionally, inhibition of NOD1 using NOD1-shRNA resulted in downregulation of RIPK2, MAPK11 and IL-8, while NF-κB/p65 and IL-1β were unaltered.

5. These results highlight the important role of NOD1 receptors in eliciting the innate immune response following pathogenic invasion in chicken.     

鸡白痢沙门菌减毒候选疫苗株的环境应激评价及主要生物学特性测定

为评估鸡白痢沙门菌减毒候选疫苗株对环境应激及消毒剂的抵抗力,本研究对S6702△rfaG△csgA、S6702△rfaL△csgA、S6702△rfaG△csgA△ompR和S6702△rfaL△csgA△ompR等4种鸡白痢沙门菌双基因缺失株和三基因缺失株进行了生长曲线、生物被膜形成能力、药敏试验、环境应激试验及消毒剂的灭活效果的测定。结果显示,4株缺失株均丧失生物被膜形成能力并保留了与亲本株相似的药物敏感性。多基因缺失株对pH为4.0和8.0的培养条件较野生菌株和单基因缺失株更为敏感,呈现微耐酸和不耐碱的特性;所有菌株对54℃热处理和紫外线处理均敏感。消毒剂对实验菌株的杀灭效果显示,野生菌株和各基因缺失株均对0.01%的聚维酮碘溶液敏感,基因缺失株相比野生菌株过硫酸氢钾复合物更为敏感。因此,鸡白痢沙门菌减毒候选疫苗株对环境应激的抵抗力均有所降低,本研究为该菌后续候选疫苗株的进一步筛选奠定了基础。     

鸡白痢沙门氏菌活的非可培养状态相关基因ybbB和rh1B的鉴定

为鉴定细菌活的非可培养状态(VBNC)下的转录基因,本研究采用液体LB培养基在4℃条件下诱导鸡白痢沙门氏菌(S.pullorum) CVCC578株进入VBNC状态,并利用mRNA差异显示RT-PCR技术(DDRT-PCR)分析S.pullorum VBNC状态与正常状态所表达的差异基因.结果表明,在S.pullorum的VBNC状态下克隆得到两个转录基因片段,分别为422 bp和573 bp.序列分析表明:422bp的cDNA片段与不同沙门氏菌株的tRNA硒尿核苷合成酶(tRNA 2-selenouridine synthase)的ybbB基因的核苷酸和氨基酸同源性均为99％;573bp的cDNA片段则与不同菌株S.pullorum的ATP依赖性的RNA解旋酶基因(rh1B)的核苷酸同源性为95％～100％,氨基酸同源性为98％以上.在VBNC状态下这两个转录基因的发现,将为S.pullorum的VBNC机理研究奠定基础.     

宠物犬源沙门菌的分离鉴定及药敏试验

为分析洛阳地区宠物犬源沙门菌耐药情况,对采集的120份宠物犬肛门拭子样品进行沙门菌的分离鉴定,通过培养特性、革兰染色、生化试验、血清型检测和分子鉴定最终获得21株沙门菌。通过纸片扩散法进行23种抗菌药物敏感性试验,采用PCR检测四环素类、β-内酰胺类和磺胺类药物耐药基因共12种。药敏试验结果表明,21株沙门菌对头孢吡肟、诺氟沙星等6种药物均未表现耐药,对阿莫西林、磺胺异恶唑等17种抗菌药物表现不同程度的耐药,并出现多重耐药现象。PCR检测结果证实,耐药基因tetE、blaPSE、blaTEM、sulⅠ和sulⅡ的检出率最高。研究结果显示,洛阳地区宠物犬沙门菌的耐药情况较为严重,为防治宠物犬源沙门菌病及宠物犬临床用药提供参考。     

鸡白痢沙门氏菌CVCC578标准株VBNC研究模型的建立及鉴定

为建立活的非可培养状态(VBNC)研究模型,本研究利用液体LB和4℃联合条件对鸡白痢沙门氏菌CVCC578参考株的进行VBNC诱导,构建VBNC研究模型。同时依靠胎牛血清和程序性升温对处于该状态的菌体进行复苏,并对复苏前后的细菌进行了16SrRNA验证。结果表明:实验菌株经液体LB和4℃联合诱导后,可培养菌数在55d后降至零,总菌数在整个观察期内基本不变,而活菌数在150d后开始下降,180d后下降显著,表明实验菌株可在55d进入VBNC,而且维持时间至180d。当进入该状态后,菌体形态可由杆状变为球杆或球形,并且菌体排列可由单在变为聚集。经复苏和16SrRNA鉴定后,"变态"的细菌被证实为沙门氏菌,而非杂污染菌。该实验为规范VBNC沙门氏菌的鉴定程序以及制订相应的国家检测标准提供了实验依据。     

鸽感染鸡白痢沙门氏菌的诊断及药敏试验

无菌取病鸽的心脏、肝脏、肺脏、脾脏及肾脏等组织病料,进行细菌的分离培养与鉴定,结合临床症状和剖解病变,确诊病鸽为鸡白痢沙门氏菌感染。对分离菌株进行药敏试验,该菌对丁胺卡那、庆大霉素等敏感。     

鸡伤寒沙门菌的分离鉴定及药敏试验

为给鸡伤寒沙门菌病的防控提供理论依据与数据参考,采集疑似鸡伤寒病死鸡的肝、脾病料,进行细菌分离.根据细菌形态、培养特性、生化试验等鉴定出13株沙门菌.对分离到的菌株进行21种常用抗菌药物的敏感性试验,结果显示,分离株对阿米卡星、新霉素高度敏感,对卡那霉素、痢特灵中度敏感,而对其他药物则表现为耐药.将筛选出的阿米卡星对发...     

昆明地区鸡源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解昆明周边养鸡场的沙门氏菌耐药状况,采集昆明周边5家养殖场的50只疑似沙门氏菌病的发病鸡的肝脏和脾脏进行细菌分离,通过常规生化特性鉴定和PCR分子鉴定,然后通过药敏试验检测分离株耐药性,通过PCR技术对分离株的耐药基因进行检测。结果表明:共分离出8株沙门氏菌,8株菌的靛基质试验、尿素酶试验和VP试验结果均呈阴性,S3、S4菌株不产H2S,柠檬酸试验也呈阴性,针对沙门氏菌设计特异性引物进行扩增,得到目的条带495 bp,与预期一致;在药敏试验中,分离株对氨苄西林和头孢氨苄有较强的耐药性,对四环素中介耐药,对恩诺沙星、加替沙星、卡那霉素、庆大霉素以及氧氟沙星敏感,说明分离株已出现耐药性;在所检测的6种耐药基因中,β-内酰胺类的bla TEM-1和喹诺酮类的GyrA基因检出率为100%,四环素类的tetA基因未被检出,其他三种耐药基因aadA1、tetB和strB检出率均在50%以上,说明分离株耐药基因的携带率较高,需要引起养殖业的重视。     

Risk Factors Associated with Salmonella Status of Broiler Flocks Delivered to Grow‐Out Farms

In a prospective field observational study in the southeastern USA, we sampled gastrointestinal (GI) tracts from chicks of 65 broiler flocks delivered to conventional grow‐out farms for rearing. The flocks were hatched at seven broiler hatcheries. The mean within‐flock prevalence of Salmonella‐positive samples was 6.5% and ranged from 0% to 86.7%. Of the 65 flocks studied, 25 (38.5%) had at least one Salmonella‐positive sample. Accounting for confounding variability among the hatcheries and broiler companies, we tested whether the probability of detecting Salmonella in GI tracts of the chicks delivered was associated with certain characteristics of parent breeder flocks; hatchery production volume; hatchery ventilation system; hatchery egg‐room conditions; egg incubation, candling, hatching, eggshell and bird separation, and bird‐processing procedures; management of hatchery‐to‐farm transportation; day of week of hatch; weather conditions during transportation; or season of the hatch. Two risk factor models were adopted. The first model indicated that a greater number of parent flocks, manual separation of eggshell and bird, and a greater amount of fluff and feces on tray liners used during hatchery‐to‐farm transportation at delivery were associated with increased probability of detecting Salmonella in chick GI tracts, whereas a greater number of birds in the delivery vehicle was associated with decreased probability. The second model indicated that broiler flocks hatched on Tuesdays versus either Mondays or Thursdays (with no hatches on Wednesdays, Fridays or week‐ends), increased average hatchability of the eggs from the parent flocks, and greater amounts of fluff and feces on the transport tray liners at delivery were all associated with increased probability of detecting Salmonella in chick GI tracts. The results of this study suggest potential management decisions to lessen Salmonella contamination of broilers supplied by commercial hatcheries and areas for further research.