高通量测序研究慢性肾衰竭对宠物犬肠道菌群多样性的影响及基因功能预测分析

旨在通过高通量测序研究慢性肾衰竭（chronic renal failure,CRF）对宠物犬肠道菌群多样性的影响,并预测分析菌群的基因功能。本研究选取30只2岁健康犬,随机等分为慢性肾衰竭模型组（CRF,肾动脉结扎法制备）、假手术对照组（Sham）和健康对照组（HCG）,常规饲养,试验周期56 d。试验过程中,定期检测血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）和尿蛋白/肌酐比（UP/C）,无菌采集新鲜粪便进行细菌16S rDNA测序,分析慢性肾衰竭对犬肠道菌群结构、多样性与功能的影响,并以CRF组差异菌群为自变量进行主成分Logistic回归分析,构建菌群标志物综合指数（FMI）用于慢性肾衰竭预测。结果显示：1）从试验后第28天开始,CRF组Scr、BUN和UP/C分别显著高于自身试验前、HCG组和Sham组（P<0.05）。2） CRF组不同时间点肠道菌群有显著差异,第56天时的Chao 1指数、Shannon指数均降低,拟杆菌门（Bacteroidetes）、变形杆菌门（Proteobacteria）和放线菌门（Actinobacteria）的相对丰度增加,厚壁菌门（Firmicutes）数量减少,与0 d和28 d比较差异显著（P<0.05）,与同时间点HCB组及Sham组比较差异显著（P<0.05）。3）组间菌群LEfSe分析发现,CRF组富集了20个物种,主要包括假单胞菌属（Pseudomonas）、埃希氏菌属（Escherichia）和变形杆菌属（Proteus）等,这些物种与肠道其他菌属间多呈负相关关系;差异物种基因主要富集在氨基酸代谢、糖生物合成和代谢以及碳水化合物代谢等代谢途径。用这些差异物种构建的FMI,其ROC曲线AUC为0.788,可作为犬CRF的肠道微生物标志物。以上结果表明,慢性肾衰竭可以使犬肠道菌群多样性降低、菌群结构失调以及菌群功能改变,且CRF患犬肠道中富集的菌群可作为该病的肠道微生物标志物,以FMI预测效果最好。     

丁酸梭菌对肉鸡肠道短链脂肪酸含量和菌群多样性的影响

【目的】 探究丁酸梭菌在肉鸡消化道内的定植能力以及丁酸梭菌对肉鸡肠道短链脂肪酸含量和菌群多样性的影响。【方法】 选择90只健康状况良好的1日龄爱拔益加肉鸡,随机均分为空白组和丁酸梭菌组,每组3个重复,每个重复15只鸡。空白组灌喂生理盐水,丁酸梭菌组灌服荧光标记的丁酸梭菌,3 h及16日龄进行解剖并采集回肠上皮细胞观察荧光情况。随后另外选择30只健康状况良好的1日龄雏鸡,随机分为对照组和试验组,试验组1~6 d饲喂含丁酸梭菌的饲粮,之后饲喂基础饲粮,对照组全程饲喂基础饲粮,试验期21 d。在16和21日龄时,分别采集回肠和盲肠中段内容物,测定乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸和总短链脂肪酸含量,并进行微生物种类、物种丰度比例、菌属以及蛋白功能丰度等差异分析。【结果】 3 h及16日龄丁酸梭菌组回肠上皮细胞周围均呈现出荧光现象,表明丁酸梭菌能够定植于消化道上皮细胞。短链脂肪酸含量测定结果显示,与对照组相比,在肉鸡回肠内容物中,试验组16日龄乙酸、丙酸、异丁酸、异戊酸和戊酸含量均极显著增加（P<0.01）;21日龄丙酸、异戊酸和戊酸含量均极显著增加（P<0.01）,乙酸、异丁酸和总短链脂肪酸含量均显著增加（P<0.05）;在盲肠内容物中,试验组16日龄肉鸡丁酸和戊酸含量均极显著增加（P<0.01）,异戊酸和己酸含量显著增加（P<0.05）;21日龄丁酸和异戊酸均极显著增加（P<0.01）,乙酸、异丁酸、己酸和总短链脂肪酸均显著增加（P<0.05）。门水平上微生物种类分析发现,16日龄样本中厚壁菌门为优势菌群,丰度最高;21日龄样本中微生物种类增多,其中变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门为优势菌群,丰度较高,16和21日龄试验组的优势菌群均高于对照组。物种丰度比例分析结果显示,与对照组相比,16日龄试验组厌氧菌属的物种丰度比例显著增加（P<0.05）,而去氟球菌属、丛毛单胞菌属、肠杆菌属等7种菌属的物种丰度比例显著降低（P<0.05）;21日龄试验组铁杆菌属、毛球菌属等6种菌属的物种丰度比例显著增加（P<0.05）,变形菌属、浮霉菌属、装甲菌门GP5的物种丰度属显著降低（P<0.05）。菌属差异分析结果显示,16日龄试验组起重要作用的微生物是布劳特氏菌属,对照组起重要作用的微生物是梭状芽孢杆菌属和未分类毛螺旋菌属;21日龄试验组起重要作用的微生物是未分类拟杆菌、毛球菌属、乳酸杆菌目、乳球菌属等,对照组起重要作用的微生物是诺兰克酸杆菌GP4、丛毛单胞菌科等。菌群蛋白功能丰度分析结果显示,16日龄试验组甲基受体趋化性蛋白、谷胱甘肽S-转移酶、氨基酸转移酶亚基A的丰度均高于对照组,21日龄试验组ECF亚家族RNA聚合酶δ-70因子、丙氨酸的丰度均高于对照组。【结论】 丁酸梭菌可以在肉鸡回肠上皮细胞中定植;丁酸梭菌可增加肠道内容物中短链脂肪酸含量、微生物种类及有益菌属,提高物种丰度及功能蛋白丰度,从而促进肠道功能发挥。     

丁酸钠对肉鸡肠道pH值、微生物菌群和挥发性脂肪酸的影响研究

丁酸作为优选的短链脂肪酸能为肠道细胞直接提供能量源,在畜禽肠道保健过程中起到了极其重要的作用.本研究以1日龄AA肉雏为试验材料,分别在基础日粮中添加100g/t,200g/t和400g/t丁酸钠,研究丁酸钠对AA肉鸡肠道pH、微生物菌群和挥发性脂肪酸的影响.结果表明:随着丁酸钠添加量的增加(从100～400g/t),肉鸡消化道各段pH值均有一定程度的降低,尤其是对小肠后段及盲肠,作用效果更加明显.随着肉鸡日龄的增长,低剂量丁酸钠对肠道茵群的改善作用更加明显.不同剂量丁酸钠可增加肠道后段短链脂肪酸浓度,而且随着肉仔鸡日龄的增加,其对肠道丁酸含量的影响明显大于乙酸和丙酸.     

大薯部分替代玉米对文昌鸡盲肠微生物区系和短链脂肪酸含量的影响

本试验旨在研究大薯部分替代玉米对文昌鸡盲肠微生物区系和短链脂肪酸含量的影响,探讨大薯替代玉米作为文昌鸡饲料开发的可行性。选择288只健康、体重相近的50日龄文昌鸡母鸡,随机分成4组,每组4个重复,每个重复18只鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮;Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组为试验组,分别饲喂以大薯替代基础日粮中10%、15%、20%玉米的等能等氮试验日粮。试验期28 d。结果表明,经过14 d饲养试验,大薯替代不同比例玉米对文昌鸡盲肠微生物区系无显著影响(P>0.05),对文昌鸡盲肠内容物短链脂肪酸含量影响显著(P<0.05),其中Ⅲ组丙酸、丁酸含量显著低于对照组(P<0.05)。随着饲养期延长至28 d,大薯替代不同比例玉米对盲肠微生物区系和短链脂肪酸含量影响显著(P<0.05),其中Ⅱ组大肠杆菌数量显著低于对照组(P<0.05),Ⅲ组粪链球菌、总厌氧菌数量分别显著和极显著高于对照组(P<0.05;P<0.01);Ⅰ组丁酸和丙酸含量分别显著和极显著低于对照组(P<0.05;P<0.01)。综上所述,大薯部分替代玉米能提升盲肠有益菌群数量,但短期饲喂会降低短链脂肪酸生成,长期饲喂对短链脂肪酸生成无显著影响。在本试验条件下,建议大薯替代玉米比例以15%为宜。     

饲粮中添加丁酸梭菌和丁酸钠对产蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

试验旨在研究在产蛋鸡饲粮中添加丁酸梭菌和丁酸钠对不同品种产蛋鸡产蛋率、鸡蛋雀斑、暗斑以及蛋品质的影响。选择270日龄狼山鸡、芦花鸡、北京油鸡各320只,随机分成2组,每组8个重复,每个重复20只鸡,对照组（CON）饲喂基础饲粮,试验组（EXP）饲粮中添加100 mg/kg丁酸梭菌＋500 mg/kg丁酸钠。预饲期3 d,试验期为5周。试验结果表明,与对照组相比,①试验组狼山鸡、芦花鸡、北京油鸡产蛋率分别提高12.5%、12.0%和24.9%（P<0.01）;②试验组狼山鸡鸡蛋雀斑3级率下降34.2%（P<0.05）,芦花鸡和北京油鸡鸡蛋各级雀斑率均无显著差异（P>0.05）,狼山鸡、芦花鸡、北京油鸡鸡蛋各级暗斑率均无显著差异（P>0.05）;③试验组狼山鸡蛋重降低1.7%（P<0.05）,蛋形指数增加2.3%（P<0.05）;芦花鸡蛋重增加1.5%（P<0.05）;北京油鸡蛋白高度增加13.9%（P<0.05）,哈氏单位增加4.7%（P<0.05）。综上,在产蛋鸡基础饲粮中添加一定量的丁酸梭菌和丁酸钠,可以提高狼山鸡、芦花鸡、北京油鸡产蛋率,对改善狼山鸡鸡蛋的雀斑也有一定的作用,且有助于提高芦花鸡、北京油鸡的蛋品质。     

丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制

通过向脂多糖（LPS）诱导牛乳腺上皮细胞系（MAC-T）脂代谢紊乱模型中添加不同浓度（2、8、16 μmol·L^-1）的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。分别用1 000 ng·mL^-1 LPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面积及三酰甘油（TG）含量;用不同浓度的丁酸钠刺激MAC-T细胞12 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;试验共分为5组：对照组、LPS处理组、2 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组、8 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组和16 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组,分别对细胞TG含量、AMPK信号通路蛋白、脂代谢关键基因以及相关炎症因子进行检测。结果显示：LPS会造成MAC-T细胞总脂滴面积显著下降（P<0.05）,TG含量极显著下降（P<0.01）;不同浓度的丁酸钠对MAC-T细胞凋亡率没有影响;与对照组相比,LPS处理组TG含量极显著下降（P<0.01）、P-AMPK表达水平显著上升（P<0.05）、脂合成代谢相关基因ACC、SCD-1以及FAS mRNA表达水平均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）下降、脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上升（P<0.05）、炎症因子TNF-α和IL-6含量显著上升（P<0.05）;与LPS处理组相比,（2、8、16 μmol·L^-1）丁酸钠+LPS处理组TG含量有一定程度上升,P-AMPK表达水平下降,脂合成代谢相关基因表达水平上升,脂分解代谢相关基因表达水平有一定程度下降,炎症因子TNF-α和IL-6含量下降。本研究表明丁酸钠会通过AMPK通路激活脂合成代谢,调控TG的合成,并且对MAC-T细胞的炎症损伤具有一定的缓解作用。     

发酵香菇渣对断奶仔猪生长性能、结肠挥发性脂肪酸含量及微生物结构的影响

为研究发酵香菇渣（fermented shiitake residues,FSR）对断奶仔猪生产性能、十二指肠消化酶活性、空肠紧密连接蛋白相关基因表达、结肠挥发性脂肪酸及结肠微生物区系的影响,本研究选用100头健康的壹号土猪断奶仔猪（小耳花猪×杜洛克猪,公母各50头）,随机分为2组,每组5个重复,每个重复10头猪,进行饲养试验。对照组饲喂基础饲粮（NC组）,试验组饲喂基础饲粮+5%发酵香菇渣。试验期33 d。饲养试验结束时,从每个组中选择6头仔猪（公母各半）进行屠宰取样。检测指标包括生长性能、十二指肠黏膜消化酶活性、空肠紧密连接蛋白mRNA相对表达量、结肠挥发性脂肪酸含量和肠道微生物结构。结果显示,与对照组相比,试验组显著提高了断奶仔猪的末重和平均日增重（P<0.05）,显著降低了料重比（P<0.05）;显著提高了十二指肠黏膜胰蛋白酶和β-淀粉酶活性（P<0.05）;显著提高了结肠挥发性脂肪酸丙酸、丁酸、异丁酸和异戊酸水平（P<0.05）;显著增加了结肠纤维杆菌门（Fibrobacteres）和链球菌属（Streptococcus）的相对丰度（P<0.01;P<0.05）,对空肠紧密连接蛋白1（TJP1）和紧密连接蛋白2（TJP2）基因mRNA的表达无显著影响（P>0.05）。综上所述,饲粮中添加5%发酵香菇渣可提高断奶仔猪肠道消化酶活性,增加结肠挥发性脂肪酸含量,调节肠道微生物区系组成,有利于提高断奶仔猪的生长性能。     

痛风雏鹅肠道菌群通过TLR4/MyD88/NF-κB通路促进肾损伤的研究

旨在研究痛风雏鹅的肠道菌群对肾损伤的影响及作用机制。本研究选取具有典型痛风特征的雏鹅15只,相同日龄及生长环境下的健康雏鹅15只,利用16S rDNA测序技术分析盲肠内容物中菌群的差异;用改良苦味酸法测定血清肌酐（Cr）,用酶比色法测定血清尿酸（UA）,用脲酶-谷氨酸脱氢酶法测定血清尿素氮（BUN）;用RT-qPCR和Western blot法测定肾组织Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子（MyD88）、核转录因子-κB （NF-κB）、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子ɑ（TNF-ɑ）及白细胞介素6（IL-6）的mRNA和蛋白表达量。并将肠道菌群移植给无菌小鼠进行验证。结果显示：1）与健康雏鹅比较,痛风雏鹅肠道菌群16S rDNA测序所得操作分类单元（OTUs）数量、Chao 1指数及Shannon指数均显著降低（P<0.01）,变形菌门、埃希菌属、变形菌属及肠球菌属等细菌丰度显著增加,痛风雏鹅肠道菌群在免疫系统、细菌感染、膜传输及核苷酸代谢等代谢途径参与度较高;2）与健康雏鹅比较,痛风雏鹅肾组织中TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β、TNF-ɑ及IL-6的mRNA表达及蛋白表达均显著升高（P<0.05或P<0.01）,且这些分子表达量与Cr、BUN及UA呈正相关,与埃希菌属、变形菌属及肠球菌属等菌属丰度呈强正相关关系;3）移植痛风雏鹅肠道菌群小鼠的肾小管发生变性,肾组织TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA表达量及血中Cr、BUN、肾损伤因子-1（KIM-1）等水平显著高于移植健康雏鹅菌群的小鼠;给予移植痛风雏鹅菌群小鼠TAK-242后,可回调这些变化。综上表明,痛风雏鹅肠道菌群发生了变化,并可激活LTR4/MyD88/NF-κB通路,诱发炎症反应,促进肾损伤的发生。     

饲养方式对滩羊羔羊肌肉及脂肪组织中脂肪酸组成的影响

为探究饲养方式对滩羊羔羊肌肉和脂肪组织中脂肪酸组成的影响,试验选择24只健康且体重相近（14.16 kg±0.58 kg）的2月龄滩羊羔羊随机分成舍饲组和放牧组,每组12只,于4月龄屠宰取其背最长肌、股二头肌、膈肌、皮下脂肪、肾周脂肪、尾部脂肪,用气相色谱仪测定脂肪酸含量。结果表明：①在肌肉组织饱和脂肪酸中,与放牧组相比,舍饲组滩羊羔羊股二头肌丁酸、棕榈酸含量显著提高（P<0.05）,膈肌辛酸、月桂酸、肉豆蔻酸含量显著降低（P<0.05）。在肌肉组织不饱和脂肪酸中,与放牧组比较,舍饲组滩羊羔羊背最长肌棕榈油酸、花生四烯酸含量显著降低（P<0.05）,γ-亚麻酸、α-亚麻酸含量显著提高（P<0.05）,二十碳五烯酸（EPA）、n-3多不饱和脂肪酸（n-3 PUFA）极显著提高（P<0.01）;股二头肌花生四烯酸含量显著降低（P<0.05）,十七碳一烯酸、α-亚麻酸、EPA、n-3 PUFA含量极显著提高（P<0.01）;膈肌棕榈油酸含量显著降低（P<0.05）。②在脂肪组织饱和脂肪酸中,与放牧组比较,舍饲滩羊羔羊皮下脂肪十一碳酸、十五碳酸含量显著降低（P<0.05）,十三碳酸含量极显著降低（P<0.01）;肾周脂肪葵酸、肉豆蔻酸含量显著降低（P<0.05）,丁酸、硬脂酸含量极显著提高（P<0.01）;尾脂十一碳酸含量显著降低（P<0.05）。在脂肪组织不饱和脂肪酸中,与放牧组比较,舍饲滩羊羔羊皮下脂肪十八碳二烯酸含量极显著提高（P<0.01）,肉豆蔻油酸、棕榈油酸、γ-亚麻酸含量极显著降低（P<0.01）;肾周脂肪十八碳一烯酸、α-亚麻酸、n-3PUFA含量显著提高（P<0.05）,肉豆蔻油酸含量显著降低（P<0.05）,十七碳一烯酸、二十碳二烯酸、十八碳二烯酸含量极显著提高（P<0.01）;尾脂肉豆蔻油酸、棕榈油酸含量显著降低（P<0.05）,十八碳二烯酸含量极显著提高（P<0.01）。综上,不同饲养方式对滩羊羔羊肌肉和脂肪组织脂肪酸含量存在一定影响,舍饲滩羊羔羊股二头肌中饱和脂肪酸含量及肾周脂肪中不饱和脂肪酸含量显著高于放牧滩羊羔羊。     

添加不同水平单宁酸对绵羊体外发酵参数和甲烷产量的影响

本试验以精料、青干草和单宁酸作为发酵底物,研究添加不同水平单宁酸对绵羊体外发酵参数和甲烷产量、干物质和粗蛋白质降解率的影响,以期为体内试验筛选适宜的单宁酸浓度,为富含单宁的粗饲料资源应用于反刍动物日粮配制及减少反刍动物养殖过程种甲烷排放提供科学依据。采用体外批次培养法开展研究,发酵底物为精料、青干草和单宁酸,设置底物的精粗比为3∶7。根据单宁酸添加量分为6组,单宁酸添加量分别为0、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、3.0%,发酵时间设置为3、6、12和24 h,每个处理3个重复,测定各培养时间pH、氨氮（NH₃-N）浓度、挥发性脂肪酸（VFA）浓度、总产气量、甲烷产量、干物质和粗蛋白质降解率。结果显示,培养至3 h时,1.0%和2.0%单宁酸添加组pH显著高于对照组（P<0.05）,其他时间点各组pH无显著差异（P>0.05）;1.0%、2.0%和3.0%单宁酸添加组NH₃-N浓度显著低于对照组（P<0.05）;培养至6和24 h时,各处理组NH₃-N浓度均显著低于对照组（P<0.05）。培养至6 h时,2.0%单宁酸添加组乙酸、丙酸、丁酸和总VFA浓度均显著低于对照组（P<0.05）;培养至24 h时,1.0%、1.5%和3.0%单宁酸添加组的丙酸、丁酸和总VFA浓度均显著低于对照组（P<0.05）;各单宁酸添加组4个时间点丙酸、丁酸、总VFA浓度的平均值均显著低于对照组（P<0.05）。培养至12、24 h时,各处理组总产气量与对照组差异不显著（P>0.05）;培养至12 h时,2.0%组甲烷产量显著低于对照组、0.5%组和1.0%组（P<0.05）;培养至24 h时,2.0%和3.0%组的甲烷产量显著低于对照组（P<0.05）。因此,添加单宁酸会显著降低体外发酵的NH₃-N浓度,抑制VFA的产量,添加1.5%、2.0%的单宁酸能够显著降低瘤胃发酵甲烷产量,添加单宁酸的处理组粗蛋白质降解率显著低于对照组。     

High Throughput Sequencing to Study the Effect of Chronic Renal Failure on the Diversity and Gene Function Prediction of Gut Microbiota in Dogs

This study aimed to investigate the effect of chronic renal failure(CRF) on the gut microbiota diversity and predict the gene function of the flora. A total of 30 2-year-old dogs were selected and randomly divided into the chronic renal failure model group (CRF, established by renal artery ligation), sham operation control group (Sham) and healthy control group (HCG). All animals were fed normally during the 56 days of test period. The serum creatinine (Scr), blood urea nitrogen (BUN) and urine protein / creatinine ratio (UP/C) were detected regularly during the experiment. The effects of chronic renal failure on the structure, diversity and function of gut microbiota were analyzed according to the result of bacterial 16S rDNA sequencing from fresh feces collected without contamination. The flora markers index (FMI) was constructed based on the principal component Logistic regression analysis of different microbiota in CRF group to predict the development of chronic renal failure. The results showed that: 1) The levels of Scr, BUN and UP/C in CRF group from the start of the 28th day of the experiment were significantly higher than those of HCG group and Sham group (P<0.05), and significantly higher than that of the first day of CRF group (P<0.05). 2) Compared with those before chronic renal failure (CRF group at day 0 and 28), HCG group and Sham group, the Chao 1 diversity and Shannon diversity of gut microbiota in CRF group at day 56 were significantly lower (P<0.05), while the relative abundance of Bacteroidetes, Proteobacteria and Actinobacteria significantly increased and the number of Firmicutes significantly decreased (P<0.05). 3) LEfSe analysis showed that 20 species were enriched in CRF group, mainly including Pseudomonas, Escherichia, Proteus and so on, and most of them had negative correlation with other intestinal bacteria. Functional prediction revealed that genes of those different species were mainly enriched in amino acid metabolism, sugar biosynthesis and metabolism and carbohydrate metabolism in CRF group. The area under ROC curve (AUC) of the FMI constructed with those species enriched was 0.788, which could be used as the intestinal microbial marker for CRF in dogs. In summary, chronic renal failure can reduce the diversity of intestinal microbiota, lead to the imbalance of bacterial structure and change of bacterial function. Moreover, the enriched gut microbiota in CRF group can be used as the intestinal microbial marker of CRF in dogs, and the best prediction effect can be obtained by FMI.     

纳米硒对犬肾衰中肾组织离子转运体表达及凋亡的影响

旨在探究纳米硒作为治疗药物对腺嘌呤诱导急性肾衰犬肾组织离子转运体表达及凋亡的影响。20只体重约4 kg年龄1岁左右的贵宾犬在做基本健康检查并适应性喂养两周后,随机分为空白对照组(Control,饲喂基础日粮30 d)、急性肾衰造模组[Model,15 d基础日粮+15 d腺嘌呤75 mg·(kg·d)^-1]、常规输液治疗组[Infusion,15 d腺嘌呤75 mg·(kg·d)^-1+15 d静注葡萄糖氯化钠60 mL·(kg·d)^-1、呋塞米2~4 mg·kg^-1]、纳米硒治疗组[Nano-Se,15 d腺嘌呤,75 mg·(kg·d)^-1+15 d纳米硒0.5 mg·(kg·d)^-1]、纳米硒预防组[Prevention,15 d纳米硒0.5 mg·(kg·d)^-1+15 d腺嘌呤75 mg·(kg·d)^-1],每组4只犬。通过血液生化分析,尿常规分析,肾组织石蜡切片免疫组化,Western blot,RT-qPCR检测相关蛋白基因表达水平。结果表明：纳米硒治疗与预防有效降低肾衰特征指标CRE、BUN,恢复肾衰异常尿常规指标尿比重、尿pH,改善肾衰犬机体钙磷代谢;纳米硒治疗对比急性肾衰造模组可有效增加肾组织CaSR、WNKs mRNA与蛋白表达量(P<0.05),降低NKCC2 mRNA与蛋白表达量(P<0.05),从而减弱了急性肾衰中过度代偿的重吸收功能;纳米硒治疗较肾衰造模组肾组织促凋亡Bax、Caspase3/9 mRNA与蛋白表达量显著下调(P<0.05),降低急性肾衰中肾的凋亡效应。     

钩端螺旋体引起犬肾功能衰竭的诊断与治疗

为判定肾功能衰竭病原及引起的相关症状，并提供合理的诊治方案，本研究对一例柯基病犬进行表征、血常规、血液生化、血气及病原进行检测。结果显示，与正常参考值相比，病犬前期血常规检测中淋巴细胞比例（W-SCR）、中间细胞比例（W-MID）、中间细胞（MID）及红细胞分布宽度（RDW-CV）升高；粒细胞比例（W-LCR）、红细胞压积（PCV）、红细胞平均体积（MCV）、血红蛋白含量（MCH）、红细胞分布宽度（RDW-SD）明显降低。与正常参考值相比，生化指标中钙离子（Ca²⁺）、血糖（GLU）、尿素氮（BUN）、血磷（PHOS）、胰淀粉酶（AMYL）及肌酐（CRE）明显升高。血气指标中GLU、BUN、钾离子（K⁺）均比参考值高；钠离子（Na⁺）、氯离子（Cl^-）、二氧化碳分压（PCO₂）比参考值降低。犬钩端螺旋体抗原检测板检测结果为阳性。治疗后血常规中白细胞总数（WBC）、淋巴细胞（SCR）比正常参考值明显升高；红细胞总数（RBC）、血红蛋白（HGB）及血小板总数（PLT）则比参考值降低。经Hotelling T²对治疗前后各指标进行多变量分析，结果F=1 905 045.32，P=0.001，差异极显著；单变量检测指标中WBC、W-LCR、SCR、MID、HGB、PCV、MCV、RDW-SD差异极显著（P<0.01），W-MID、RBC、MCH及血小板分布宽度（PDW）差异显著（P<0.05）。治疗后生化检测指标中，与正常参考值相比，多数指标在正常值范围内。治疗后期病犬精神好转，经Hotelling T²与治疗前差异性分析，多变量F=85.21，P=0.081，差异不显著；单变量检验指标GLU、BUN、PHOS、AMYL及CRE差异极显著（P<0.01）。治疗后期血气指标中GLU、BUN、K⁺均比参考值高；Na⁺、Cl^-及PCO₂比参考值低，对治疗前后血气指标进行Hotelling T²差异性分析，多变量检验结果F=7 978.48，P=0.008，差异极显著；单变量检验结果中，GLU和BUN差异极显著（P<0.01）。治疗方案中，采用利尿、抗生素药物，附加补充电解质、能量、维生素及CoA等综合输液治疗，7 d后，病犬精神好转，机体机能基本恢复正常，转归期部分指标的升高属于机体机能恢复健康的一种正常体现。说明治疗方案正确，综合体液疗法是治疗该病引起肾功能衰竭有效的方法。     

Diagnosis and Therapy on Renal Failure Caused by Canine Leptospira

To determine the pathogen and related symptoms caused by renal failure,and to provide a reasonable diagnosis and treatment plan,a case of disease on Welsh Corgi dog was tested by the method of symptoms,blood routine examination,blood biochemical test,blood gas analysis and identification of pathogen.The results showed that these data of W-SCR,W-MID,MID and RDW-CV rose than normal reference index in blood routine examination before the hospitalization,respectively.Meanwhile,data of W-LCR,PCV,MCV,MCH and RDW-SD had reduced separately.These data of Ca²⁺,GLU,BUN,PHOS,AMYL and CRE were up than normal reference index in blood biochemical test,respectively.These data of GLU,BUN and K⁺ had risen respectively,nevertheless,these data of Na⁺,Cl^- and PCO₂ had lowered separately.The result was positive by the antigen testing with the Leptospira detector plate.After treatment with synthetical therapy,WBC and SCR had risen than normal references index,and data of RBC,HGB and PLT were down respectively.By the Hotelling T² analysis of the difference between before and after the therapy on blood routine index,it was significant difference in the multivariate test (F=1 905 045.32,P=0.001).These data of WBC,W-LCR,SCR,MID,HGB,PCV,MCV and RDW-SD were extremely significant differences in single variable analysis (P<0.01),and other data with significant differences were W-MID,RBC,MCH and PDW(P<0.05).But,in blood biochemical test,most of data were in normal reference values.The mental state of sick dog was recovering gradually normal than before.Multivariate test was no significant difference by the Hotelling T² analysis (F=85.21,P=0.081),but other data of GLU,BUN,PHOS,AMYL and CRE were extremely significantly different in single variable analysis (P<0.01).These data of GLU,BUN and K⁺ were up than after therapy in blood gas analysis,and data of Na⁺,Cl^- and PCO₂ reduced respectively.There were extremely significant differences in the multivariate test (F=7 978.48,P=0.008).These data with extremely significant differences were GLU and BUN in single variable analysis(P<0.01).The sick dog was recovering normal after treatment,and mental state went back to normal after 7 days therapy using the drugs of diuretics,antibiotics,rehydration electrolyte,energy medicine,vitamins and CoA.It should be noted that the part of high index of reexamination was a normal manifestation when the body was recovering to normal functioning.The method of synthetical fluid therapy was provided the correctness to treat the renal failure caused by canine Leptospira.     

硫化氢对顺铂致犬肾脏氧化损伤及炎症的缓解作用

【目的】 探究硫化氢（H₂S）对顺铂诱导的犬急性肾损伤（AKI）的影响。【方法】 将18只健康成年比格犬随机分为对照组（C）、顺铂组（cis）和硫化氢+顺铂组（H+cis）,每组6只。对照组犬经头静脉注射生理盐水,cis组犬经头静脉注射5 mg/kg顺铂,H+cis组犬在注射顺铂前30 min经头静脉注射1 mg/kg NaHS溶液,每隔24 h注射1次,一共3次。注射顺铂72 h后对犬进行麻醉,静脉采血用于检测血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）,HE染色观察各组肾脏病理变化,生化试剂盒检测犬肾脏中谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢（H₂O₂）和一氧化氮（NO）含量,实时荧光定量PCR和Western blotting法检测犬肾脏中白介素-1β（IL-1β）、IL-10、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核因子-κB （NF-κB）、环氧合酶2（COX2）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、IL-6、IL-4的相对表达量。【结果】 cis组Scr和BUN水平极显著高于对照组（P<0.01）,H+cis组Scr和Bun水平极显著低于cis组（P<0.01）。病理检测结果显示,cis组犬肾脏组织发生明显病理学变化,而H+cis组犬肾脏组织病理变化有所减轻。生化检测结果表明,与C组相比,cis组肾脏中GSH含量极显著下降（P<0.01）,H₂O₂和NO含量极显著增加（P<0.01）;与cis组相比,H+cis组犬肾脏中GSH含量极显著上升（P<0.01）,而H₂O₂和NO含量极显著下降（P<0.01）。实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果表明,与C组相比,cis组促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB和COX2的mRNA和蛋白相对表达量均显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）,而抗炎因子IL-4和IL-10的mRNA和蛋白相对表达量均极显著下降（P<0.01）;与cis组相比,H+cis组犬肾脏中抗炎因子IL-4和IL-10的mRNA及蛋白表达量极显著升高（P<0.01）,而促炎因子IL-β、IL-6、TNF-α、NF-κB和COX2的mRNA及蛋白相对表达量均极显著下降（P<0.01）。【结论】 H₂S通过提高肾脏抗氧化能力,抑制炎症因子表达来改善顺铂诱导的犬AKI。     

妊娠后期补充β-胡萝卜素对母猪乳成分和肠道菌群的影响

试验旨在探究妊娠后期饲粮中添加β-胡萝卜素对母猪初乳、常乳成分及肠道菌群的影响,并揭示肠道菌群与乳成分之间的相关性。选取胎次相近的妊娠后期二元杂交母猪48头,随机分为3组,每组16个重复,分别饲喂添加0、30和90 mg/kg β-胡萝卜素的饲粮,试验从妊娠第90天开始到分娩后第14天结束。分娩当天采集母猪初乳和粪便样品,哺乳第14天采集母猪常乳样品。对初乳中免疫球蛋白（Ig）水平以及常乳中乳成分进行测定,粪便样品通过16S rRNA测序技术进行分析。结果显示：与对照组相比,饲粮添加β-胡萝卜素有提高母猪初乳中IgM的趋势（P=0.173）,降低IgG的趋势（P=0.155）;添加30 mg/kg β-胡萝卜素显著提高了常乳中乳蛋白和尿素氮含量（P<0.05）,同时降低了乳糖含量（P<0.05）,而添加90 mg/kg β-胡萝卜素降低了常乳中总固体含量（P<0.05）。对粪便菌群进行分析发现,β-胡萝卜素上调了Eubacterium brachy group、Ruminococcaceae UCG009、Ruminococcaceae UCG014等菌群的丰度,下调了Candidatus Soleaferrea、Coprococcus 3、Lachnospiraceae NK4B4 group等菌群的丰度。相关性分析表明,Coprococcus 3与初乳中IgM水平呈显著负相关（P<0.05）,Fibrobacter与初乳中IgG、IgM水平呈显著正相关（P<0.05）;Lachnospiraceae NK4B4与常乳中乳蛋白和总固体含量呈显著正相关（P<0.05）;Ruminococcaceae UCG009与初乳中IgG水平呈显著负相关（P<0.05）。以上结果表明,β-胡萝卜素可通过调节肠道菌群影响母猪初乳及常乳的成分组成。