9株猪瘟分离毒株的致病特性

采用9株临床表现强、中、低致病特点的猪瘟野毒分离株第3代细胞毒作为种毒,按3mL/头剂量分别注射猪瘟抗原及抗体阴性猪,再用上一代传代猪发病后的血毒作为下一代接毒用种毒接种试验猪1头或2头,或上一代传代猪发病后,同圈放入1头或2头试验猪进行同居感染.如此进行,GDGZ1/95、BJCY1/96和JL1/94传至8代;FJFQ1/99传至7代;HeBHH1/95、HeNBY1/96、BJTX3/96、GXBH1/98和HeNXH2/98传至3代.结果显示:上述分离株传至3～5代过程中均表现出毒力增强的趋势,从3～5代传代到8(7)代的过程中毒力进一步增强并保持稳定,且均超过了标准石门强毒株的发病特点.所有试验猪均出现较典型的猪瘟临床症状,解剖后均表现出不同程度的病理变化,死后或解剖后的各种脏器经HCFA检查均为强阳性,这种现象进一步证实了猪是猪瘟病毒的敏感动物,各毒株之间毒力没有明显差异.对其中7株分离株传代血毒部分代次E2基因主要区域进行序列分析,结果仅GDGZ1/95株从F1～F8代中的F6代有2个核苷酸的差异,引起1个相应氨基酸的变异,其余毒株的不同代次没有碱基发生变异,初步说明猪瘟病毒基因型表现相对的稳定性.     

猪瘟病毒低毒力毒株FJFQ株的分离鉴定

从福建某猪场分离到 1 株病毒,其在PK 15细胞上的毒价为 106.5 TCID50/mL,该病毒能被猪瘟病毒高免血清所中和(效价为1∶8)。通过 RT -PCR 扩增出猪瘟病毒约250 bp的E2蛋白主要抗原编码区序列,其与几株已发表毒株序列的核苷酸及氨基酸同源性分别为79.9%~87.9%,77.7%~86.6%,与Alfort 株同属于基因二群。经本动物传3代均不表现明显的临床症状。用猪瘟兔化弱毒疫苗免疫后以此分离毒作强攻进行免疫保护相关实验,结果免疫组猪在攻毒前及攻毒后扁桃体 HCFA检测均为阴性,对照组猪扁桃体HCFA于攻毒后1周开始出现阳性结果,且一直持续到试验结束。用分离株免疫本动物后再攻石门毒, 2 头试验猪中 1 头死亡,1头出现临床症状。初步说明,所分离的病毒为猪瘟病毒(命名为CSFV- FJFQ株),可能是一株低毒力毒株,且其免疫原性不好。     

猪瘟野毒不同代次E2基因主要抗原编码区序列差异分析

利用RT－PCR及序列测定对5株猪瘟野毒14个不同代次毒株E2基因主要抗原编码区序列进行了分析。结果表明每个野毒的不同代次毒株核苷酸及氨基酸序列均呈现较高的保守性，核苷酸及氨基酸序列均无变化，核苷及氨基酸同源性均为100%。与02号野毒相比，其他4株野毒核苷酸及氨基酸同源性分别为82.0%-99.5%、84.1%-98.6%。遗传衍化分析结果表明所有毒株被分成2个基因组，每个基因组又分成2个基因亚组。03、05和22号毒株位于第一基因组，02、06号毒株位于第二基因组。每一个毒株的不同代次毒株均位于同一基因组、同一基因亚组。证实了猪瘟病毒分子结构的遗传稳定性。     

实验室人工感染诱发猪瘟野毒垂直传播

利用2头人工感染中等毒力猪瘟野毒耐过猪进行配种，诱发了猪瘟野毒垂直传播。带毒母猪于带毒后171d产下9头仔猪，其中3头为死胎，6头为木乃伊。直接免疫荧光抗体试验和RT—PCR检测，9头均为阳性。测序结果表明，3头测序仔猪中，2头仔猪所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列与公猪所接种病毒的一致；另1头仔猪所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列与公猪所接种病毒的同源性高于与母猪所接种病毒的同源性。母猪在与公猪配种前后，其所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列发生了变化，配种后与公猪所分离病毒的一致，说明猪瘟病毒在猪体内的繁殖存在一定的优势选择现象。     

实验室人工感染诱发猪瘟野毒垂直传播

利用2头人工感染中等毒力猪瘟野毒耐过猪进行配种,诱发了猪瘟野毒垂直传播.带毒母猪于带毒后171 d产下9头仔猪,其中3头为死胎,6头为木乃伊.直接免疫荧光抗体试验和RT-PCR检测,9头均为阳性.测序结果表明,3头测序仔猪中,2头仔猪所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列与公猪所接种病毒的一致;另1头仔猪所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列与公猪所接种病毒的同源性高于与母猪所接种病毒的同源性.母猪在与公猪配种前后,其所分离病毒E2基因主要抗原编码区序列发生了变化,配种后与公猪所分离病毒的一致,说明猪瘟病毒在猪体内的繁殖存在一定的优势选择现象.     

猪瘟病毒广西地方流行株GX-3/98的致病性及其与兔化弱毒株的免疫相关性

从广西南宁某猪场分离1株病毒（GX-3/98）,通过RT-PCR扩增出猪瘟病毒约250 bp的E2基因主要抗原编码区,与猪瘟石门系强毒株及兔化弱毒株核苷酸序列同源性分别为80.6%和81.1%,属于基因Ⅱ群,subgroup 2.1亚型。该毒株经本动物传3代,均不表现典型的猪瘟临床症状。用猪瘟兔化弱毒疫苗免疫后,以此分离病毒攻毒,进行免疫保护相关试验,结果免疫组100%（2/2）获得保护,且在攻毒前、后扁桃体HCFA检测均为阴性。对照组（非免疫猪）攻毒后50%（1/2）死亡,另1头猪耐过。扁桃体HCFA检测,于攻毒后1周开始出现阳性结果,且一直持续到猪死亡的第79天。本试验结果初步表明,我国现行使用的猪瘟兔化弱毒苗对目前猪瘟病毒流行毒株仍具有良好的保护力。GX-3/98流行株为1株毒力较低的猪瘟病毒,能够长时间散毒。     

猪瘟兔化弱毒抗体对不同野毒株体内外中和保护试验的相关性研究

将猪瘟兔化弱毒疫苗阳性血清与猪瘟野毒株HeBZJK 1 9 5 、GZGD 1 9 5 、HeBHH 2 9 5 、BJXC 1 9 5 、HeNBY 1 9 6 、BJCY 1 9 6 、BJSY 2 9 6 、BGTX 3 9 6 、HeNXH 2 9 8 、FJFQ 1 9 9 、JL 1 9 4 和标准石门株在PK 1 5 单层细胞上进行中和试验 , 测定了猪瘟病毒抗体在体外对野毒株的中和作用能力。结果表明 , 阳性血清对HeBZJK 1 9 5 、GZGD 1 9 5 、BJSY 2 9 6 、JL 1 9 4 和石门株的中和效价为 1 ∶ 2 5 6 , 对BGTX 3 9 6 株为 1 ∶ 1 2 8 , 对HeBHH 2 9 5 、BJCY 1 9 6 、HeNXH 2 9 8株为 1 ∶ 6 4 , 对BJXC 1 9 5 株为 1 ∶ 1 6 , 对FJFQ 1 9 9 株为 1 ∶ 8 , 对HeNBY 1 9 6 株为 1 ∶ 4 。由此表明 , 对不同毒株血清中和效价不同。另外测定了猪体内免疫抗体与免疫保护力的关系。采用 1 头份猪瘟兔化弱毒疫苗主动免疫没有母源抗体的猪 , 免疫后 1 4 d和 1 9 2 d抗体滴度 < 1 ∶ 1 6 , 攻击野毒HeNXH 2 9 8 株 , 仔猪能够完全保护。采食初乳的 2 组仔猪 , 母源抗体滴度为 < 1 ∶ 1 6 ~ 1 ∶ 6 4 , 分别免疫 2 头份和 4 头份猪瘟兔化弱毒疫苗 ,     

猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究

从全国7个省市1200多份可疑猪瘟病料中分离出9个猪瘟病毒（HCV）野毒株，编号分别为HCV－01－09。将9株野毒分别通过PK15细胞分别通过PK15细胞传6代，测其毒价，并提纯做电镜观察，结果表明：毒价范围在10^2-10^7TCID50，电镜观察均可清晰地见到直径为25－70nm，略呈圆形的病毒颗粒，具有较完整的囊膜和纤突结构。从9株野毒中选取5株经猪瘟阴性猪各传3－4代，测其毒力、病原性、致死性，结果表明：各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这5株野毒做免疫保护相关性试验，结果证明：攻毒后的疫苗接种猪100％保护，而攻毒对照猪100％死亡，且对照猪在攻毒1周后便出现猪瘟野毒感染，而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒，表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及1982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究，结果表明：猪瘟病毒可分2个基因组6个基因亚组，HCV－02、03、06、07等4个野毒株与国内的C株、石门强毒株、国外的C株、日本GPE株、ALD株、意大利Brescia株均属同一基困组，而HCV－08株及郑州株等2个野毒与法国的Alfor株同属另一个基因组。     

猪瘟野毒E2基因同源性比较

以人工感染发病猪的脾为材料提取总RNA，根据已报道的猪瘟病毒基因组序列，设计合成了2对引物，以总RNA为模板，利用反转录聚合酶链式反应（RT－PCR）、套组聚合酶链式反应（nPCR)及测序技术，对流行于我国甘肃省、陕西省、宁夏和广西自治区的5株野毒株的主要外膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定，用DNAstar软件比较分析了5株野毒之间及其与猪瘟兔化弱毒株（C－ST株）E2基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列的同源性。结果发现，5株野毒与C－ST株核苷酸序列的同源性为81．7％－83．1％，氨基酸同源性为87．3％－88．6％，表明它们之间存在较大的差异；但5株野毒之间核苷酸序列的同源性高达98．8％－99．3％，氨基酸同源性为96．6％－99．2％，表明它们之间的差异较小。     

猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法的建立

本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法;对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析,验证上述方法。结果RT-PCR扩增片段为825bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322bp和503bp 2个片段,兔化弱毒疫苗株则不能被酶切,检测出RNA的最低浓度为0.028 6μg.mL-1;8株流行野毒株都含GGGCCC序列(ApaⅠ酶切位点),2株疫苗株相应序列为GAGCCC,不能被ApaⅠ酶切;8株流行野毒株属于基因2群,2株疫苗株与HCLV遗传关系近,为基因1群。建立了可鉴别猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP检测方法,为猪瘟的防控提供有效手段。     

中国猪瘟兔化弱毒株（C-株）兔脾组织毒主要保护性抗原E2（gp55）基因序列分析

利用反转录（RT）及套式PCR（N-PCR）方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株（C-株）兔脾组织毒主要保护性抗原E2（gp55）基因，成功地将其克隆并测定了核苷酸序列，与国内外已发表的猪瘟病毒（HCV）E2基因序列比较的结果是C-株兔脾毒与C-株细胞（SK6）毒、C-株疫苗（犊牛睾丸细胞，HCLV-C）毒、HCV-SM株（石门）毒、Brescia株（荷兰）毒、Alfort株（德国）毒的E2核苷酸序列同源性分别为98.87％、98.34％、94.58％、91.00％、80.78％；氨基酸同源性分别为98.95％、97.37％、94.22％、91.60％、89.23％。对C-株兔脾毒与C-株细胞毒、经典强毒及国内流行野毒E2上的A、B、C三个中和性抗原区的氨基酸组成进行了比较，其结果为C-株兔脾毒与C-株细胞毒的差异很小甚至没有差异，而与流行野毒及经典强毒在B、C区有较大的差异。我国经典强毒石门毒与国内80年代和90年代流行毒之间有明显的差异，表明我国猪瘟流行毒株发生了变化。     

不同批猪瘟活疫苗中猪瘟兔化弱毒E2基因主要抗原编码区序列分析

对12批猪瘟活疫苗中的猪瘟兔化弱毒病毒，以RT-PCR获得了E2基因的主要编码区的大约250bp大小的节片，在DNAstar上对这些节片的211pb进行了测序，观察到这些节片的编码序列高度同源性，其核苷酸序列和氨基酸序列有98.1%-100%相同，其中9批完全一致，结果表明猪瘟兔毒疫苗株的分子结构极其稳定。     

RT-PCR检测健康猪扁桃体和流产死胎猪瘟病毒的应用及RFLP分析

本研究用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对广西部分猪场的健康猪扁桃体材料以及流产胎儿和死胎中的猪瘟病毒(HCV)进行检测.70份健康猪扁桃体材料中阳性11份,阳性率达15.7%;52份流产胎儿及死胎材料中检出阳性9份,阳性率达17.3%.表明广西猪场中有比较严重的健康带毒情况.用限制性片段长度多态性分析法(RFLP)对25份阳性材料、HCLV和石门毒的引物A1/A2的PCR产物进行分析,发现HCLV、石门强毒和广西流行野毒的RT-PCR扩增产物中均有Rsa工的一个识别序列,但HCLV上的识别序列所在位置不同.本研究表明,用引物A1/A2作RT-PCR检测,并结合RFLP分析技术可把兔化弱毒和流行野毒区分开来,这将对预防猪瘟起到十分重要的作用.     

猪瘟病毒E2基因部分核苷酸序列的遗传进化关系的研究

本研究利用RT-PCR及测序获得了16株猪瘟病毒E2基因部分核苷酸序列。利用DNAStar软件对其6株已发表的猪瘟病毒毒株序列进行了比较和分析，构建了猪瘟病毒遗传发生树。结果可以看出所绘制的遗传发生树分为2个组群，每个组群分为3个亚组群。13株猪瘟流行毒在2个组群中均有分布，猪瘟石门系强毒和C株属于同一组群、同一亚组群。70～80年代分离的4株猪瘟病毒755和Alfort株（法国）在同一组群，25%和Brescia株（意大利）是同一组群，90年代分离的9株猪瘟病毒33.3%和Alfort株（法国）在同一组群，66.7%和Brescia株（意大利）是同一组群。13株猪瘟流行毒株中7株和C株在同一组群，其中70～80年代的1株，90年代的6株。其余的6株猪瘟流行毒株均在另一组群。不同地区及不同材料C-株疫苗的E2基因的核苷酸序列有一定的差异，GPE株与中国的C株有较近的遗传进化关系，而法国的Thiverval株则与中国C株的遗传进化关系较远。本研究的结果对了解我国猪瘟分子流行病学的特点具有重要的意义。     

The development of an international reference panel of monoclonal antibodies for the differentiation of hog cholera virus from other pestiviruses.

A panel of 30 monoclonal antibodies was defined and characterized with respect to the binding capacity in immunoperoxidase assay to different strains of pestivirus. Using the panel it was possible to identify specifically all strains and isolates of hog cholera virus, hog cholera vaccines derived from 'C' strains, and most strains of bovine viral diarrhoea/border disease (BVD/BD) viruses (including those isolated from pigs). A small proportion of BVD/BD isolates from pigs and ruminants reacted only with the monoclonals specific for pestivirus group antigen. It is recommended that monoclonal typing methods be introduced into official procedures for the diagnosis of hog cholera/classical swine fever.     

猪瘟病毒兔化弱毒株与内蒙古分离野毒株(NMW)E2(gp55)基因的克隆与序列分析

采用反转录PCR（RT—PcR）和套式PCR（nested-PCR）扩增了猪瘟病毒兔化弱毒株与内蒙古野毒株的E2（gp55）基因，片段长约1200bp，将PCR产物与PMD-18-T载体相连接并克隆后，经酶切、PCR鉴定后进行序列测定和分析，结果显示二者的核苷酸同源性为89．7％，这一结果表明内蒙古近期流行的猪瘟野毒株与目前使用的疫苗株在E2基因上存在一定的差异。     

Thermal inactivation of hog cholera virus in ham.

Experiments were conducted to determine the temperatures required to inactivate hog cholera virus (HCV) in fresh ham after 1 minute and in cured and processed (canned) ham after 90 minutes. A momentary or "flash" temperature of 71 C for 1 minute caused inactivation of the virus in 15 of 15 cubes (2 cm3) of ham. Hog cholera virus was destroyed in 21 of 21 canned hams (weighing 0.91 kg each) when an internal temperature of 65 C was sustained for 90 minutes. Pigs were found to be more sensitive than tissue culture cells for detecting viable HCV in heat-processed fresh hams. Virus was isolated by tissue culture technique only from those hams exposed to temperatures below 61 C. The relative concentration of HCV in unheated cured hams of experimentally infected pigs varied over a wide range; these pigs were inoculated with the virulent Ames strain and were killed on postinfection day 6 or 7.     

猪瘟兔化弱毒疫苗与我国近年猪瘟野毒的免疫保护相关性试验

２批猪瘟兔化毒睾丸细胞苗分别来自两家兽医生物药品厂，各分别免疫接种猪只，随后以５株猪瘟病毒野毒分别攻击，疫苗接种猪完全存活，对照猪完全死亡。此５株野毒分离自国内不同地区，并皆已经过细致的鉴定，以免疫荧光技术对猪扁桃体进行了活体检查，各对照猪材料上能在攻击后一周时出现病毒，而疫苗接种猪在整个观察期间未出现病毒，据此，显然可见猪瘟兔化毒细胞苗在预防国内猪瘟上极有效力