三种氟喹诺酮类药物体外抗家蚕病原菌活性的对比实验

为筛选新的抗生素替代氯霉素防治家蚕细菌病 ,采用试管二倍稀释法研究了盐酸诺氟沙星、盐酸蒽诺沙星、盐酸环丙沙星 3种药物对家蚕黑胸败血病菌、苏云金杆菌的体外抗菌活性。盐酸诺氟沙星对黑胸败血病菌和苏云金杆菌的最低抑菌浓度MIC(mg/L)分别为 0 78和 0 19,最低杀菌浓度MBC分别为 3 12 5和 0 78。盐酸蒽诺沙星对黑胸败血病菌和苏云金杆菌的MIC(mg/L)分别为 0 78和 0 39,MBC为 3 12 5和 12 5。盐酸环丙沙星对黑胸败血病菌和苏云金杆菌的MIC(mg/L)分别为 0 78和 0 39,MBC为 12 5和 6 2 5     

利用大孔吸附树脂提取吸水链霉菌BS-112菌株的抗真菌活性物质

吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)BS-112菌株产生的活性物质对白僵菌、绿僵菌、黄曲霉菌等家蚕病原真菌具有抑制作用。研究了7种大孔吸附树脂对BS-112菌株产生的抗真菌活性物质的吸附和解吸性能,筛选出对抗真菌活性物质具有良好吸附及解吸性能的X-5树脂,这种树脂对抗真菌活性物质的饱和吸附量为73.37 mg/g,最适吸附温度为25℃,饱和吸附时间为150 min,以75%乙醇进行动态解吸,解吸率可达93.68%。BS-112菌株产生的抗真菌活性物质在低浓度下即能够较好地抑制家蚕病原白僵菌的生长,96孔板法测定的最小抑菌浓度(MIC)和杀菌浓度(MFC)分别为1.56、3.13μg/mL,并且活性物质的毒性小,以2 000 mg/kg剂量的活性物质灌胃小鼠,小鼠无急性中毒表现。     

犬肌肉注射头孢唑啉血液有效抗菌浓度检测

为探究犬血液中头孢唑啉的有效抗菌浓度及维持时间,以便为临床给药途径、剂量及给药时间间隔等提供理论依据,本试验以金黄色葡萄球菌（金葡菌）为供试菌株,用纸片扩散法（K-B法）从30种抗菌药中筛选出金葡菌敏感的抗菌药物——头孢唑啉;采用试管二倍稀释法测定所选药物的最小抑菌浓度（MIC）及最小杀菌浓度（MBC）;选用3只中华田园犬肌肉注射头孢唑啉,用微生物法检测犬血浆中头孢唑啉的有效抗菌浓度及维持时间。结果显示：头孢唑啉对金葡菌的MIC为0.25μg/mL,MBC为0.50μg/mL;肌肉注射头孢唑啉1 h后犬血药浓度达到峰值418.67μg/mL,给药后9 h血药浓度降至0.17μg/mL,小于MIC(0.25μg/mL)。这表明中华田园犬肌肉注射头孢唑啉抑制金葡菌有效浓度维持时间在8 h以上。     

CP7菌株抗菌蛋白粗提物对家蚕黑胸败血菌的抑杀作用

利用分子生物学方法和电镜技术,从多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)的一个新菌株CP7的发酵培养液中提取出抗菌蛋白,研究其抑制家蚕黑胸败血菌(Bacillussp.)的活性作用和杀菌机制。抗菌蛋白粗提液作用于黑胸败血菌后,引起菌体和芽孢变形、凹陷、空瘪等形态上的异常;对菌体细胞组织产生损伤作用,出现细胞壁皱缩、细胞膜受损、细胞器消溶、胞内物质(磷和DNA)外泄等现象;对菌体和芽孢的呼吸代谢产生影响,耗氧量在短时间内急剧增加,氧呼吸作用的持续时间缩短,最终耗氧量减小。分析认为:CP7抗菌蛋白对黑胸败血菌菌体和芽孢会产生直接的损伤作用,细胞壁和细胞膜的结构遭到破坏,严重时会导致细胞质消溶与外泄,并通过影响呼吸代谢的途径而协同起到抑菌、杀菌的作用。     

家蚕病原细菌对新蚕药盐酸恩诺沙星可溶性粉药敏性研究

为检测盐酸恩诺沙星可溶性粉对家蚕细菌病的抑制作用,采用倍比稀释法进行了体外抑菌实验,测得黑胸败血病和灵菌败血病病原菌共70个菌株的最大MIC值分别为1μg/mL、2μg/mL,低于家蚕添食本药品后最低血药浓度,表明供试菌株对该药品敏感。     

咳喘停注射液对猪气喘病的疗效试验

采用试管二倍稀释法测定咳喘停注射液对猪肺炎支原体的最小菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并进行了咳停注射液的临床疗效试验,结果表明:该制剂对猪肺炎支原体的最小抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为0 04μg/mL和0 08μg/mL;该制剂高、中、低剂量对猪气喘病的总有效率分别为100%、100%、95%,与硫酸卡那霉素相比较差异极显著(P<0 01),与青霉素加链霉素相比较差异亦显著(P<0 05)。     

吸水链霉菌BS-112菌株产生抗家蚕病原真菌活性物质的发酵培养基配方优化

为了开发利用吸水链霉菌BS-112菌株产生的抗真菌活性物质防治家蚕真菌病,在单因素试验基础上通过正交试验优化BS-112菌株分泌产生抗真菌活性物质的发酵培养基配方。优化后的最佳发酵培养基配方为:18.0g/L葡萄糖,12.0g/L玉米粉,35.0g/L黄豆饼粉,0.4g/LKH2PO4,0.8g/LMgSO4。优化发酵培养基配方后的菌株发酵液对家蚕病原绿僵菌的抗菌效价达到4916.85μg/mL,较基础培养基提高了3.08倍。分别以价格低廉的玉米粉和豆饼粉作为发酵培养基的缓效碳源和有机氮源,有利于该菌株在蚕用抗生素产业化开发的应用。     

牛乳酪蛋白来源新型抗菌肽抗菌活性的初步研究

通过胃蛋白酶水解牛乳酪蛋白得到了一种新的具有抗菌活性的多肽,并进行了初步的抗菌试验。研究采用胃蛋白酶在不同时间条件下水解酪蛋白,测定水解液及其分离物质对不同细菌的抗菌活性。结果表明:2、3、4h胃蛋白酶的酪蛋白水解产生的抗菌肽对多种细菌均具有抗菌活性,尤其是对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌具有很强的抗菌作用,其最小杀菌浓度(MBC)分别是3.69μg/mL和0.157μg/mL,最小抑菌浓度(MIC)与MBC相同。该抗菌肽具有良好的热稳定性。酪蛋白和胃蛋白酶本身无此活性,说明酪蛋白经胃蛋白酶水解可以产生抗菌活性肽。     

复方氧氟沙星注射液对仔猪链球菌病的疗效试验

采用试管二倍稀释法测定复方氧氟沙星注射液对链球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并进行了复方氧氟沙星注射液的临床试验,结果表明:该制剂对链球菌的最小抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为0 25μg/mL和0 5μg/mL,该制剂对仔猪链球菌病的总有效率为98 98%,与注射用青霉素G钾对仔猪链球菌病的总有效率差异不明显(P>0 05),与磺胺嘧啶钠注射液对仔猪链球菌病的有效率差异显著(P<0 01)。     

克蚕菌的体外抗菌活性研究

以试管稀释法、活菌计数法检测了克蚕菌体外最低抑菌浓度 (MIC)及最低杀菌浓度 (MBC)等 ,结果显示克蚕菌对苏云金杆菌、卒倒杆菌、青头败血病菌、八联球菌和产气杆菌的MIC和MBC分别为 0 5 μg/mL和 8.0 μg/mL。不同细菌接种量、不同家蚕血清含量和不同pH值对克蚕菌的抗菌活性略有影响。克蚕菌具有较强的体外抗菌活性。     

产几丁质酶菌株的筛选、鉴定及其对玉米秸秆中优势霉菌的抑制作用

本试验旨在研究利用产几丁质酶菌株抑制玉米秸秆中优势霉菌的生长,为提高秸秆利用率提供理论依据。利用胶体几丁质培养基从玉米秸秆样品中筛选出一株产几丁质酶菌株BS-1,同时将优势霉菌进行分离、纯化。通过对BS-1菌株和优势霉菌形态学观察以及16 S r DNA或18 S r DNA序列测定进行菌种鉴定。利用3,5-二硝基水杨酸比色法测定BS-1菌株发酵24、48、72、96、120、144、168 h的几丁质酶活性,以及牛津杯法检测BS-1菌株发酵液对玉米秸秆中优势霉菌的抑制作用。结果显示,玉米秸秆样品中分离出的BS-1菌株经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),4株优势霉菌分别为卷枝毛霉(Mucor circinelloides)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、米曲霉(Aspergillus oryzae)和黑曲霉(Aspergillus niger)。BS-1菌株在37℃下培养120 h产几丁质酶活性达到最高值3.23 U/m L。BS-1菌株发酵液对玉米秸秆中4株优势霉菌均有明显抑制作用,抑菌圈直径分别为18.13、18.48、17.55、15.68 mm。由此可见,筛选到的产几丁质酶枯草芽孢杆菌BS-1能够有效抑制玉米秸秆中的卷枝毛霉、尖孢镰刀菌、米曲霉、黑曲霉4株优势霉菌生长。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株及其致弱过程中的不同代次病毒的分子特征分析

为了追踪高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,HP-PRRSV）毒力逐渐减弱的分子轨迹,我们以HP-PRRSV亲本毒HuN4株及其系列传代致弱毒株为研究对象,对HuN4株及其不同代次毒株其全基因序列进行了序列比较分析。结果显示由高致病性的亲本毒HuN4株到无致病性的F112代的疫苗毒,共有65个核苷酸发生突变,其中导致41个氨基酸发生突变,这些突变的氨基酸分散性的存在于不同基因区域。与已经报道的高致病性JXA1株及其致弱毒株JXA80株相比较,可以看到两个强毒株毒力致弱的演变轨迹并不完全相同,二者之间不仅氨基酸突变数量不一致,而且突变氨基酸的位置也不完全相同,但其共同特点是由强毒株到弱毒株的变化过程中,突变率较高的结构蛋白相一致,突变率较高的非结构蛋白基本一致。分析结果提示我们决定高HP-PRRSV毒力强弱的因素可能不是由单个氨基酸的突变来决定的,推测是由一个基因或多个基因或多种因素共同造成的,同时也使我们认识到PRRSV的非结构蛋白区在病毒毒力变化中可能发挥重要作用。     

固体发酵豆粕、菜粕和棉粕的复合菌筛选

试验根据豆粕、菜粕和棉粕作为植物性蛋白饲料的营养特性,选择中性蛋白酶活较高的细菌和真菌作为发酵豆粕、菜粕和棉粕的菌种以改善豆粕、菜粕和棉粕的蛋白质品质。通过细菌和真菌的两两组合生长试验,分别筛选出适合发酵豆粕、菜粕和棉粕的最佳复合菌各一组。试验结果表明,发酵豆粕、菜粕和棉粕的最佳菌株组合为BS-2和Ao、BS-natto和Ao、BS-natto和Ao。     

一株肉鸽新城疫强毒的分离鉴定

用SPF鸡胚从病死鸽的内脏组织中分离到一株新城疫病毒(命名为GD-09株),该病毒能使鸡红细胞发生凝集,且这种凝集能被鸡新城疫标准阳性血清所抑制。经测定,其鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种的致病指数(ICPI)分别为57.6 h、1.74,表明该新城疫病毒为强毒。通过分析其融合蛋白(F)发现,F蛋白多肽裂解位点为112RRQRRF117,符合NDV强毒株裂解位点氨基酸序列。F基因分型及氨基酸同源性比较发现,GD-09株属于基因Ⅵ型,与La sota、F48E9、B1、V4等传统毒株同源性较低,与鸽源NDV同源性较高。     

紫花苜蓿根腐病原——厚垣镰刀菌的鉴定及其拮抗菌的筛选

采用常规组织分离法,对甘肃省武威市紫花苜蓿根腐病菌进行分离和致病性测定,并通过形态学特征和分子鉴定方法对致病性最强的菌株进行鉴定。结果表明,MXGF7可造成紫花苜蓿严重根腐,该病原菌大型分生孢子多纺锤形或镰刀形,大小为3.3～4.7μm×14.8～32.0μm;小型分生孢子少,纺锤形或哑铃形,大小2.9～4.2μm×8.4～18.2μm;ITS序列及镰孢菌Fu3/Fu4区基因序列分析表明,病原菌均与Fusarium chlamydosporum的相似度达99%,结合形态学特征将该病原菌鉴定为厚垣镰孢菌F.chlamydosporum。采用平板对峙法,从分离自东祁连山高寒草地牧草的123株内生细菌中筛选出61株菌株对F.chlamydosporum有拮抗效果,且抑菌率均在55%,并利用形态特征和16SrDNA基因序列分析将具有稳定拮抗作用265ZY3菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amylolique　faciens。     

一株基因Ⅵ型鸭新城疫病毒F基因的克隆及序列分析

以一株鸭新城疫病毒NDV-SS分离株基因组RNA为模板，采用RT-PCR方法扩增其F基因，并进行克隆和序列测定。通过序列分析软件将该毒株F基因氨基酸推导序列与GenBank上已发表的新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）F基因相关代表序列进行同源性及遗传进化关系分析。测序结果表明，NDV-SS株F基因全长1662 bp，编码553个氨基酸，其蛋白裂解位点氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117，符合NDV强毒株特有的序列结构特征。同源性及遗传进化关系分析结果表明，NDV-SS株为基因Ⅵ型毒株，与鸽源新城疫IT-227、Italy-2736分离株具有较高同源性和较近的亲缘关系，推测其可能是由鸽源新城疫病毒变异所产生的。     

鲍曼不动杆菌雏鸡分离株CCGGD201101的分离、鉴定及致病性研究简

试验旨在鉴定吉林省某雏鸡孵育基地病死雏鸡组织中分离出的1株致病性菌CCGGD201101株并测定其致病性。对疑似致病菌进行生理生化试验、16S rDNA测序鉴定，并人工接种昆明鼠，测定其半数致死量，验证细菌毒力。经鉴定该菌为鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）。以鲍曼不动杆菌CCGGD201101分离株为研究对象，并以鲍曼不动杆菌标准株（ATCC 19606）为对照，测得半数致死量，进一步证明鲍曼不动杆菌病死鸡分离株CCGGD201101具有较强致病性。     

Genotypic characteristics of bovine viral diarrhea virus 2 strains isolated in northern Italy

Two strains of Bovine viral diarrhea virus 2 (BVDV-2) were isolated from calves in northern Italy. Variations in the 5'-untranslated region (UTR) of the genome were studied by primary structure alignment and neighbor-joining method based phylogenetic tree analyses and by palindromic nucleotide substitutions at the three variable loci in the 5'-UTR. Genetic analysis indicated their appurtenance to genovar BVDV-2a. Nucleotide sequence at the 5'-UTR of strain BS-95-II, one of the Italian isolates from healthy calves, showed 98% homology to that of the Japanese isolate OY89, a cytopathic strain derived from cattle with mucosal disease.