仔猪水肿病标准菌株对小鼠和仔猪免疫原性的测定试验

分别以仔猪水肿病标准菌株C83684、C83905、C83527制备的灭活疫苗免疫小鼠和仔猪,14天后分别攻以致死量的强毒菌液及毒素,攻毒试验表明,疫苗免疫效果良好,三株菌株具有良好的免疫原性。     

鸡大肠杆菌Ⅰ型菌毛亚单位苗交叉保护的初步研究

含Ⅰ型菌毛的３ 个不同血清型（Ｏ１ 、Ｏ７８ 及Ｏ８８） 的菌株， 大容量培养后提取菌毛制备３ 种单价菌毛油乳苗。用１ 日龄雏鸡分别免疫３ 种单价菌毛油乳剂苗， 每雏免疫量为１２５ μｇ ， 隔离饲养至２ 周龄经气囊攻毒， 并评价疫苗的免疫原性。结果未免疫鸡出现８７－５ ％ ～１００ ％ 的死亡率， 免疫鸡用同源菌株攻毒后死亡率仅１２－５ ％ ， 用异源菌株攻毒出现３７－５％ ～６２－５ ％ 的死亡率。免疫鸡攻毒后未死亡者， 经扑杀观察， 可见在气囊、心包及肝脏的病变非常轻微， 且攻毒后比非免疫鸡能更有效地清除攻入气囊的大肠杆菌     

猪圆环病毒2型灭活疫苗安全性及免疫效力的评价

为了对制备的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)灭活疫苗进行安全性及免疫效力的评价,本试验将3批次猪圆环病毒2型灭活疫苗以2倍剂量接种PCV2阴性仔猪后,进行了安全性分析抗体检测和攻毒试验。结果显示：3批次疫苗以2倍剂量接种仔猪后,仔猪均无异常临床反应,可达到1∶1600以上,而攻毒对照组及空白对照组仔猪的抗体水平均在1∶400以下;攻毒后免疫组可以达到100%保护,攻毒对照组出现100%发病。结果表明,所制备的猪圆环病毒2型灭活疫苗对仔猪不仅安全性好,而且可以为仔猪提供有效的保护,为疫苗推广奠定了重要基础。     

鸡大肠杆菌多价1型菌毛亚单位疫苗在鸡体内的免疫原性研究

用1日龄雏鸡免疫评价了鸡大肠杆菌多价1型菌毛油乳剂苗在鸡体内的免疫原性。用含1型菌毛的3个不同血清型（O1、O78及O88）菌株,大容量培养后提取菌毛制备多价菌毛油乳剂苗。接种多价菌毛油乳剂苗的鸡用同源菌株攻毒后出现10％～11．2％的死亡率,阳性对照组鸡攻毒后出现70％～80％的死亡率;用异源菌株（O36）攻毒后,免疫鸡出现33．3％的死亡率,而未免疫阳性对照组鸡死亡率达70％。免疫鸡在气囊,心包及肝脏的病变非常轻微,且攻毒后非免疫鸡能更有效地清除侵入气囊的大肠杆菌。     

3株鸡大肠埃希菌地方分离株Ⅰ型菌毛的免疫原性

选择宁夏地区的大肠埃希菌3个优势血清型O15、O78、O18菌株,大规模培养后提取Ⅰ型菌毛,制备天然菌毛亚单位疫苗,免疫接种7日龄雏鸡后通过攻毒试验和抗体水平测定评价疫苗的免疫效果.结果表明,未免疫鸡的死亡率为40％～100％,而免疫鸡用同源菌株攻毒后死亡率为0～10％,用异源菌株攻毒后死亡率为20％～70％,免疫组鸡肝脏、心包和气囊的病变程度均显著轻于未免疫鸡,免疫鸡血清内出现高滴度的ELISA抗体.     

大肠杆菌热敏肠毒素对家兔和猪的免疫试验

用一株猪源产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的全细胞培养物加多粘菌素B制备的热敏肠毒素(LT),在4℃下保存期可达218天以上,用LT抗原加佐剂制苗,免疫家兔,其血清琼扩抗体效价可达8～32倍。以2～16倍同源菌株的LT作兔肠结扎攻毒试验,免疫兔肠道液体分泌量降低50％以上。用LT氢氧化铝苗免疫孕猪后,经临床观察其对仔猪的保护率为65.9％(P<0.01)。用琼扩法测母猪的初乳抗体,免疫组14头猜中有10头初乳抗体阳性,对照猪16头,有5头阳性.     

仔猪水肿病蜂胶佐剂多价灭活苗的研制Ⅱ免疫保护期和疫苗保存期试验

对仔猪水肿病蜂胶佐剂多价灭活苗进行了免疫产生期、免疫持续期和疫苗保存期试验。研究表明 :仔猪接种该疫苗 5～ 7d后便产生免疫力 ,到第 9天时抗体产生水平已经很高 ;以免疫仔猪攻毒后的存活率不低于 95%为标准 ,疫苗的免疫持续期可达 9个月以上 ;以物理性状合格和免疫仔猪攻毒后的存活率不低于95%为标准 ,疫苗置 4℃时保存期为 1 8个月 ,2 5℃保存 9个月为宜     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（HuN4-F112株）对类NADC30 PRRSV免疫保护效果的评价

类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)105.0TCID50/头,免疫后21 d,免疫组和攻毒对照组每头各肌注2 mL和滴鼻2 mL类NADC30 PRRSV SD53-1603株(104.0TCID50/mL)。攻毒后观察各组实验猪临床症状,可见攻毒对照组所有猪均发热,持续5 d~9 d,免疫组仅2头猪发热1 d~2 d。检测各组实验猪体重变化,结果显示,攻毒后免疫组和攻毒对照组体重增长均显著低于空白对照组(p0.001),但攻毒14 d以后,免疫组体重增长显著高于攻毒对照组(p0.05)。IDEXX ELISA测定各组猪血清中PRRSV的特异性抗体,结果显示免疫后14 d可以诱导免疫组仔猪产生良好的针对PRRSV的特异性抗体。利用荧光定量PCR测定血清和组织中的病毒载量,结果显示免疫组血清和组织中的病毒载量均极显著低于对照组(p0.0001)。对PRRSV免疫后及攻毒后各组仔猪各脏器病理学观察,结果可见攻毒对照组与免疫组相比出现明显的剖检和组织病理学变化。以上结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV可以提供一定的交叉保护,该研究为评价我国现有疫苗是否对类NADC30 PRRSV具有保护效果提供了参考依据。     

仔猪大肠杆菌病、C型产气荚膜梭菌病二联灭活疫苗的研制与应用

为了研制仔猪大肠杆菌病、C型产气荚膜梭菌病二联灭活疫苗,将大肠埃希菌C83549(K88)、C83644(K99)、C83710(987P)菌株和C型产气荚膜梭菌C59-2菌株分别接种适宜培养基,提取大肠埃希菌纤毛和C型产气荚膜梭菌外毒素,灭活和脱毒后加入冻干保护剂,冷冻干燥制成冻干灭活疫苗。该疫苗性状为类白色海绵状疏松团块,无菌检验合格,疫苗对仔猪和怀孕母猪安全,怀孕母猪免疫该疫苗后所产仔猪对大肠埃希菌和C型产气荚膜梭菌的攻毒保护率均在80%以上。临床应用结果表明,该疫苗能明显提高免疫母猪的窝平仔猪成活数。     

猪伪狂犬病活疫苗(Bartha K61株)对变异株的保护效力

本研究旨在检测仔猪免疫猪伪狂犬病活疫苗(Bartha K61株)后,抵抗伪狂犬病病毒(PRV)变异株攻击的保护效果。取4~6周龄PRV抗体阴性仔猪,接种猪伪狂犬病活疫苗,1周后用PRV变异株(AH02LA株)攻毒,检测攻毒后临床症状、直肠温度、鼻腔排毒和肺部病变。疫苗免疫组在免疫后7 d均可以检测到gB抗体。攻毒对照组攻毒后出现典型伪狂犬症状,发病率为100%,死亡率为60%,所有猪只鼻拭子均检出排毒,所有猪只肺部均有出血、淤血等病变。免疫组的猪只攻毒后,所有猪只均未出现明显临床症状,部分猪只鼻拭子检出排毒,排毒持续时间缩短,排毒量显著减少,所有免疫猪只肺部未见明显病变。结果表明:伪狂犬病活疫苗免疫猪后对PRV变异株的攻击具有良好的保护效果。     

副鸡嗜血杆菌B型分离株免疫原性的比较和疫苗株的筛选

利用分离自我国不同地区的3株B型副鸡嗜血杆菌菌株及0222标准株分别制作油乳剂灭活疫苗免疫无鸡传染性鼻炎病史的鸡群，通过攻毒保护试验和HI抗体测定，分析比较了其免疫原性，以筛选适用于制备疫苗的菌株。结果表明：不同地区的分离株在致病性和免疫原性上存在-定的差异，TJ-1株疫苗免疫鸡对TJ-1和DL-1株的保护作用可达90％和91．7％，对BJ-1株的保护率为63．6％，具有相对较好的保护作用，目前可以作为疫苗株使用。在各免疫组试验鸡中，0222株和BJ-1株免疫鸡群的血清抗体水平较高，但这可能与血凝抑制试验所采用的抗原是由0222株制备的及BJ-1株在抗原性上可能更接近于0222株有关。DL-1和TJ-1株疫苗免疫鸡的抗体水平都很低，但其免疫保护却要强于0222和BJ-1株疫苗免疫鸡。由此说明B型株因菌株之间免疫原性的差异使得HI抗原的选择难度增加。     

猪囊虫病基因工程疫苗的研制

从猪带绦虫六钩蚴ｃＤＮＡ文库中筛选目的基因并进行克隆表达,重组抗原用血清学方法和猪体免疫进行鉴定。钭具有免疫保护作用的重组抗原纯化,与免疫刺激复合物疫苗佐剂混合,制备成猪囊虫病基因工程疫苗,免疫仔猪并攻虫。该疫苗安全,无毒副作用,免疫猪减虫率９２．２％,完全保护率５５．５％,且免疫组发现的囊虫多数已死亡。     

鸡黄病毒灭活疫苗的研制及免疫效果研究

鸡黄病毒FQ—C1株经SPF鸡胚连续传40代后,检测其尿囊液毒的ELD50达到1×10^-4.33／0．1mL。将该病毒第40代SPF鸡胚液毒灭活后制备成油乳剂灭活疫苗。SPF雏鸡和蛋鸡安全性试验表明,该疫苗的安全性好,无不良影响。以该疫苗一次单剂量（1mI／只）免疫开产蛋鸡,28d后攻以鸡黄病毒强毒测定疫苗的保护效果,结果显示疫苗免疫组较未免疫组蛋鸡的产蛋率高出75．8％,产蛋保护率达93．2％以上。试验表明,本研究制备的鸡黄病毒灭活疫苗安全性好,且具有良好的免疫原性,免疫后可有效抵抗鸡黄病毒所致的产蛋骤降。     

Protective effect by cell-free antigen obtained from culture supernatant of phase I Bordetella bronchiseptica.

The cell-free antigen (CFA), with highly hemagglutination activity, obtained from the culture supernatant of Bordetella bronchiseptica was compounded with oil adjuvant to make a component vaccine (CFAV). In the immunization trial in mice, the offsprings whose mothers were immunized with CFAV escaped from death when challenged intrapleurally with virulent strain of B. bronchiseptica. The protective indices (difference of LD50 dose of the challenge strain between immunized and control groups) of the offsprings from CFAV-immunized mothers were over 3.0 in common logarithm value. Moreover, about 90% of the offsprings from CFAV-immunized mothers were negative in nasal turbinate atrophy, while over 80% of them from non-immunized mothers showed obvious turbinate atrophy when challenged intranasally with virulent strain. On the one hand, remarkable differences in the number of bacteria recovered from nostrils were observed between both test groups. It was concluded that CFAV is a very effective vaccine against B. bronchiseptica infection in animals.     

猪囊虫病基因工程疫苗的研制及应用

从猪带绦虫六钩蚴cDNA文库中筛选目的基因并进行克隆表达，重组抗原用血清学方法和猪体免疫试验进行鉴定，筛选保护性抗原基因。将具有免疫保护作用的重组抗原纯化，并与免疫刺激复合物佐剂结合，制成猪囊虫病基因工程疫苗。对工程菌的培养发酵、重组抗原的下游纯化及疫苗的配制、疫苗的中间试制进行了研究，确定了一套比较完善的生产工艺。应用昆明小鼠建立了猪囊虫病的实验动物模型，应用该模型进行上述疫苗的免疫预防试验，免疫1次和2次的免疫保护率分别为96．9％和98．4％。本动物的免疫预防试验显示，疫苗安全性好，免疫保护率达92．2％，且免疫组发现的囊虫多数已死亡。在流行区进行了田间和区域试验。免疫猪未有不良反应，囊虫感染率分别由20％降为1．1％和5．4％降为0．21％。用该疫苗对人工感染的囊虫病猪进行免疫治疗，发现在感染早期的治疗效果较好。免疫动物的体液免疫和细胞免疫的检测结果显示，该疫苗刺激机体产生抗体的时间早、持续时间长、效价高；可显著提高淋巴细胞转化率及E－RFC和Ea-RFC细胞、ANAE^ 细胞和粗粒型ANAE^ 细胞、抑制／杀伤性T细胞亚群的数量。以上结果表明，用大肠杆菌表达的重组抗原制备的猪囊虫病基因工程疫苗安全、高效，且成本低廉，可规模化生产，有成为预防猪囊虫病的一种新型生物制剂。     

鸡传染性鼻炎二介油乳剂灭活疫苗的保存期检验

应用3批鸡传染性鼻炎二价油乳剂灭活疫苗进行了保存期检验，结果表明，二价苗在4－8℃保存12个月和18个月后免疫鸡群，鸡群对A、C型强致病力菌株的保护率在二免后4周左右分别为100％和88．5％，血清SPA、阻断ELISA和HI抗体阳性检出率较高，但疫苗保存18个月后所免疫鸡的血清C型HI抗体效价的几何平均数有显著的下降。因此，该二价苗的保存期以12个月为宜。     

Evaluation of a modified-live virus vaccine administered in ovo to protect chickens against Newcastle disease.

The B1 strain of Newcastle disease virus (NDV-B1), which is nonpathogenic for newly hatched chickens, killed embryos when it was used to inoculate chicken eggs at embryonation day 18. Treatment of NDV-B1 with an alkylating agent, ethylmethane sulfonate (EMS) markedly reduced the pathogenicity of the virus for 18-day-old chicken embryos. Eggs inoculated with the modified virus (NDV-B1-EMS) hatched, and the virus was isolated from lungs and spleen of 1-day-old chickens. The hatched chickens developed antibody to NDV and were protected against challenge exposure (at 4 weeks of age) with a highly virulent GB-Texas strain of NDV. Presence of maternal antibody to NDV in embryonating eggs did not influence the protective ability of NDV-B1-EMS, which also induced protective immunity when administered to 4-week-old chickens. The 50% protective dose of NDV-B1-EMS in maternal antibody-negative and -positive embryos was calculated to be 10.77 and 17.70 embryo 50% lethal doses, respectively. Results of the study indicated that NDV-B1-EMS may be used as an embryo vaccine to protect chickens against Newcastle disease.     

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗对禽流感H9亚型流行株攻毒的保护作用

为了监测鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(LaSota株+M41株+SS/94株)对H9亚型禽流感病毒流行毒株的免疫保护效果,采用H9亚型禽流感病毒SS/94株及2009—2010年现地分离的3株H9亚型禽流感病毒对已免疫上述三联灭活苗的SPF鸡进行攻毒试验。结果显示,试验鸡以0.3 mL/只的剂量免疫三联灭活苗后21 d,其H9亚型禽流感病毒的HI抗体效价可达8～11log2,此抗体水平可抵抗2×106EID50的H9亚型禽流感病毒SS/94株、BLCN09株、WDZ09株、YT10株的攻击,攻毒保护率均达90%(9/10)以上。可见,以SS/94株作为禽流感疫苗抗原制备的三联灭活苗具有良好的免疫原性,能使免疫鸡抵抗2009—2010年期间现地分离的多株H9亚型禽流感病毒的攻击。     

鸡传染性鼻炎灭活疫苗的研制及免疫试验

用副鸡嗜血杆菌分离株A和W菌液等比例混合制成油乳剂灭活疫苗接种40日龄试验鸡,结果显示,试验鸡在接种后21d、90d时对A和W株的保护率均达100oA;接种130日龄成年鸡,接种后9个月时对A和W株的保护率达92％,效果优于商品疫苗。表明用本地区分离株制得疫苗可以对本地鸡传染性鼻炎起到很好的预防作用。     

猪瘟不同顺序零天免疫的免疫效果比较

以猪瘟兔化弱毒细胞苗分别免疫3组初生仔猪，每头1．5头剂。第1组20头先免疫，1小时后吸初乳。第2组15头，吸初乳后1小时免疫。每3组13头，吸初乳后半小时免疫。75日龄，以猪瘟弱毒单抗酶联方法测定3组动物的平均抗体（OD值）分别为0．25、0．23及0．21。80日龄，每组各随机抽出4头猪，连同非免疫对照猪6头以猪瘟石门系强毒攻击后，对照猪全死，第1组100％保护，第2组75％保护，第3组50％保护。第1组的免疫效果明显优于其他两组。