鸡细管冻精去甘油技术研究

甘油细管冻精是鸡精液冷冻最有效的方案之一,但即使是迹量甘油也会影响受精率。本试验采用11%甘油浓度细管冷冻技术,自制便携式程序冷冻装置,在鸡冻精解冻后用清洗液分步稀释清洗、离心、重悬的方法去甘油,按解冻后精液与清洗液体积设置4种比例清洗(不清洗、1∶1、1∶2与1∶4),检测活力,并进行深阴部人工输精,捡蛋孵化并统计受精率与出雏率。结果表明:①4个组精子活力依次为1∶1组(0.4±0.05)1∶2组(0.36±0.05)不清洗组(0.32±0.08)1∶4组(0.27±0.04),前3组均没有显著差异,只有1∶4组显著低于1∶1组(P0.05);②4组受精率与出雏率依次为1∶2组(61.01%±13.35%、45.9%±10.74%)1∶1组(52.37%±10.01%、45.9%±10.74%)1∶4组(41.48%±11.17%、33.35%±10.41%)未清洗组(6.29%±5.21%和5.03%±4.48%);③1∶2组显著高于1∶1组(P0.05),极显著高于1∶4组(P0.01)与未清洗组;④未清洗直接离心组极显著低于其它各组(P0.01)。因此,采用分步稀释离心去甘油,解冻精液和稀释液比例为1∶2时,在5℃以600 g离心10 min,再人工输精,能够获得较好的受精率和出雏率。     

简易冷冻装置制备鸡甘油细管冻精的优化

为优化简易装置制备鸡精液甘油细管冻精的条件,采用11%的甘油浓度、不同的熏蒸方式和熏蒸时长等条件制作细管冻精,通过测定精子活力及人工输精后的孵化效果筛选冷冻、解冻条件。结果表明:先以-15^-6℃/min的速率熏蒸1~5min后,再以-60^-25℃/min的速率熏蒸1~5min(两步均1min除外)冷冻效果最好,解冻后活力达0.8以上;以5℃的温度解冻30~60s和10℃的温度解冻15~60s的解冻效果最佳;用优化的冷冻程序、6%浓度甘油制作细管冻精,最高平均获得了77.63%的受精率和73.38%的出苗率。研究结果为鸡精液简易装置冷冻保存技术的系统化和标准化研究提供了技术支撑。     

不同输精方式和不同精液类型对母猪繁殖性能的影响

为探究不同输精方法(常规输精和深部输精)和不同精液类型(新鲜精液和冷冻精液)对母猪繁殖性能的影响。对使用新鲜精液常规输精和深部输精、冷冻精液常规输精和深部输精、以及不同剂量的冷冻精液配种效果进行比较分析。结果表明:新鲜精液采用深部输精可显著提高受孕率,总产仔数(12.71头)、活仔数(11.54头)、健仔数(11.17头)、初生重(1.65 kg)等繁殖性状均显著高于常规输精(P0.05);使用冷冻精液显著地降低了受孕率41.38%和受孕分娩率41.38%(P0.05),新鲜精液输精后代在初生窝重和健仔重等性状上表现出明显优势(P0.05);此外对冷冻精液采用深部输精技术时,适当加大输精剂量能显著提高母猪繁殖性能,总产仔数等繁殖性状能够达到常规输精的效果水平。说明实现冷冻精液技术与深部输精技术的结合能够显著提高猪的繁殖生产效率。     

公鸡不同个体冷冻精液的受精率和冷冻精液不同输精深度对受精率的影响

试验使用同一冷冻程序,单个地测得10只公鸡冷冻精液的受精率为0～60％。这一结果进一步证实了公鸡不同个体精子抗冻力的极大差异。相关分析表明,冷冻精液的受精率与输精的活精子数、冷冻精液精子的活力与原精液精子的活力都有极显著的正相关(相关系数分别为0.86和0.92)。试验还研究了用甘油作防冻剂的冷冻精液腹膜内输精、子宫内输精、深阴道输精和常规阴道输精的效果。其结果是冷冻精液子宫内输精和腹膜内输精的受精率比深阴道输精为高,而常规阴道输精没有得到受精。在本研究条件下,移除甘油的冷冻精液子宫内输精和腹膜内输精并未见提高受精率。     

淮南麻黄鸡种公鸡精液稀释和输精周期对繁殖性能的影响

为探讨淮南麻黄鸡种公鸡精液稀释和输精周期对繁殖性能的影响,比较了不同稀释比例和输精周期的精液品质、受精率及孵化率。结果表明:公鸡精液1∶1稀释和原精30 min内的精子活力均为0.7以上,且差异不显著(P0.05);淮南麻黄鸡种母鸡原精液、1∶1稀释、1∶2稀释精液输精,受精率和孵化率无显著差异(P0.05);淮南麻黄鸡输精周期为5 d和6 d对受精率和孵化率差异不显著,但输精周期为7 d量、精子密度和活力,在淮南麻黄鸡种鸡生产中,1∶1稀释的输精间隔天数为5 d较为可靠。     

稀释液中添加维生素E对宠物犬精液冷冻效果的影响

在宠物犬冷冻精液稀释液中添加质量浓度为0,200,400,600μg/mL的维生素E,以观察对精液冷冻效果的影响。结果表明:冷冻精液稀释液中添加维生素E 400μg/mL时,解冻后精子活力显著高于对照组(P0.05);畸形率极显著低于对照组(P0.01),各浓度维生素E组精子解冻后体外存活时间均极显著高于对照组(P0.01),解冻后精子顶体完整率和冻后精子运动速率(VAP、VSL、VCLL)较对照组都有所提高,但差异不显著(P0.05)。综合各项指标后表明以质量浓度为400μg/mL维生素E组的效果最好。     

水牛性控冷冻精液授精效果的研究

为优化推广水牛性控冷冻精液人工授精技术,本研究分析了不同类型、胎次、年龄的受体母牛及不输精员对水牛性控冷冻精液人工授精产犊率的影响。收集武鸣县8个村级牛人工授精点3 029头受体母水牛X性控冷冻精液人工授精产犊数据,利用卡方检验方法对所收集数据进行统计分析。结果表明:本研究3 029头受体母牛经人工授精后产犊率为44.2%(1340/3029),产母犊率为82.3%(1103/1340)。以本地水牛及杂交水牛作为受体母牛,杂交水牛人工授精产犊率极显著高于本地沼泽型水牛(P0.01)。不同年龄受体母牛人工授精产犊率差异不显著(P0.05),但存在组间差异。不同胎次受体牛人工授精产犊率差异不显著(P0.05),但存在组间差异。不同输精员人工授精产犊率差异极显著(P0.01)。本研究结果表明不同类型、年龄、胎次的受体母牛及输精员皆会影响到水牛性控冷冻精液人工授精效果。进一步加强受体母牛选择、加强输精员培训是今后水牛性控冷冻精液人工授精大范围推广应用不可忽视的环节。     

不同甘油浓度对兔精液冷冻保存的影响

本试验以不同浓度甘油对家兔精液冷冻保存的影响为研究目的,以柠-葡-卵基础液于三种浓度(6%、8%、10%)的甘油相配伍做为冷冻保存液对精液进行稀释,平衡,冷冻,解冻等处理,从而确定兔精液冷冻保存的最佳甘油浓度,得出如下结论:冷冻保护液中添加浓度为6%的甘油时,对精液进行冷冻保存、稀释、平衡,解冻后的精子活率与浓度为8%,10%的甘油冷冻效果比较差异显著.     

新疆驴冷冻精液的研究

试验旨在探究新疆驴冷冻精液的最佳稀释保护液与处理方法。以假阴道采集新疆驴精液,并用5种不同稀释保护液稀释冷冻后,选取其中较为理想的稀释液作为对照组,再通过分别添加4%、5%、6%、8%甘油处理试验,最后再选用添加甘油后冷冻效果最优的稀释液为对照来进行离心浓缩试验。结果表明：①5号稀释液冷冻—解冻精液后,其活力、顶体完整率要显著高于其他4种稀释液（P<0.05）;②以5号稀释液为对照组,添加6%甘油(7号稀释液)冷冻后,精子的活力、顶体完整率要显著高于添加4%、5%、8%甘油组（P<0.05）;③以7号稀释液为对照组,通过离心浓缩,精液在冷冻后其活力和精子顶体完整率都显著提高（P<0.05）。结果提示,将驴精液用6%葡萄糖、2%乳糖、6%甘油为主的稀释液稀释,并经500 r/min离心浓缩10 min处理后,其冷冻效果最好。     

鸡精液稀释液储存时间与稀释比例对孵化率影响的研究

为解决鸡精液稀释液必须现配现用且受精率不稳定等问题,试验采用前期改进的YHFB鸡精液稀释液以及配套稀释技术,选取精子活力与精液密度中上等的石门土公鸡,分精液稀释1∶1、1∶2、1∶1(稀释液保存2个月)与原精液4组,进行等温及时稀释,稀释精液与原精液等体积对石门土母鸡进行人工输精,输精后24 h收集种蛋,检测孵化指标。结果表明:13个稀释组与原精液组的受精率没有显著差异(P0.05),1∶2组最高;21∶2组的受精蛋健雏率与入孵蛋健雏率均显著高于1∶1组(P0.05),也高于原精液组,但差异不显著(P0.05);31∶1(稀释液保存2个月)组,与1∶1组、原精组的孵化效果无显著差异(P0.05)。因此,前期研制的稀释液配方、保存方法与稀释技术能解决鸡精液稀释液必须现配现用等问题。     

鸡囊胚细胞DMSO细管冷冻保存技术研究

旨在研究高效鸡囊胚细胞(Blastodermal cells,BCs)冷冻保存技术,为利用BCs保存禽类雌性遗传资源以及胚胎干细胞研究奠定基础。采用解冻后二乙酰荧光素(Fluorescein diacetate,FDA)染色以及培养24h后细胞贴壁率双重检测BCs活力方法,比较二甲基亚砜(DMSO)不同浓度、不同冷冻与解冻速率等对BCs的冷冻保存效果。结果表明:(1)DMSO不同浓度,20%组解冻后活力最高(0.58),与15%组差异不显著(P0.05),但与5%、10%和25%组差异极显著(P0.01);细胞复苏后贴壁率,20%组最高(30.5%),与15%组差异不显著(P0.05),与25%组差异显著(P0.05),与5%和10%组差异极显著(P0.01)。(2)冷冻速率,使用三步法冷冻,以-1℃·min-1的速率降温至-7℃,保持10min,继续降温分别至-15、-35、-55、-75℃后,投入液氮中保存,-75℃组解冻后活力最高(0.53),但与-35℃、-55℃组差异不显著(P0.05);贴壁率,各组间差异极显著(P0.01),其中-35℃组最高(36.6%)。(3)37℃水浴解冻,10s、1min、2min、3min解冻后,各组间活力差异不显著(P0.05),其中10s组最高(0.60),解冻后贴壁率,37℃水浴1min组结果最好(43.9%),与水浴2min组差异不显著(P0.05),但与水浴10s组差异显著(P0.05),与水浴3min组差异极显著(P0.01)。50℃水浴5s、20s、40s、1min解冻,5s组活力最高(0.70),与20s组差异显著(P0.05),与40s、1min组差异极显著(P0.01),解冻后贴壁率,各组间差异均极显著(P0.01),其中50℃水浴5s组最高(36.9%),50℃水浴1min组最低(5.6%)。综上表明,鸡BCs使用DMSO浓度为20%的冷冻保护剂进行细管冷冻,以-1℃·min-1的速率降温至-7℃保持10min,继续以此速率降温至-35℃后,投入液氮保存,37℃水浴1~2min解冻,BCs通过FDA染色与体外培养贴壁率双重检测均可获得较好效果。     

二甲基乙酰氨在鸡精液冷冻中的作用分析

用二甲基乙酰氨（ＤＭＡ）及甘油作为冷冻保护剂，对鸡精液进行冷冻保存，解冻后观察精子活力，并进行输精试验，发现以ＤＭＡ作为冷冻保护剂冷冻的精子解冻后活力及人工输精后的受精率都显著高于以甘油作冷冻保护剂的结果。经过毒性试验、冷冻试验及输精试验，发现ＤＭＡ的确是一种效果较好的冷冻保护剂。它在许多方面比甘油更为理想。本文还叙述了ＤＭＡ的性质及作用机理     

陶赛特羊细管冷冻精液制作保存技术的研究

我们对11组试验配方中冷冻效果较好的5组配方用同样的冷冻程序进行了冷冻稀释液、甘油浓度和解冻温度进行了研究.结果表明,2号稀释液效果最好(P<0.05)甘油浓度为6%时的冷冻效果最佳(P<0.01),在40～44℃解冻后其活力可高达0.5.     

鸡精液稀释技术推广应用的几个关键因素分析

为建立简单、稳定的鸡精液稀释技术,本试验在对鸡精液进行不同比例稀释后,对种公鸡精液镜检、混合精液温度检测、不同稀释比例的孵化率以及精液稀释技术经济效益定量计算方法等因素进行分析。结果表明:200只外观正常公鸡,镜检合格率为90%,随后混合精液批次不合格率为1.0%;原精稀释后活力极显著升高,30~40 min输精完成后活力极显著下降(P0.01),但不影响孵化率;舍温为22~33℃时,5 m L左右精液温度在(32.85±2.0)~(35.30±0.1)℃之间变化;精液稀释1∶1组、1∶2组以及原精组等量输精,受精率、入孵蛋健雏率差异均不显著(P0.05),通过建立的定量计算方法表明精液稀释后经济效益显著。     

精液剂型、输精部位对母驴情期受胎率的影响

为探索精液剂型、输精部位对母驴情期受胎率的影响,试验在母驴发情旺季(3—6月份)选取健康母驴300头随机分组,分别采用3种精液剂型(冷冻精液、4℃冷却精液、鲜精)和2个不同输精部位(子宫颈内口、子宫角深部)进行人工授精,并对其受孕情况进行统计和分析。结果表明:冷冻精液、4℃冷却精液、鲜精人工授精的情期受胎率分别为23.88%、29.67%、35.28%,其中鲜精受胎率最高,与冷冻精液之间差异显著(P0.05);子宫颈内口和子宫角深部输精的情期受胎率分别为33.33%、45.16%,组间差异不显著(P0.05),但后者的受胎率略高。说明采用鲜精剂型、子宫角深部输精的方式可以更好地提高母驴情期受胎率。     

牛血清白蛋白(BSA)对海门山羊精液冷冻效果影响的初步研究

用冷冻稀释液添加BSA进行影响海门山羊冷冻精液品质的研究.选用三个处理组进行比较试验,结果表明以添加6%BSA处理组效果最好,其冷冻解冻后精子活力高于对照组,但差异不显著(P＞0.05),而SPA试验表明精子穿卵活力极显著高于对照组(P＜0.01).研究表明在冷冻稀释液中添加BSA进行海门山羊精液冷冻具有良好的效果.     

几种糖类对水牛精子冻后效果的观察和比较

本研究比较了几种糖类对水牛精液冷冻保存的效果,以筛选出适于水牛精液冷冻保存的糖类保护剂。在水牛精液冷冻稀释液中分别添加半乳糖、果糖、葡萄糖和蔗糖,观察并比较它们对水牛精液冷冻保存的效果。试验结果表明:在原Tris-柠檬酸钠-鸡卵黄-甘油基础稀释液中,加入果糖能较显著提高水牛精子冻后的活力和顶体完整率(P0.05),加入半乳糖、蔗糖与葡萄糖没有显著差异(P0.05)。     

二甲基甲酰胺对猪精液冷冻保存效果的影响

用二甲基甲酰胺(DMF)完全替代甘油,比较不同平衡时间和不同DMF添加量对猪精液冷冻保护效果的影响。结果表明,DMF能完全替代甘油,获得较好的冷冻保护效果。最佳平衡时间为90 min,解冻后精子活力为(44.57±0.72)%,显著高于对照组和其他组(P0.05)。当DMF添加量为5%时,冻后精子活力、活率、线粒体活性、顶体完整率和质膜完整率分别为(49.91±0.39)%(、46.51±0.26)%、(47.51±0.52)%(、49.84±0.56)%、(46.30±1.61)%,均显著高于2%、3%、6%DMF添加组(P0.05),但与4%DMF添加组相比,冻后精子活力、活率和质膜完整率差异不显著(P0.05)。本试验结果表明,DMF最适添加量为5%。     

稀释和低温保存对鸡精液品质和受精能力的影响

本研究旨在探索稀释和低温保存处理对鸡精液品质和受精能力的影响,以优化鸡精液的短期保存条件。试验采集30只北京油鸡精液,混匀后等量分为4组:A组精液不处理作为对照,B组用BPSE稀释液按照1∶1比例稀释,C组精液离心后,去除上层精浆,加入与精浆等体积的BPSE稀释液重新混匀,D组在C组处理的基础上再用BPSE稀释液按照1∶1比例稀释。每组精液分为两份,一份用于直接输精和精液品质测定,另一份在4℃保存,期间每隔8h检测一次精液品质,24h后输精,每组收集种蛋120枚左右,统计受精率和孵化率等指标。结果表明:不同稀释处理后,C和D组精子活力极显著低于A组对照和B组(P0.01),B组和C组的受精率、入孵蛋的孵化率和受精蛋的孵化率与A组无显著差异,但是D组3项指标均极显著低于A组对照(P0.01)。随着4℃保存时间的延长,4组精子活力均极显著降低(P0.01),其中C和D组降低的幅度显著低于A组对照和B组。精子畸形率随着低温保存时间的延长而显著增加(P0.05),且畸形主要表现为头部肿胀,颈部弯曲和尾部断裂。与直接输精相比,低温保存24h后,A、B和C组的受精率和孵化率都显著降低(P0.05),但是D组低温保存前后的受精率和孵化率差异均不显著(P0.05),分别可以达到71%和82%。综上表明,新鲜精液可以进行1∶1稀释后输精,在不影响受精率的前提下可以提高公鸡配种能力。在需要短期保存精液后进行输精时,可以将采集的新鲜精液离心去除精浆并进行稀释,保存于4℃,从而降低精子活力的下降幅度,维持受精能力。     

不同冷冻保护液和解冻温度对猪精液冷冻效果的影响

在BF5稀释液中分别添加不同水平的牛血清白蛋白(BSA)(0.5,1,1.5 g/L)、二甲基乙酰胺(DMA)(0.5%,1%,1.5%)、甲基-β-环糊精载胆固醇(CLC)(1,2.5,5 g/L),对成年健康猪精液进行冷冻保存,于不同温度(37,50,70℃)解冻后分别检测冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性、项体完整率、线粒体活性.结果显示,0.5 g/L BSA组冷冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性均高于其他组,但差异不显著(P0.05).1% DMA组冷冻后精子活率和活力显著优于1.5%DMA组(P＜0.05),同时也高于对照组(3%甘油)冻后精子活率和活力,但差异不显著.不同质量浓度CLC组冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性和线粒体活性与对照组相比差异不显著.50℃和70℃解冻组精子的活率和线粒体活性显著高于37℃解冻组的精子;50℃解冻组精子的活力和质膜完整率显著高于其他2组.因此,在猪精液冷冻稀释液中,用DMA可以代替甘油作为渗透性保护剂,且以1%DMA,50℃解冻最佳.