气肿疽梭菌免疫学检测方法概述

气肿疽梭菌是一种具有组织毒性、有鞭毛的孢子化革兰氏阳性菌,可引气肿疽这种反刍动物高致死性急性疾病。常见的典型临床症状为发病动物肌肉丰满部位发炎、肿胀,触压可听到类似捻发音,流行呈现一定的季节性,并有区域性流行的特征。牛气肿疽在养殖场中一旦传播流行,往往会伴随巨大的经济损失,所以更加需要加强对该病的防控与诊断。本文整理了气肿疽梭菌的3种免疫学检测方法(间接ELISA、Dot-ELISA、免疫胶体金技术),以供参考。     

气肿疽梭菌检测方法概述

气肿疽(Clostridium chauvoei infection)病原体为气肿疽梭菌,是一种发生于反刍动物的急性、热性、败血性传染病。常见的典型症状为发病动物肌肉丰满部位发生炎性、气性肿胀,触压有捻发音,该病的流行有一定的地方性、季节性,多发生在潮湿的山谷、牧场,且在天气炎热的多雨季节。近几年常有暴发牛气肿疽的报道,给养殖业的发展带来了巨大的冲击和经济损失,同时也逐渐地威胁到畜牧生产和人类的安全。国内关于该病的研究多数为病例报道,对于该病的详细研究和综述却是少之又少,论文参考国内外相关文献,从方法、原理、优缺点等多个方面阐述气肿疽的检测方法,以期为该病的诊断提供参考。     

气肿疽梭菌延边样的分离鉴定

牛、羊等反刍动物的气肿疽病是由气肿疽梭菌感染引起的严重危害畜牧业发展的一种疾病,本研究从延边州延吉市采集疑似气肿疽梭菌感染的牛肝脏、脾脏、肌肉等组织进行气肿疽梭菌的分离鉴定。结果表明:经病原学检查、生化鉴定、动物试验及分子生物学鉴定,本试验成功对气肿疽梭菌进行了分离,该菌株细胞毒素、cct A基因与Gen Bank上已发表的气肿疽梭菌ATCC 10092菌株的同源性达到99.0%,此结果为该地区气肿疽病的免疫和微生态防治提供了重要的参考依据。     

气肿疽梭菌主要抗原及毒力因子的研究进展

气肿疽梭菌是一种严格厌氧的有芽孢的杆菌,可引起常见反刍家畜组织毒性缺氧,严重可致死,常为畜牧养殖业带来巨大的经济损失。气肿疽对反刍动物的影响存在已久,但其确切发病机制和相关毒力因子的作用仍未能被完全解读。随着研究的深入,已发现气肿疽梭菌的4种主要抗原和毒力因子在气肿疽发病过程中起着重要的作用。本文主要对气肿疽梭菌的4种主要抗原和毒力因子(细胞毒素A、鞭毛蛋白、神经氨酸酶和透明质酸酶)的相关研究进行总结概述,期望能为日后气肿疽检测方法和新型疫苗的研究提供参考。     

二重PCR方法鉴别气肿疽梭菌和腐败梭菌

用包含16S～23S rDNA间隔区和23S rDNA的部分序列作为气肿疽梭菌特异性标志,以α毒素部分序列作为腐败梭菌特异性标志,建立了鉴别气肿疽梭菌和腐败梭菌的二重PCR方法。结果显示：气肿疽梭菌C54-1株扩增出大小为509 bp的条带,腐败梭菌C55-1株、C55-16株均扩增出大小为148 bp的条带,均与预期吻合;而产气荚膜梭菌C57-1株、C59-37株,肉毒梭菌C62-4株,诺维梭菌C61-4株均未扩增出任何条带。扩增产物的测序结果进一步证实了本方法的特异性。菌株的生物学特性试验结果也符合相应气肿疽梭菌和腐败梭菌的特点。本研究所建立的二重PCR方法可用于气肿疽梭菌和腐败梭菌的快速鉴定。     

气肿疽灭活苗的制造

气肿疽是气肿疽梭菌引起的牛的急性热性、败血性传染病。病的特征是在肌肉丰满部位发生气性炎性水肿,按压患部常有捻发音,病早期有跛行,后期皮肤发黑故又称“爬腿瘊”、“黑腿病”、“鸣疽”。本病分布于世界各地,我国很早就有发生,延边地区建国前时有发生,但从５０...     

影响核酸疫苗免疫效果的因素及提高核酸疫苗免疫效果的方法

核酸疫苗(nucleic acid vaccines)是将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA)直接导入动物体细胞内,并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的.     

一例牛气肿疽梭菌病的诊治

牛气肿疽梭菌病是一种由气肿疽梭菌引起的牛急性败血性传染病。报道了在粤东地区某村散养牛只发生的一例牛气肿疽梭菌病的诊治,通过观察临床症状及解剖病变,进行组织器官病理学切片、细菌分离、病毒PCR检测和毒理学检测,确诊为牛气肿疽梭菌病。     

气肿疽梭菌C54-1株的制备与检定

为研究气肿疽梭菌C54-1株(CVCC60001)的菌种特性,制备了1批气肿疽梭菌C54-1株,并对菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性、16S rDNA等进行检定,以及对于该菌的适宜培养基促生长能力等方面进行了比较。实验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定。16S rDNA鉴定为气肿疽梭菌,相似度为99.93%。在免疫原性检定中,使用致死剂量攻毒时,免疫组能够4/4被保护,证明该菌明矾苗免疫效果良好。使用商品化梭菌培养基对于该菌培养进行了比对,证实商品化培养基替代厌气肉肝汤的可能性。本研究为气肿疽梭菌的制备和检定提供参考依据,并使用不同培养基进行比对研究,为该菌的稳定培养和疫苗工艺改进提供了研究基础。     

气肿疽梭菌CctA基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

研究旨在原核表达气肿疽梭菌细胞毒素A （CctA）基因,用纯化的重组蛋白建立其间接ELISA检测方法,a。利用大肠杆菌密码子的偏爱性优化CctA基因序列,克隆至原核表达载体pET-28a （+）,双酶切鉴定原核表达质粒pET28a-CctA并测序。将重组质粒转入大肠杆菌,经IPTG诱导得到高表达的重组CctA包涵体蛋白。包涵体蛋白变性后经镍（Ni）柱纯化,SDS-PAGE检测其纯化效果。以豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清为一抗,用Western blotting方法检测重组CctA蛋白的反应原性。用棋盘滴定法建立间接ELISA检测方法,以复性后的重组CctA蛋白作为检测抗原,摸索抗原包被浓度、封闭液的种类及浓度、抗体的最适稀释度和反应条件等。选用3批气肿疽灭活疫苗免疫豚鼠后采集血清,同时用攻毒和间接ELISA两种方法验证疫苗的免疫效力。质粒双酶切结果显示,得到大小约853 bp的条带,与预期相符,且测序结果正确。SDS-PAGE结果表明,成功表达并纯化大小为35 ku的重组CctA蛋白。Western blotting结果显示,豚鼠抗气肿疽梭菌抗血清与重组CctA蛋白具有良好的反应原性。建立的间接ELISA法的最适条件为：抗原的包被浓度为0.5 μg/mL,于4 ℃包被过夜;封闭液选择10%胎牛血清,37 ℃孵育2 h;二抗的稀释度为1：8 000;室温避光显色10 min后终止反应,测定D_{450 nm}值。当P/N>4.6时,间接ELISA法检测结果与豚鼠攻毒试验结果拟合度较好。本研究成功表达CctA基因并纯化了重组CctA蛋白,建立的以重组CctA蛋白为检测抗原的间接ELISA检测方法,有望成为气肿疽灭活疫苗免疫效果验证的替代方法。     

牛气肿疽暴发流行的诊疗

气肿疽是气肿疽梭菌引起反刍动物的一种急性发热性传染病，主要侵害黄牛，呈散发或地方流行性，以败血症及深层肌肉发生气肿性坏疽为特征。1952年-1954年，湖南省部分地区曾发生本病，1955年起每年进行预防接种，至1974年疫情已被完全控制，2002年7月，湖南省湘南某村暴发本病，病死率达45．6％。     

牦牛气肿疽的诊断与防制

牦牛气肿疽的诊断与防制曾群辉吉传义查果朱国玉（西藏农牧学院畜牧兽医系,林芝８６００００）旺庆单增多吉（西藏林芝地区畜牧兽医总站,８６００００）西藏米林县内发生牦牛自然病死现象。为了摸清牦牛自然死亡的病因,作者从自然死亡牦牛的肝、脾中经病原分离鉴定等试...     

鹿气肿疽的诊断与治疗

鹿气肿疽又称黑腿病或鸣疽，是由气肿疽梭菌引起的一种急性热性传染病。以在肌肉丰满部位发生气性炎性肿胀，伴有捻发音和跛行为特征。     

羊气肿疽流行病预防及治疗

羊气肿疽是由气肿疽梭菌感染引起的一种非接触急性热性败血症传染性疾病,临床上以组织坏死、腹部维度不断膨大、水肿为主要特征,又被称为鸣疽、气肿性炭疽。该文主要结合一起实际案例,分析羊气肿疽的流行和防治,以进一步提高该种疾病的防控效果。     

一起绵羊气肿疽病病例

2012年9月,某牧场草场一群中国美利奴(新疆型)羊暴发绵羊气肿疽病疫情,6d内陆续死亡19只,症状相同,发病急、死亡快,发病率为9%,致死率100%。主要介绍了该起绵羊气肿疽病的病情、临诊症状、剖检病变,分析了发病原因,提出了综合防控措施,以期为该病的防控提供参考。     

牛气肿疽的诊疗体会

气肿疽(俗称黑腿病或鸣疽),本地群众叫“飞毛”,是反刍动物的一种急性、败血性传染病,病程短,死亡率高。笔者在近16年的基层兽医实践中,通过对100余例气肿疽的治疗,基本掌握了此病的临床表现,形成了一套实用简便并能快速初诊的方法。现介绍于下,仅供同行参考。     

核酸疫苗研究进展

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因（ＤＮＡ）与质粒重组后,直接导入动物细胞内,并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的。因此,核酸疫苗又称基因疫苗。由于其不需要任何化学载体,故又称裸ＤＮ...     

猪细小病毒VP2基因核酸疫苗的构建及免疫原性

将PPV VP2基因酶切后克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)中,构建pcDNA-VP2,经脂质体法转染IBRS-2细胞后,Western blotting检测pcDNA-VP2能正常表达.采用 pcDNA-VP2肌注Balb/c小鼠,作间接ELISA抗体检测试验,并采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)法对小鼠的细胞免疫进行检测.结果表明,pcDNA-VP2能诱导小鼠产生细胞免疫和体液免疫应答.PCR扩增检测结果显示,未能从免疫小鼠各组织的基因组中扩增出VP2基因片段.