影响胞质内单精注射受精率的相关因素

作者简要综述了胞质内单精注射技术的影响因素，包括精子状态、卵子状态、受精激活及操作技术等方面的研究，为进一步提高胞质内单精注射的技术水平奠定基础。     

家兔显微受精影响因素及显微受精胚胎超微结构

以家兔为实验动物，利用胞质内精子注射技术和透明带下精子注射技术，对卵龄、精子获能、注射针管口径、操作室温和操作方法等影响显微受精的因素以及显微受精胚胎的超微结构进行了研究。结果显示：（１）胞质内单精子注射，ｈＣＧ后１５－１７ｈ卵的存活率为６９．４％，显著（Ｐ〈０．０５）高于ｈＣＧ后１９－２１ｈ卵的存活率（４７．３％）；而受精率和卵裂率（分别为５２．９％和４１．２％）分别低于ｈＣＧ后１９－２１ｈ卵的     

影响精子胞质内显微受精的关键因素

精子胞质内显微受精(ICSI)在人方面已很成熟，但在啮齿类试验动物方面还有待进一步研究，作者就ICSI操作过程中的关键因素作一简要综述。     

猪体外受精中多精子受精

多精子受精指多于一个的精子进入卵母细胞的胞质中，导致多倍体合子的形成、早期胚胎发育夭折或发育异常。哺乳动物在正常的体内受精中多精受精只占1％～2％，当猪卵母细胞在体外成熟和受精时，多精子受精率明显比体内成熟猪卵母细胞的高。多精子受精而发育的猪早期胚胎可发育至囊胚阶段甚至可以更进一步发育，但和两原核正常胚胎相比它们的囊胚内细胞团细胞数明显减少。     

单精注射法生产转基因小鼠的研究

精子胞质内显微受精技术（ICSI）作为辅助受精的一种手段,将体外受精研究和胚胎的显微操作技术结合起来,比以往对精子质量的要求大大降低,使其无论在畜牧业生产实践还是在哺乳动物的生殖生理基础研究中都有着十分重要的意义。本研究用小鼠精子及小鼠精子与GFP基因孵育后对小鼠卵母细胞进行ICSI,获得子代鼠。提取鼠尾基因组DNA,应用PCR、Southern blot进行整合检测。在发育至成年的11只小鼠中经PCR和Southernblot检测到3只阳性（27.3%）。结果表明,利用ICSI技术可以高效地生产转基因小鼠。     

精子预处理和第一极体位置对绵羊胞质内显微受精的影响

实验分别采用DTT处理与不处理精子的比较;活精子和死精子进行精子胞浆内注射(ICSI);第一极体位于6点和12点的不同位置,研究3个因素对绵羊精子胞质内显微受精的影响.结果表明:DTT处理与不处理在卵裂率上差异不显著(P＞0.05),囊胚发育率差异显著(P＜0.05).在第一极体位置,死、活精子对ICSI的卵裂率及囊胚率无明显影响(P＞0.05).     

小鼠单精注射研究进展

自从Piezo操作系统应用于显微操作代替了传统的机械注入方法以来,小鼠胞质内单精注射的成功率就大大提高了。单精注射(ICSI)的基本原理并不复杂,但是许多研究表明小鼠精子的质膜、顶体、制动时间均会对ICSI的结果造成影响。文章概述了小鼠单精注射的基本原理及小鼠精子质膜的完整性,顶体反应,制动时间与ICSI成功率之间的关系,以期在此基础上提出今后的研究方向,对于分析受精过程的发生,改进单精注射技术及进一步提高受精率,都具有重要的理论意义及实践价值。     

ICSI受精卵胞质注射生产转基因猪胚胎的初步研究

试验旨在探讨单精子胞浆内注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)法生产猪体外受精卵和应用猪ICSI受精卵进行胞质注射生产转基因胚胎的可行性。首先对比了猪体外受精(in vitro fertilization,IVF)受精卵与ICSI受精卵的胚胎发育效率;然后观察了猪ICSI受精卵的双原核形成时间及效率,对精子注射到胞质后6~18h分6个时间段进行地衣红染色,对比精子进入卵胞质后的状态及原核形成;最后对猪IVF受精卵受精后8~10h及ICSI受精卵受精后12~14h进行EGFP-N1质粒(20ng/μL)胞质注射,观察胚胎发育效率及转基因效率。结果表明,ICSI受精卵的胚胎发育率(卵裂率89.4%和67.9%、囊胚率36.5%和16.1%)显著优于IVF组(P0.05),适合用于猪的体外受精卵试验;猪ICSI受精卵双原核在精子注射到卵胞质后12~14h形成,双原核形成率为54.90%,显著高于其余5个试验组(P0.05);ICSI受精卵胞质注射组胚胎卵裂率(86.2%和66.3%)、囊胚率(30.0%和13.6%)及转基因效率(18.5%和0)均显著高于IVF受精卵胞质注射试验组(P0.05)。本试验结果为采用ICSI受精卵进行胞质注射生产转基因猪的研究奠定了基础。     

ICSI受精卵胞质注射生产转基因猪胚胎的初步研究

试验旨在探讨单精子胞浆内注射（intracytoplasmic sperm injection,ICSI）法生产猪体外受精卵和应用猪ICSI受精卵进行胞质注射生产转基因胚胎的可行性。首先对比了猪体外受精（in vitro fertilization,IVF）受精卵与ICSI受精卵的胚胎发育效率;然后观察了猪ICSI受精卵的双原核形成时间及效率,对精子注射到胞质后6~18 h分6个时间段进行地衣红染色,对比精子进入卵胞质后的状态及原核形成;最后对猪IVF受精卵受精后8~10 h及ICSI受精卵受精后12~14 h进行EGFP-N1质粒（20 ng/μL）胞质注射,观察胚胎发育效率及转基因效率。结果表明,ICSI受精卵的胚胎发育率（卵裂率89.4%和67.9%、囊胚率36.5%和16.1%）显著优于IVF组（P<0.05）,适合用于猪的体外受精卵试验;猪ICSI受精卵双原核在精子注射到卵胞质后12~14 h形成,双原核形成率为54.90%,显著高于其余5个试验组（P<0.05）;ICSI受精卵胞质注射组胚胎卵裂率（86.2%和66.3%）、囊胚率（30.0%和13.6%）及转基因效率（18.5%和0）均显著高于IVF受精卵胞质注射试验组（P<0.05）。本试验结果为采用ICSI受精卵进行胞质注射生产转基因猪的研究奠定了基础。     

影响胞质内显微受精的因素

胞质内显微受精(ICSI)技术是20世纪80年代兴起的一项辅助受精技术,对育种和治疗男性不育有着重要的意义,文章对影响ICSI的因素和目前存在的问题及争议进行了系统的阐述。     

牛精子头部显微注射受精试验

牛体外受精研究发展迅速。利用体外受精技术,可使体外培养成熟的牛卵泡卵子受精,并培养发育成囊胚,将新鲜的或经过冷冻、解冻后移植给受体牛,最终获得犊牛。利用附睾尾部精子进行体外受精时,受精率在种公牛之间没有差异,而利用射出精子时个体间则差异很大。显微受精可以得到稳定而高的受精率,并缩小精子方面所引起的受精率差异。目前,显微受精有以下三种方法:透明带开孔法、卵黄周隙精子注入法、卵细胞质精子注入法。本文所报道的显微受精试验是用卵细胞质精子注入法。卵细胞质精子注入法是利用显微操作仪在显微镜下将一个精子或精     

第三讲母猪生殖生理

第三节受精、妊娠与分娩一、受精(一)配子的运行1.射精部位在交配过程中,公猪将精液直接射到母猪子宫或子宫颈中。母猪的子宫颈没有阴道部,使得精液能顺利射入子宫内。2.精子获能精子在受精前必须在雌性生殖道内经历一段时间,并发生一系列生理性、机能性变化,才具有与卵母细胞受精的能力,这种现象称精子获能。公猪精子获能需要3～6小时。3.受精部位在输卵管上1/3的壶腹部受精。4.顶体反应精子获能之后,在穿越透明带前后,精子顶体开始膨大,精子质膜和顶体外膜开始融合,使精子顶体形成许多泡状结构,通过空泡间隙释放出透明质酸酶、放射冠穿透…     

用精子异种穿卵方法检测牛冷冻精液精子的质量

牛冷冻精液要在液氮-79℃-196℃下保存,从理论上讲,冷冻可以使精子胞质不形成冰晶而处于玻璃化状态,停止了代谢活动,但是长期在-196℃下保存及在制作过程中,再加上输精前的解冻操作等,都能损伤精子的头部质膜和顶体外膜.经电镜研究解冻后发现精子头部,一部分解冻精子质膜膨胀破裂,甚至顶体外膜也发生部分泡状化,而将顶体内的酶类释放出去形成伪顶体反应.这种精子在显微镜下检查时非常活跃,但根本不可能与体内的成熟卵进行融合受精.     

哺乳动物输卵管对精子的影响

哺乳动物输卵管峡部上皮细胞以其顶部质膜唾液酸化的多糖-蛋白复合物暂时黏附精子头部,在此处形成精子库,不仅确保了适当条件下有适当数量的精子到达受精部位,而且还有益于精子在体内外的活力,调节精子获能速率;过氧化氢是雌性哺乳动物生殖道内杀死精子的元凶,而输卵管液中的过氧化氢酶则促进精子在雌性哺乳动物生殖道内的存活。研究输卵管对精子的影响对彻底搞清受精过程的调节、改进精子体外获能技术及治疗某些不育症具有重要的理论及实践意义。     

精子不同处理和胰岛素不同浓度对猪卵母细胞胞质内单精子显微受精的影响

探讨了分别使用新鲜、冷冻和超声波断尾精子以及在胚胎培养液中分别添加不同浓度胰岛素对猪卵母细胞胞质内单精子显微受精(ICSI)胚胎早期发育的影响.结果:(1)使用冷冻解冻精子与新鲜精子相比对猪卵母细胞ICSI后的卵裂率和囊胚率均无显著影响(P＞0.05);2)精子断尾与否对猪卵母细胞ICSI后的分裂率和囊胚率没有显著影响(P＞0.05);3)在胚胎培养液中添加5 mg/L胰岛素与对照组相比可显著提高猪ICSI胚胎的囊胚发育率(18.22% vs 3.60%,P＜0.05).     

影响卵母细胞胞浆内单精子注射效率的精子相关因素

卵母细胞胞浆内单精子注射(ICSI)技术作为辅助受精的一种手段,自从出现以来,就显示出广泛的应用前景.ICSI将体外受精和胚胎的显微操作技术相结合,大大降低对精子质量的要求,在畜牧业生产实践和哺乳动物生殖生理的基础研究中都有着十分重要的意义.然而,ICSI过程中的每一个环节都可能影响到其效果,最主要和最根本的影响因素是精子和卵子本身的状态.论文就精子有关方面的因素,简要综述了精子顶体与核周鞘、细胞骨架与中心粒、DTT处理和卵母细胞激活因子(SOAF)等对ICSI的影响.     

性控精液应用研究进展

本文概述了近年来用流式细胞仪分离动物X、Y精子的研究进展、存在的问题和应用前景.流式细胞仪分离精子的研究已经取得了很大进展,在某些动物(如牛)分离的精子已开始用于人工授精.尽管该技术还存在许多亟待解决的问题,但随着流式细胞仪的改进和与各项辅助生殖技术(如手术授精、体外受精、胞质内精子注射、低剂量精子人工授精)的结合,性别分离精子必将在实践中得到更广泛的应用,产生巨大的社会和经济效益.     

牛羊猪精子运行速度的研究

哺乳动物的受精过程是在输卵管壶峡连接部进行的。为了分析受精过程的各个阶段及其异常现象,必须弄清精子从阴道或子宫的授精部位运行到输卵管受精部位所需的时间。另外配种方法(人工授精或人工控制交配)也很重要,因为配种不适时受胎率就不高。关于精子在雌性生殖道内运行的速度的报道基本上有两种观点。一种观点认为精子在配种后几分钟就到达受精部位(主要是北美学者的观察结果,Van Demark 等,1954);另一种观点则认为需要几个小时(主要是欧洲学者的观察结果,Thibault,1973)。近年来用兔子所作的一系列试验得出了精     

胞质内精子注射及其影响因素的研究

作者综述了胞质内精子注射(ICSI)技术的原理及其在人及其他动物上的研究应用，阐述卵子、精子操作技术等对ICSI结局的影响，指出目前存在的问题和应用前景。     

不同因素对奶牛分离精子ICSI效率的影响

本研究旨在探讨不同的联合激活处理、精子预处理方法和单精子注射方式对奶牛分离精子ICSI效率的影响。借助显微操作仪将经不同预处理的奶牛分离X精子直接注入体外成熟22～24h的牛卵母细胞胞质内,注射过程采用回吸胞质和不回吸胞质2种处理,最后分别用3种激活方案对注射卵进行激活。结果表明:用CR1aa+Ionomycin+6-DMAP对ICSI注射卵进行激活后,卵裂率和囊胚率都高于A23187+CHX和7%ET+CHX两种联合激活组(63.74%vs61.09%、53.75%;28.54%vs17.68%、22.00%,P0.05);采用percoll密度梯度离心法处理精子,卵裂率(77.10%vs62.19%,P0.05)与囊胚率(26.95%vs22.82%,P0.05)均高于上游法处理组;ICSI时回吸胞质获得的注射卵,其卵裂率和囊胚率均显著高于不回吸胞质处理组(63.10%,25.35%vs41.56%,19.40%,P0.05)。结果表明,用percoll密度梯度离心法处理精子、注射时回吸胞质、用CR1aa+Iono-mycin+6-DMAP激活ICSI注射卵,可显著提高奶牛分离精子ICSI的效率。