猪附红细胞体染色方法的研究

应用姬姆萨氏、瑞氏以及吖啶橙染色液对13例疑似附红细胞体病猪的血涂片进行染色检测,比较其优缺点。结果表明,3种方法均可检测出附红细胞体,但吖啶橙染色法的检出率更高,是一种更有效的染色方法。     

犬附红细胞体病PCR检测方法的建立及与应用

根据Genbank中已经发表的犬附红细胞体16sRNA基因序列设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出一条与目的片段大小一致,约630 bp的基因片段,建立了PCR快速检测方法.以PCR检测方法及瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法为基础对20例犬附红细胞体病例进行检测,比较四种方法的检出率.结果表明,建立的PCR检测方法的检出率略高于吖啶橙染色,明显高于瑞氏、姬姆萨染色,可用于犬附红细胞体的快速诊断和流行病学调查.     

犬附红细胞体病PCR检测方法的建立及与应用

根据Genbank中已经发表的犬附红细胞体16sRNA基因序列设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出一条与目的片段大小一致,约630 bp的基因片段,建立了PCR快速检测方法。以PCR检测方法及瑞氏、姬姆萨、吖啶橙染色法为基础对20例犬附红细胞体病例进行检测,比较四种方法的检出率。结果表明,建立的PCR检测方法的检出率略高于吖啶橙染色,明显高于瑞氏、姬姆萨染色,可用于犬附红细胞体的快速诊断和流行病学调查。     

猪附红细胞体PCR与光镜检测方法的比较研究

应用鲜血压片、姬姆萨染色、吖啶橙染色三种光镜检测方法以及PCR法检测猪附红细胞体,对临床20例疑似病例进行检测,比较其检出率,结果表明,鲜血压片、姬姆萨染色、吖啶橙染色以及PCR法临床检测率分别为20%、35%、50%、70%。证实PCR检测方法明显优于其它光镜检测方法。     

牛环形泰勒虫病3种检测方法对比分析

本研究利用血液涂片染色、间接酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链式反应(PCR)3种方法,对潍坊市104头奶牛血液样品进行了牛环形泰勒虫病的检测。结果显示血液涂片染色阳性率为15.4%,血清阳性率为51.9%,PCR检测阳性率20.2%。结果表明,这三种方法都可用于检测牛环形泰勒虫病。血液涂片染色法查找红细胞中的虫体,PCR检测的是虫体,反映奶牛当前感染情况;ELISA检测的是抗体水平,反映了近阶段感染情况。     

12种方法对鸡沙氏住白细胞虫血液涂片的染色效果

目的为了筛选出比较理想的鸡沙氏住白细胞虫血液涂片染色方法。方法分另1采用12种染色方法对鸡沙氏住白细胞虫血液涂片进行染色,根据染色时间长短、层次对比、结构完整性、结构清晰度、分辨难易来判定染色方法的优缺点。结果瑞-姬混合染色法、梅-姬染色法、伊红-亚甲基兰染色法效果最好;其次为革兰氏染色法、美蓝染色法、瑞特氏染色法、姬姆萨染色法、梅古氏染色法、立克次氏体染色法等染色方法;抗酸染色法、复红染色法、阿伯特染色法染色效果较差。美蓝染色法由于其染色时间短、操作简单、层次对比明显、结构完整性好,虽然高倍镜下清晰度不高,但低倍镜下检出率高。瑞-姬混合染色法、梅-姬染色法、伊红-亚甲基兰染色法为复染色法,虽然染色时间长,但层次对比明显、结构最完整、最清晰。结论瑞-姬混合染色法、梅-姬染色法、伊红-亚甲基兰染色法在鸡沙氏住白细胞虫血液涂片的染色效果最好;美蓝染色法适应于大规模流行病学调查,伊红-亚甲基兰染色法可以代替瑞特氏染色法、姬姆萨染色法、瑞-姬混合染色法在基层推广。     

复方中药对猪嗜血支原体感染预防作用的研究

为研究复方中药对猪嗜血支原体(M.suis)感染的预防效果,将复方中药Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和强力霉素分别与M.suis阳性血液在细胞培养液中进行培养,间隔12h用qPCR检测培养物中M.suis拷贝数。选取临床健康的35日龄仔猪进行M.suis PCR检测,将50头M.suis PCR阳性仔猪随机分为5组,每组10头,每组隔离饲养。三个复方中药组采用拌料方式连续喂服7d,强力霉素组拌料喂服5d,对照组饲料中不添加任何药物。分别于用药前、用药后第10、20、30天前腔静脉采血,对血液M.suis拷贝数、红细胞SOD活力、红细胞膜ATP酶(Na+K+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase)活力、淋巴细胞(T、B)增殖率、血清IgG含量进行检测。结果显示,三种复方中药在体外培养时均可极显著降低培养物中M.suis拷贝数(P0.01);在仔猪预防试验中,与对照组和强力霉素组相比,复方中药Ⅰ可以极显著降低血液中M.suis拷贝数(P0.01),提高红细胞SOD活力与B淋巴细胞增殖率(P0.05或P0.01);复方中药Ⅱ可以提高红细胞SOD活力、Na+K+-ATPase活力与淋巴细胞增殖率(P0.05),但无法长时间抑制M.suis生长;复方中药Ⅲ可以极显著降低血液中M.suis拷贝数(P0.01),显著提高红细胞SOD活力(P0.05)。结果说明:复方中药Ⅰ对M.suis自然感染有良好的预防作用。     

单克隆抗体间接免疫荧光(IFA)检测猪附红细胞体

为建立利用单克隆抗体检测猪附红细胞体病的间接免疫荧光(IFA)方法,用抗猪附红细胞体的单克隆抗体,对48份疑似猪附红细胞体感染的病猪猪血进行免疫荧光检测,并与血涂片镜检及PCR检测方法进行比较,结果显示IFA检测的阳性率为68.75%,与PCR检测阳性率为77.08%符合率较高,比血涂片的瑞氏和姬姆萨染色镜检阳性率高出近30个百分点;而用猪肺炎支原体、猪链球菌和猪巴氏杆菌作对照,结果均呈阴性。建立的用抗猪附红细胞体的单克隆抗体检测猪附红细胞体病的IFA特异性强,敏感性高;检测临床样品的结果准确可靠。     

单味中药对猪嗜血支原体黏附红细胞的影响

研究单味中药对猪嗜血支原体(M.suis)黏附红细胞作用的影响,筛选具有抑制M.suis黏附红细胞作用的中药。应用悬滴镜检法、血液直接PCR法筛选M.suis阳性血液和M.suis阴性血液;利用qPCR技术研究单味中药与M.suis阳性红细胞、M.suis、红细胞作用后,红细胞黏附M.suis的拷贝数变化。结果显示,青蒿、黄芩、槟榔、甘草、秦皮、苦参、丹参作用于M.suis阳性红细胞,可极显著降低红细胞黏附M.suis的拷贝数(P0.01);青蒿、黄芩、槟榔、甘草、秦皮、苦参、丹参作用于M.suis可极显著减少红细胞黏附M.suis拷贝数(P0.01);青蒿、黄芩、槟榔、甘草作用于红细胞,可极显著抑制红细胞黏附M.suis拷贝数(P0.01)。结果表明,青蒿、黄芩、槟榔、甘草、秦皮、苦参、丹参可抑制M.suis对红细胞的黏附,可用于预防和治疗M.suis感染和猪附红细胞体病中药的研发。     

一例犬吉氏巴贝斯虫病的PCR诊断

1例拉布拉多病犬,食欲废绝,喜卧好喘,小便呈酱油色,血涂片、姬姆萨染色、镜检发现,红细胞内有淡蓝色的环形虫体。采集病犬血液样品,提取基因组DNA,通过PCR方法及对PCR产物进行限制性片段长度多态性分析进而确诊该病犬为犬吉氏巴贝斯虫感染。