益肾清列口服液微生物限度检查方法的建立

目的:建立益肾清列口服液微生物限度检查法并进行方法适用性研究。方法:按照《中华人民共和国药典》2015年版·四部非无菌产品微生物限度制剂1105、1106、1107通则中相关规定,对该制剂进行微生物限度检查方法的适用性研究。需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌计数采用增加培养基体积法(1∶50),控制菌大肠埃希菌采用薄膜过滤法,200 mL稀释液冲洗2次,可检出阳性指示菌,采用上述方法对益肾清列口服液各试验菌进行回收试验测试及对控制菌检查方法进行方法适用性研究。结果:需氧菌总数、霉菌和酵母菌适用性研究试验中各菌的回收比值均符合《中华人民共和国药典》2015年版规定,控制菌检查方法可行。结论:该方法适用于益肾清列口服液的微生物限度检查,标准可行。     

双葛止泻口服液抑菌剂用量筛选与抑菌效力研究

通过抑菌效力研究确定了双葛止泻口服液中抑菌剂的合理添加量。根据《中国兽药典》2015年版一部附录“1121抑菌效力检查法”要求,以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉为试验菌株,建立双葛止泻口服液抑菌效力检查方法,对不同苯甲酸钠含量的双葛止泻口服液进行抑菌效力测定,筛选出供试品中抑菌剂合理添加量。结果表明,0.3%的苯甲酸钠对微生物生长繁殖具有良好的抑制作用,且为最低有效剂量。因此,0.3%的苯甲酸钠可作为双葛止泻口服液的抑菌剂用量。     

中药常山口服液微生物限度检查方法的验证

本研究旨在验证抗球虫中药常山口服液的微生物限度检查法,为其质量控制、研发新兽药奠定基础。试验通过直接接种法考察常山口服液的抑菌活性,并采用验证过的试验条件和方法(常规法)进行细菌计数、回收率测定及控制菌的检查,建立常山口服液微生物限度检查方法,并进行验证试验。结果证实常山口服液无抑菌作用或抑菌作用极其微弱,可采用常规法建立检查方法。常山口服液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉的加菌回收率均大于70%,且供试品和所用稀释剂对此结果无干扰。按常规方法对大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌进行控制菌验证检查发现,试验组、阳性对照组均检出相应的试验菌,阴性对照组和供试液组均未检出相应的试验菌。综上所述,常规法可用于常山口服液细菌、霉菌和酵母菌的计数检验,控制菌检查及微生物限度检查,试验过程符合微生物限度检查法规定,且方法简便,可操作性强,结果准确可靠。     

河南信阳规模化猪场仔猪腹泻的诊断和疗效观察

2019年2—3月,河南信阳某猪场仔猪群出现腹泻症状,130头猪只死亡。对病死猪剖检并采集肛门拭子、肠内容物、新鲜粪便等样品进行细菌分离和鉴定,同时采用荧光PCR方法进行腹泻相关病毒的检测。并随机分为5个不同试验组对病猪开展治疗试验。结果表明,猪群发生腹泻的主要原因是轮状病毒感染;在治疗效果方面,双葛止泻口服液各剂量组和白头翁口服液治疗组猪群的精神面貌特征和粪便特征上均有所改善,其中双葛止泻口服液中高剂量组猪群的临床腹泻症状均显著改善,与对照组相比,差异均显著。双葛止泻口服液按每千克体重0.34 mL剂量灌服,连用5 d,可有效治疗仔猪的腹泻。     

氯氮平片微生物限度检查方法验证

利用常规法和培养基稀释法对氯氮平片微生物限度检查方法进行验证。结果表明,采用培养基稀释法时各试验菌回收率均大于70%;控制菌检测时,试验组检出控制菌大肠埃希菌,阴性菌对照组未检出阴性对照菌金黄色葡萄球菌。该试验表明氯氮平片具有微弱的抑菌作用,可采用培养基稀释法进行微生物限度检查。     

薄膜过滤法在中药常山散微生物限度检查中的应用研究

为了探讨和建立抗球虫中药常山散的微生物限度检查方法,以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉为挑战菌株,采用中国兽药典(2010版)收载的薄膜过滤法考察验证常山散的抑菌活性,并采用验证过的试验条件和方法进行细菌计数、回收率测定及控制菌的检查,对常山散微生物限度检查方法学进行建立和验证试验。结果验证试验证实,采用薄膜过滤法可消除供试品常山散的抑菌活性,可用于建立检查方法;常山散对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉的加菌回收率均大于70%。控制菌按薄膜过滤法验证检查,试验组、阳性对照组均检出相应的试验菌,阴性对照组和空白对照组均未检出相应的试验菌。表明采用薄膜过滤法处理中药常山散,试验过程复合中国兽药典微生物限度检查法相关规定,可用于常山散细菌、真菌和酵母的计数检验,控制菌检查及微生物限度检查,且操作简单、快速、数据准确可靠。     

辛伐他汀片微生物限度检查方法学验证

利用常规法和培养基稀释法对辛伐他汀片微生物限度检查方法进行验证。结果表明,采用培养基稀释法时各试验菌回收率均大于70%;控制菌检测时,采用培养基稀释法,试验组检出控制菌大肠埃希菌,阴性菌对照组未检出阴性对照菌金黄色葡萄球菌。该验证试验表明辛伐他汀片具有微弱的抑菌作用,可采用培养基稀释法进行微生物限度检查。     

泰地罗新原料药微生物限度检查验证

根据《中华人民共和国兽药典》2015年版一部附录1105非无菌产品微生物限度检查的要求,采用薄膜过滤法(每筒冲洗量300mL)进行需氧菌、霉菌和酵母菌总数检测,对泰地罗新原料药各试验菌进行回收试验测试及其检查方法验证。结果表明,胰酪大豆胨液体培养基适用于需氧菌检测,沙氏葡萄糖琼脂培养基适用于霉菌、酵母菌检测;验证试验中需氧菌、霉菌和酵母菌的回收比值均符合《中华人民共和国兽药典》2015年版规定。结论:可以采用薄膜过滤法对泰地罗新原料药进行微生物限度检查。     

脂必妥片微生物限度检查方法研究

目的:建立脂必妥片微生物限度检查方法。方法:按照《中华人民共和国药典2部》2010年版微生物限度检查方法。结果:脂必妥片对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用,对其他试验菌均无抑制作用。结论:本品对细菌的计数方法应采用培养基稀释法,霉菌及酵母菌计数方法、控制菌检查可用常规检验法。     

马波沙星注射液无菌检查方法的建立

对马波沙星注射液的无菌检查方法进行适用性研究。按《中国兽药典》2015年版一部附录1101进行试验,采用薄膜过滤法对马波沙星注射液进行无菌检查。结果:马波沙星注射液经用0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗滤膜,每膜每次100 mL,冲洗6次后,试验组菌生长良好,与阳性对照组一致。结果表明,薄膜过滤法可用于马波沙星注射液的无菌检查。     

Validation of Microbial Limit Test Method for Traditional Chinese Medicine Dichroa febrifuga Oral Liquid (DFOL)

The purpose of this study was to validate the microbial limit test method for anticoccidial drug Dichroa febrifuga oral liquid (DFOL),and provide data base for its quality control and researching the new veterinary drug. The direct inoculation method was used to validate the antibacterial activity for DFOL, and the bacterial counting,determination of recovery rate and inspection of control bacteria were measured using a validated test condition and method (conventional method).The results showed that DFOL had no or faint bacteriostasis verified by validated test method, the determination and inspection of bacteria could be determined by conventional method. The normal plate counting were used to detect the amount of Escherichia coli,Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Candida albicans and Aspergillus niger in DFOL in which the recovery rate were all more than 70%,and the results were not disturbed by sample and diluents. The control bacteria including Escherichia coli,Salmonella paratyphi B,Staphylococcus aureus,and Pseudomonas aeruginosa were tested according to conventional method,whose growth were detected in the test group and positive control group, while no growth were detected in the negative control group and sample group. In conclusion,the microbial limit test method for DFOL had been validated in this study,and the conventional method could be applied to DFOL for bacteria,moulds and yeast counting as well as the inspection for control bacteria. The process of test was in accordance with the regulations of microbial limits test method,the method was convenient and simple,and the results was reliable.     

苦参苍术口服液的抗炎与止泻作用研究

为研究苦参苍术口服液的抗炎、止泻作用,观察了不同剂量苦参苍术口服液对二甲苯致小鼠耳肿胀及蓖麻油致小鼠腹泻的影响。结果显示,苦参苍术口服液能抑制二甲苯导致的小鼠耳肿胀,减轻蓖麻油造成的小鼠腹泻,并呈剂量依赖关系（P〈0．05）,提示其具有明显的抗炎和止泻作用。该试验可为参苍术口服液的进一步研究与临床应用提供参考。     

微生物试管法测定叶酸含量的方法研究

叶酸是鼠李糖乳杆菌生长的必需营养素,微生物法检测叶酸是利用鼠李糖乳杆菌生长速度与叶酸的含量相关性建立的。鉴于微生物法试验周期长,菌种传代保藏比较繁琐,该法是基于《GB 5009.211—2014食品安全国家标准 食品中叶酸的测定》方法,改进了乳酸杆菌接种液的制备方法和叶酸培养液的培养时间。本文通过分析方法的标准曲线的线性、精密度、准确度和方法稳定性来验证优化方法的适用性。该方法标准曲线线性关系良好（R²>0.99）,回收率>90%,精密度和准确度好,操作简便,缩短了试验周期,提高了检测效率,为改进叶酸检测方法提供了依据。     

仔泻康口服液的急性毒性和亚慢性毒性试验研究

试验旨在通过小鼠急性毒性试验和大鼠亚慢性毒性试验对仔泻康口服液进行安全性评价,为临床安全用药提供理论依据。在急性毒性试验中,采用最大给药剂量对36只昆明小鼠进行灌胃给药。在亚慢性毒性试验中,将80只大鼠,随机均分成高、中、低剂量组和对照组,高、中、低剂量组分别按24、12和6 g/kg体重灌胃给药,对照组给予等体积生理盐水,连续给药30 d,停药后称量大鼠体重、检测血常规指标、血液生化指标、计算脏器指数并观察组织病理变化等。结果显示,在急性毒性试验中,各剂量组均无小鼠死亡,无法计算LD₅₀,最大耐受量试验也无死亡情况;在亚慢性毒性试验中,该口服液对大鼠生长发育没有影响;经剖检,仅高剂量组可见中央静脉远端的肝细胞有不同程度的肿大,但未见坏死和炎性反应,其他各剂量组的实质器官均未发现异常变化;各剂量组血液学指标、血液生化指标和脏器指数均在正常范围内,与对照组相比均无显著差异（P>0.05）。结果表明,根据外源化学物急性毒性分级（WHO）标准,该制剂属于无毒物质,安全性较高,在合理剂量下,临床使用仔泻康口服液是安全的。     

Study on Efficacy of Baihu Dingchuan Oral Liquid

In order to verify the effect of Baihu Dingchuan oral liquid of new veterinary drugs,the effects of infectious bronchitis virus (IBV) on the proliferation inhibition test, tracheal cilia movement test and SPF chickens infected with IBV were tested.The test solution was mixed with an equal amount of IBV solution,inoculation of 11-day-old SPF chicken embryo,incubation at 37℃ for 168 h.RT-PCR was performed to detect IBV in kidney of live chick embryo.The results showed that the survival rate of 168 h chicken embryo was 80% in the drug group,but the positive control group was 20%, and there was significant difference between two groups (P<0.05). In the test drug group, no band was detected by RT-PCR, but the target band appeared in the positive control group.After 40 days old SPF chickens were administered continuously for 3 days, 0.02 mL of ink was injected into the trachea. The distance of ink movement in 1 min was measured. The results showed that the migration distance of ink was extremely significantly higher than that of saline control group (P<0.01).In the 17-day-old SPF chickens, IBV-M41 was infused into the nasal mucosa with 0.3 mL. After 24 h, 1 mL/kg was administered for 5 days. The results showed that there were significant differences in clinical symptom score and cure rate between the test drug group and the control group (P<0.05). There was no significant pathological changes in the tracheal mucosa of the experimental group, but the pathological changes in the positive control group were significant. The above results showed that Baihu Dingchuan oral liquid had good inhibitory effect on IBV in vitro, which could promote the movement of tracheal cilia, and had good clinical control effect on infectious bronchitis.     

黄连组方对大肠杆菌O78的抑菌作用与临床疗效研究

为研究防治鸡大肠杆菌病的新方法,减少抗生素的使用及耐药菌株的产生,试验选取黄连、乌梅、白术等中药制成黄连组方口服液,检测其对大肠杆菌O₇₈的抑制作用与临床疗效。体外试验采用最小抑菌浓度（MIC）与最小杀菌浓度（MBC）检测口服液抑菌效果;应用流式细胞仪观察口服液对细菌死亡率的影响;利用扫描电镜和透射电镜观察口服液对菌体形态与结构的影响;临床试验检测口服液对鸡大肠杆菌病的治疗效果及免疫器官指数的影响。结果显示,口服液对大肠杆菌的MIC为62.5 mg/mL,MBC为250 mg/mL;流式细胞仪检测可见口服液组大肠杆菌的死亡率为74.1%,空白对照组大肠杆菌死亡率为37.2%;扫描电镜下可见口服液处理组的菌体溢缩、断裂,形成许多残体;透射电镜下可见菌体变形,质壁分离现象。临床疗效显示,黄连组方治愈率为86.67%,而西药组治愈率为63.33%;空白对照组和西药组脾脏指数与模型组差异极显著（P < 0.01）,空白对照组、西药组、黄连组方高剂量组的法氏囊指数极显著高于模型组（P < 0.01）,模型组的胸腺指数显著低于其余各组（P < 0.05）。本试验结果表明,黄连组方可使菌体发生变形、溢缩断裂、质壁分离等变化达到杀菌效果,并可通过提高动物体免疫力来防治雏鸡大肠杆菌病。     

微生物发酵对油菜秸秆营养品质的影响

为探讨微生物菌种对秸秆pH值和营养成分的影响,对处理过的油菜秸秆进行微生物发酵试验。结果表明:与对照组相比,用粉态菌种和液态菌种处理的秸秆pH值降低,粗蛋白、粗脂肪含量提高,粗纤维含量减少,效果明显;试验组之间相比,用粉态菌种处理的秸秆在pH值、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维的变化方面均优于用液菌处理的效果。     

GC法测定马香苓口服液中百秋李醇含量研究

试验旨在建立测定马香苓口服液中百秋李醇含量的研究方法。本研究采用气相色谱法,其色谱条件是使用色谱柱HP-5毛细管柱;柱温采用程序升温（初始温度150 ℃,保持18 min,以50 ℃/min速率升至280 ℃,保持5 min）;进样口温度为280 ℃;载气：高纯氮气;流速1 mL/min;进样量1 μL,分流比20：1;检测器为氢火焰离子化检测器,温度为280 ℃;氢气流速40 mL/min,空气流速370 mL/min;分别进行系统适用性试验、专属性试验、线性范围考察、检测限和定量限的确定、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验、耐用性试验,并对10批样品进行了含量测定。结果显示,专属性溶液中的溶剂峰、药液的杂质峰与主成分峰能达到有效分离且分离度符合要求（R ≥ 1.5）,表明该方法系统适用性良好;阴性对照溶液未检出色谱峰,表明样品中其他成分不干扰测定;百秋李醇定量限和检测限分别为2.842和0.812 μg/mL;百秋李醇检测质量浓度在15.86~1 015 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（y=0.869x-10.45,R²=0.999,n=7）。精密度试验、稳定性试验（日内和日间精密度）、重复性试验的平均RSD分别为0.90%、1.63%和1.83%、2.90%,其RSD均在可控范围内（RSD ≤ 3%）;平均加样回收率为95.36%,RSD=2.82%（n=6）,表明所建立的气相色谱法检测百秋李醇的含量回收率良好;进行耐用性试验,最终验证所建立的色谱方法可以稳定检测百秋李醇的含量。经方法学验证,该方法准确稳定,简便可行,能够作为马香苓口服液君药广藿香中百秋李醇的含量控制方法,同时也为该制剂质量控制提供了一种有效的检测方法,暂定本品中广藿香药材按百秋李醇计不少于47.53 μg/mL。     

兽药内服制剂的微生物污染对食品动物健康及兽药临床

为考察兽药中实际存在的微生物对动物健康的影响,对山东省兽药GMP企业生产的粉散剂、颗粒剂产品的微生物污染状况进行抽样调查检测,发现不同的内服给药制剂,其微生物污染水平结果差异显著。在此基础上选择微生物限度严重超标的中药散剂,从中分离细菌、霉菌,拟定不同菌量的污染水平对健康鸡进行饲喂试验。结果表明：试验期间各用菌组试验鸡的精神状况、饮水和采食均未发现异常,试验结束后剖检各用菌液组及空白对照组鸡的心、肝、肾、肠道等,均未发现异常,各组鸡均未出现发病与死亡情况,且各组间增重无显著性差异（P〉0．05）。为进一步考察兽药被微生物污染后对临床疗效的影响,选用微生物限度严重超标的中药散剂鸡康灵微粉,开展对鸡慢性呼吸道病治疗试验,将自然感染鸡随机分为两组,每组1600只,一组鸡服用微生物限度超标的鸡康灵微粉,另一组服用辐射灭菌后的鸡康灵微粉。结果表明：两组治愈率均达90％以上,经x。检验,无显著性差异（P〉0．05）,产蛋率均恢复到90％以上。由上述试验可见,兽药不同内服制剂的微生物污染差异显著,且不同的微生物污染水平对动物健康及兽药临床疗效无显著影响,其相关性有待进一步研究。