人工培育条件对蚕蛹虫草主要活性成分含量的影响

虫草素和腺苷是蛹虫草(Cordyceps militaris)最主要的药用活性成分。以家蚕幼虫为寄主人工培育蚕蛹虫草,研究不同培育条件对蚕蛹虫草中虫草素和腺苷含量的影响,为建立不同药用需求的高品质蚕蛹虫草栽培技术提供试验依据。不同培育环境条件下的试验结果是:培养温度在24℃时蚕蛹虫草中的虫草素含量最高,22、24℃时腺苷的含量较高;每天以10℃的温差处理8 h,蚕蛹虫草中的虫草素含量最高(P0.01),而以此温差处理2 h与处理8 h腺苷的含量差异不显著(P0.05);光质为黄光最有利于虫草素和腺苷的形成(P0.01),其次是白光和蓝光;光照度在240~1 200 lx之间虫草素含量的差异不显著(P0.05),光照度在600~1 200 lx之间腺苷的含量差异显著(P0.05)。此外,以饥饿处理(接种后每天只给1次饲料)的家蚕幼虫作寄主有利于虫草素的形成,而以饱食的家蚕幼虫作寄主则更有利于腺苷的形成;以5龄第2天幼虫接种有利于虫草素的形成,以5龄起蚕接种有利于腺苷的形成。根据培养蚕蛹虫草的药用目的,可以对培养温度、温差处理时间、光照以及寄主家蚕幼虫的龄期和取食量等条件进行调节。     

蚕蛹虫草干燥工艺的研究

蚕蛹虫草是中国特有的新资源食品之一,业已证明在抗肿瘤、提高免疫力等方面具有较好的功效,已形成产业化趋势,其干燥工艺尚未有系统性的研究报道。本研究基于本单位培育的蚕蛹虫草为研究材料,采用不同的处理温度和时间,检测蚕蛹虫草水分含量变化,有效成分虫草素和虫草多糖在处理过程中的损失,正交法处理数据。结果显示,虫草自然阴干后或含水率14%的蚕蛹虫草,在恒温干燥器中处理,在满足蚕蛹虫草样品含水率达标的前提下,即虫草产品含水率在10%以下时,70℃温度处理2 h处理条件下,有效成分虫草素含量损失最少,80℃温度处理2 h处理条件下,有效成分虫草多糖含量损失最少。本研究为蚕蛹虫草综合开发提供技术依据。     

不同发育程度柞蚕蛹培育蚕蛹虫草的产量与营养保健品质

将经过0、30、60、90、120和150℃有效积温(以下称积温)处理的柞蚕蛹用于培育蚕蛹虫草,通过调查和检测柞蚕蛹虫草的生长状况及氨基酸组成与主要活性成分含量、超氧化物歧化(SOD)酶活力,考察不同发育程度柞蚕蛹对培育蚕蛹虫草的生长性状与营养保健品质的影响。结果表明,柞蚕蛹感受积温不超过90℃时,蛹虫草菌对柞蚕蛹的感染速度较快,僵蛹率在92%以上,生产蚕蛹虫草总鲜质量及子实体的数量、长度等产量指标显著高于感受积温120℃、150℃的柞蚕蛹生产的蚕蛹虫草(P0.05);柞蚕蛹感受积温在0~120℃之间,随着积温增加,生产蚕蛹虫草的氨基酸总量也有增加趋势,当感受积温150℃时生产蚕蛹虫草的氨基酸总量又降低,比最高组(氨基酸总量的质量分数为35.05%)减少了28.73%;柞蚕蛹感受积温60℃时生产蚕蛹虫草的虫草素含量最高,质量比达到1.15 mg/g;随着柞蚕蛹感受积温的增加,生产蚕蛹虫草中的虫草多糖含量与SOD酶活力逐渐降低,柞蚕蛹感受积温150℃时生产蚕蛹虫草中的虫草酸含量最高(质量分数达13.23%)。试验结果提示,利用柞蚕滞育蛹或轻度发育蛹可以高效生产出品质优良的蚕蛹虫草。     

不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量测定

虫草素和腺苷是蛹虫草的重要活性成分,通过高效液相色谱(HPLC)法测定不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量,筛选能生产高品质蛹虫草的培养基。测定结果表明,用不同培养基培育的蛹虫草子实体中,其虫草素和腺苷含量存在显著差异,总体表现为粳米+家蚕蛹浸提液培养基>糯米+家蚕蛹浸提液培养基>粳米培养基>糯米培养基,其中用粳米+家蚕蛹浸提液培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素和腺苷质量比分别高达15.37 mg/g和39.96 mg/g。此外,相同培养基培育的蛹虫草子实体、菌丝体和培养基质中的虫草素与腺苷含量存在极显著差异,总体表现为子实体>菌丝体>基质。试验结果表明,粳米培养基中添加家蚕蛹浸提液可显著提高蛹虫草中的虫草素和腺苷含量。     

不同蛹虫草菌株栽培蚕蛹虫草的形态性状及活性成分含量比较

选择5株蛹虫草菌株感染家蚕5龄第3天幼虫生产蚕蛹虫草,通过观察检测蚕蛹虫草的形态性状及采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定虫草素和腺苷的含量,为筛选高产优质蛹虫草菌株提供依据。不同菌株栽培生产的蚕蛹虫草的外观形状、生长状况以及活性成分含量均有明显差异:1-Y菌株栽培的蚕蛹虫草整体形状较接近于野生的冬虫夏草,MS菌株栽培的蚕蛹虫草子座形状较佳,17-3菌株栽培的蚕蛹虫草僵虫体形状较佳;1-1菌株栽培的蚕蛹虫草总质量和僵虫体质量均最高,干质量分别达到1.460 g和1.170 g;MS菌株栽培的蚕蛹虫草子座总数量、子座总长度及子座质量占虫草总质量的比率等指标均极显著高于其他菌株(P0.01),分别达15.100根、44.877 cm和41.357%;1-Y菌株栽培的蚕蛹虫草整体所含虫草素最高,达8.92 mg/g,MS菌株栽培的蚕蛹虫草整体所含腺苷最高,达2.22 mg/g,并且5株供试菌株栽培的蚕蛹虫草僵虫体中的虫草素含量均高于子座,而子座中的腺苷含量均高于僵虫体。研究结果表明,蛹虫草菌株是影响人工栽培蚕蛹虫草形态性状及活性成分含量的重要因素,初步认为1-Y菌株和MS菌株具有较高的生产应用价值。     

高效毛细管电泳法测定虫草制品中核苷类化合物

建立了用高效毛细管电泳技术测定虫草中核苷类化合物的方法,比较了冬虫夏草、人工培养的蚕蛹虫草、人工液体发酵的虫草菌丝及市售虫草制品中核苷类化合物的含量。采用熔融石英毛细管及Beckman P/ACE毛细管电泳仪,在硼砂-磷酸缓冲液(pH8.9),检测波长254nm,分离电压20kv的条件下,4种虫草水提液中的核苷类化合物(虫草素、腺苷、腺嘌呤、尿嘧啶和次黄嘌呤)获得了基线分离,并具有良好的精密度和重现性。检测结果表明:蚕蛹虫草中核苷类化合物含量丰富,虫草素和腺苷含量均高于冬虫夏草,液体发酵的虫草菌丝也可以达到替代野生虫草的效果。     

用不同蛹虫草菌株和家蚕品种幼虫覆土栽培蚕蛹虫草的试验

采用覆土培育的方法人工栽培蚕蛹虫草,在相同的培育环境条件下以6株蛹虫草菌(Cordyceps militaris)菌株和4个家蚕品种的5龄第6天幼虫供试,筛选合适的菌株和蚕品种。同一个家蚕品种的幼虫接种不同蛹虫草菌株的感染率差异显著;接种相同蛹虫草菌株120 h时,家蚕二元杂交组合与四元杂交组合幼虫间的感染率差异显著,至168 h,仅接种菌株H24的2个家蚕二元杂交组合间幼虫的感染率差异显著,各家蚕品种幼虫接种其余菌株的感染率已无显著差异,家蚕品种7532×湘晖的幼虫接种菌株LP4的感染率最高达到93.33%,并且该菌株对4个家蚕品种幼虫的感染能力显著高于其他菌株。不同菌株接种各家蚕品种幼虫的发菌率无显著差异。各家蚕品种幼虫接种菌株H24和H7未获得子实体,接种菌株H10和LP4的出草率最高,平均值分别为84.73%和88.70%。供试菌株和家蚕品种均显著影响蚕蛹虫草中3种活性成分的含量,并且菌株的影响更显著:以菌株L2接种7532×湘晖的幼虫培育蚕蛹虫草中的虫草素含量最高;以菌株H0接种932·芙蓉×7532·湘晖的幼虫培育蚕蛹虫草中的腺苷含量最高;以菌株H0接种洞·庭×碧·波的幼虫培育蚕蛹虫草中的虫草多糖含量最高。综合各项试验成绩初步认为:蛹虫草菌L2菌株和LP4菌株具有较高的生产应用价值;家蚕品种直接影响菌株的感染速度,对培育蚕蛹虫草中活性成分的含量也有一定影响。     

家蚕蛹虫草的化学成份分析

分析表明 :家蚕蛹虫草含有虫草酸、虫草素、腺嘌呤、尿嘧啶、β 谷甾醇、麦角甾醇、生物碱和多种游离基酸 ,其化学成份的种类与冬虫夏草基本类似 ,但虫草素、腺嘌呤的含量是冬虫夏草的 3倍。氨基酸分析表明 :家蚕蛹虫草子实体中氨基酸含量高于蛹体部分 ,特别是Glu、Lys ,而Gly则明显低于蛹体部分。比较家蚕蛹虫草与蛹虫草菌粉的化学成份可知 :炽灼残渣、重金属、总氮量和腺嘌呤的含量家蚕蛹虫草高于蛹虫草菌粉 ;总糖、腺苷、甘露醇的含量低于蛹虫草菌粉。稳定性试验表明 :3个月内家蚕蛹虫草的功效成份无明显变化     

桑蚕蛹虫草高效仿野生栽培技术探讨

桑蚕蛹虫草是虫草菌侵染桑蚕蛹后形成的复合体,可最大限度还原蛹虫草的药性和功效,其所含的虫草活性成分-虫草素,以其特有的抗菌、抗病毒活性,已引起全球科技发达国家的高度重视。针对江西桑蚕资源丰富这一优势,开展了桑蚕蛹虫草高效仿野生栽培技术的研究,对存在的问题加以分析和讨论,为桑蚕蛹虫草的研究和产业化开发提供借鉴。     

利用原生质体诱变方法选育蛹虫草高产突变菌株

对蛹虫草(Cordyceps militaris)原生质体分别进行热应激和紫外线诱变处理后,挑选再生菌株进行栽培试验,通过测定菌株子实体产量及腺苷、虫草素含量,从中筛选高产突变菌株。蛹虫草原生质体经68℃和72℃热应激后,再生菌株子实体干物质含量显著增加,且68℃处理组子实体中腺苷含量显著提高。用紫外灯照射原生质体1 min、6 min和7 min时,子实体干物质含量显著增加,腺苷含量较对照组分别提高49.4%、96.4%和15.9%,虫草素含量分别提高49.1%、20.0%和13.5%。最终从紫外线诱变1 min处理组筛选出5株高产突变菌株,其子实体干质量和生物转化率均显著高于出发原菌株,子实体中虫草素含量分别为原菌株的1.59、1.72、1.74、1.55和1.56倍,并且5株菌株目标性状的稳定性良好。试验结果表明,以原生质体为材料,采用紫外线诱变技术可以选育出蛹虫草高产突变菌株。     

木薯蚕蛹虫草有效成分含量分析初报

对以常规技术人工栽培的木薯蚕蛹虫草进行成分含量检测分析,发现其干物质中含蛋白质71.00%,脂肪0.94%,总糖0.36%;18种氨基酸含量占虫草总量的19.21%;含虫草素0.02%,含虫草酸5.6%,未检测到虫草多糖;富含多种无机盐,对人体有益的Ca、Fe、Zn、Se等元素含量较高;同时含有维生素A、E及B族维生素,但未检测到维生素D和维生素C。木薯蚕蛹虫草与柞蚕蛹虫草、冬虫夏草相比较,木薯蚕蛹虫草尚不能成为冬虫夏草的替代品。     

蛹虫草培养残基中虫草素的水热回流提取及含量测定

【目的】 探究水热回流法提取蛹虫草培养残基中活性成分虫草素的最佳工艺参数。【方法】 选取液料比、提取次数、提取温度、提取时间4个因素进行单因素试验和正交试验,并通过高效液相色谱法（HPLC）测定虫草素含量,确定水热回流法提取蛹虫草培养残基的最佳工艺参数。【结果】 方法学验证结果表明,蛹虫草培养残基中虫草素含量的HPLC测定方法精密度、重复性、稳定性相对标准偏差（RSD）均<2%,准确度RSD为2.64%,标准曲线线性相关性高。正交试验结果显示,影响水热回流法提取效果的因素依次为提取时间、提取次数、液料比、提取温度,其中提取时间和提取次数对提取物虫草素含量均有显著影响（P<0.05）,提取温度和液料比影响不明显（P>0.05）。单因素试验和正交试验结果表明,蛹虫草培养残基的最佳提取工艺参数为：液料比25：1、提取次数5次、提取温度70 ℃、提取时间60 min,该提取条件下测得蛹虫草培养残基中虫草素含量为1.48 mg/g。【结论】 采用本研究确定的水热回流法最佳工艺参数能有效提取蛹虫草培养基活性成分,且操作简单实用,提取物活性成分得率稳定,为后续蛹虫草培养残基产品开发提供参考依据。     

用不同家蚕品种5龄幼虫培育蚕蛹虫草中的1-脱氧野尻霉素含量检测

家蚕幼虫体内的活性物质1-脱氧野尻霉素(DNJ)的含量在家蚕品种之间存在差异。以蛹虫草菌(Cordyceps militaris)感染家蚕幼虫生产蚕蛹虫草,分别以20个家蚕品种的5龄第3天幼虫作为寄主,调查96 h家蚕感染率、10 d出草率及蚕蛹虫草中的DNJ含量,筛选蚕蛹虫草产量高且富含DNJ的家蚕品种。结果表明,蛹虫草菌对不同家蚕品种幼虫的感染率无显著差异,感染率和10 d出草率均达到100%;不同家蚕品种5龄第3天幼虫制备全蚕粉样品中的DNJ含量存在极显著差异,其中家蚕品种楚玉样品中的DNJ质量分数最高达0.557 5%,用不同家蚕品种5龄第3天幼虫培育的蚕蛹虫草中的DNJ含量也存在极显著差异,其中用家蚕品种东四单幼虫培育蚕蛹虫草样品中的DNJ质量分数最高达0.239 7%。依据试验结果初步认为,不同家蚕品种幼虫接种同一株蛹虫草菌对人工培育蚕蛹虫草的出草率没有影响;蛹虫草菌在蚕体内生长过程中会在一定程度降低蚕体原有的DNJ含量,家蚕品种东四单的5龄幼虫可用于生产高DNJ含量的蚕蛹虫草。     

蛹虫草的蚕蛹活体培养和蚕蛹粉培养基培养技术及主要成分的比较分析

对采用蚕蛹活体注射接种和在小麦+大米+蚕蛹粉混合培养基(以下简称混合培养基)表面喷洒接种蛹虫草菌2种方法培养得到的蚕蛹虫草的主要成分进行了比较分析,结果表明:蚕蛹活体注射接种培养得到的蚕蛹虫草,腺苷含量为184 mg/kg,比混合培养基表面喷洒接种培养得到的蚕蛹虫草的腺苷含量(102 mg/kg)高80.39%;氨基酸总量(215 800 mg/kg)比混合培养基表面喷洒接种培养得到的蚕蛹虫草(165 600 mg/kg)高30.31%,必需氨基酸含量(94 200 mg/kg)比混合培养基表面喷洒接种培养得到的蚕蛹虫草(63 900 mg/kg)高47.42%;未检测出铅的含量(低于0.005 mg/kg),汞的含量(0.012 mg/kg)也低于混合培养基表面喷洒接种培养得到的蚕蛹虫草的含量(0.015 mg/kg),铅、汞的含量远低于食品安全国家标准GB 2762—2012《食品中污染物限量》的限量要求。     

蚕蛹虫草中虫草素的提取及纯化工艺研究

本实验主要对蚕蛹虫草中虫草素(3’—脱氧腺嘌呤核苷、学名3’—Deoxyadenosine)进行纯化及纯度鉴定。结果表明:经过对蚕蛹虫草子实体及菌丝的粉碎、石油醚脱脂、80℃水浴10小时、调节等电点沉淀、732-NH_4离子交换树脂的分离、浓缩、5℃下低温结晶,可得到一定纯度的虫草素晶体。     

不同干燥方式及温度条件对桑椹干营养保健品质的影响

采用果品干燥技术,将不易保存的新鲜桑椹加工成营养品质优良的桑椹干,为有效拓展桑椹消费市场提供技术支持。采用真空干燥、热风干燥、热泵干燥3种方式结合4种温度(45、50、55和60℃)处理新鲜桑椹,分析不同干燥方式及温度条件加工桑椹干的感官色度和活性成分含量与抗氧化活性。与新鲜桑椹相比,3种干燥方式制备的桑椹干样品的色度均有较大变化(ΔE*9),同一干燥方式处理温度越高,色度变化越明显(P0.05);不同干燥方式制备桑椹干样品中的游离态酚、结合态酚、总酚及总黄酮含量均存在显著差异(P0.05),并且干燥温度对游离态酚和总黄酮的含量影响较大;桑椹干样品清除DPPH自由基的能力、ORAC抗氧化能力与其提取液中的多酚含量之间存在显著相关性。综合考虑各项营养品质指标检测结果,建议在实际加工生产中采取45℃低温热风干燥处理新鲜桑椹,有利于保护桑椹色泽,并减少桑椹中酚类活性物质的损失。     

蛹虫草中虫草素、腺苷综合提取工艺研究

以蛹虫草为材料,采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4种提取方法,选择虫草素和腺苷的最优提取方法,并用正交试验方法考察超声波水提法中提取温度、提取次数、提取时间、料液比4个因素对虫草素、腺苷综合提取效率的影响,确定虫草素、腺苷综合提取最佳工艺。结果表明,超声波水提法是综合提取虫草素和腺苷的最优方法,其最佳工艺条件为:用10倍量的水于60℃超声波提取2次,每次40min。     

家蚕蛹虫草菌丝体水提物对CCl4诱导小鼠肝脏和免疫功能损伤的保护作用

为发掘家蚕蛹虫草的药用价值,研究家蚕蛹虫草菌丝体水提物对CCl4诱导的小鼠肝脏及免疫功能损伤的保护作用。将ICR雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组和家蚕蛹虫草菌丝体水提物低、高剂量组[0.2、0.4 g/(kg.d)],除正常对照组外各组均按剂量30 mg/kg腹腔注射CCl4造模。测定各组小鼠血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性和免疫因子白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)的水平,结果表明家蚕蛹虫草菌丝体水提物可极显著提高模型小鼠血清中的IL-2、IFN-γ水平(P<0.01),并极显著降低AST、ALT活性及TNF-α含量(P<0.01)。研究结果显示家蚕蛹虫草菌丝体水提物对CCl4诱导的肝损伤具有明显的保护作用,并通过促进IL-2、IFN-γ的分泌,进而降低TNF-α的水平,调节CCl4模型小鼠的免疫功能,这也是其发挥抗肝脏纤维化作用的机制之一。     

不同培育时期柞蚕蛹虫草的主要成分及其生物活性分析

对不同培育时期柞蚕蛹虫草的主要成分及生物活性进行比较分析,结果表明,在柞蚕蛹虫草的培育过程中,总氨基酸和总脂肪含量呈现减少的趋势,其中脂肪质量分数由22.5%降为1.7%,降幅达到92.4%;蛋白质质量分数则呈增加趋势,培养到第60天时蛋白质质量分数最高为72.54%;腺苷含量呈现先增加后降低的趋势,在第50天时达到最高;虫草酸、虫草多糖、虫草素和喷司他丁含量则呈增加趋势,第60天时达到最高;超氧化物歧化酶(SOD)活力到第40天时达到394 U/g,而后呈下降趋势;对DPPH自由基的清除能力亦在第40天时达到最高,清除率为95.83%;对羟基自由基的清除能力则在第50天时最高,清除率为89.63%。说明不同培育时期柞蚕蛹虫草的主要成分的合成和积累存在明显差异,对其生物活性可产生明显影响。     

吖啶橙诱变提高蛹虫草虫草素含量的研究

蛹虫草的活性成分与冬虫夏草基本相同,常被用作冬虫夏草的替代品。虫草素是虫草属特有的次生代谢产物,具有很高的药用价值。为提高虫草素含量,应用吖啶橙对蛹虫草无性型孢子进行诱变,筛选虫草素含量高的突变菌株,并对获得的稳定遗传的突变株进行再诱变,经二次诱变得到的突变菌株其虫草素含量可达290.60mg/L,比初发菌株提高了7.4倍。