白牦牛肠道枯草芽孢杆菌的分离纯化及安全性试验研究

[目的]为了解天祝白牦牛肠道中是否存在有益菌——枯草芽孢杆菌。[方法]从外表健康的待宰白牦牛直肠中无菌采集粪便,在实验室条件下选用不同的培养基对白牦牛肠道内的细菌进行分离纯化,并挑取可疑的单个菌落进行涂片染色和生化反应试验,根据菌落、菌体特征及生化反应。[结果]表明:白牦牛肠道内存在枯草芽孢杆菌。之后将此菌按不同剂量分别给小鼠腹腔注射,通过对小鼠的临床症状及各器官解剖病理变化的观察。[结论]确定从白牦牛肠道内分离得到的枯草芽孢杆菌是安全的。     

牦牛肠源乳杆菌的分离与鉴定

为了探讨牦牛肠道乳杆菌的菌群组成,试验用MRS培养基对牦牛肠道黏膜样品进行乳杆菌分离、纯化,并采用菌落形态观察、革兰染色、菌体形态观察和生化反应进行菌株鉴定。结果表明:牦牛肠道乳杆菌的菌群主要由嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、弯曲乳杆菌和干酪乳杆菌组成。     

复方中药-益生菌制剂对雏鸡大肠杆菌、沙门氏菌抑制作用的研究

将200羽雏鸡,随机分入4个试验组(红白各半):复方中药制剂组(Ⅰ组)、复方益生菌制剂组(Ⅱ组)、复方中药-益生菌制剂组(Ⅲ组)、对照组(Ⅳ组),进行为期42 d的试验,比较各处理方法对雏鸡肠道大肠杆菌及沙门氏菌的影响。结果表明:试验初期复方益生菌制剂单独应用对鸡肠道大肠杆菌及沙门氏菌抑制作用优于复方中药制剂组及复方中药-益生菌制剂组;试验后期复方中药与从健康白牦牛肠道内分离纯化得到的枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌复方益生菌制剂联合应用对鸡肠道大肠杆菌及沙门氏菌有极明显的抑制作用。     

自然发酵牦牛酸奶中乳酸菌的分离鉴定

为系统揭示青海部分地区自然发酵牦牛乳中的微生物乳酸菌种群结构,丰富牦牛乳微生物菌种资源库数据,本试验通过纯培养方法对采集于青海省海北藏族自治州海晏县、黄南藏族自治州泽库县及同仁市3个不同地区当地居民自然发酵的牦牛酸奶分离得到10株乳酸菌,并利用生化鉴定试剂盒对该10株乳酸菌进行了菌种的鉴定,结果表明4株杆菌分离株和6株球菌分离株。其中6株归为嗜热链球菌,2株归为嗜酸乳杆菌,1株归为罗伊氏乳杆菌,1株归为干酪乳杆菌干酪亚种。其中,海晏县样品菌种为干酪乳杆菌干酪亚种和嗜热链球菌,同仁县样品中的菌种为嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌和罗伊氏乳杆菌,泽库县样品中的菌种为嗜热链球菌。研究结果为青海地区牦牛乳酸菌资源数据库的丰富提供了依据。     

肉鸽肠道和嗉囊内容物中乳酸菌的分离鉴定研究

为了从肉鸽肠道和嗉囊内容物中分离得到乳酸菌,试验采用无菌操作技术,对肉鸽肠道和嗉囊内容物进行了分离培养、革兰氏染色及生理生化试验。结果表明:从肉鸽的肠道和嗉囊内容物中分离得到4株菌株,分别为嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌及枯草芽孢杆菌。     

牦牛肠道与粪便乳酸菌的分离鉴定及PCR-16SrDNA鉴定

以取自四川省不同地区的牦牛粪便、肠道内空物为材料，用MRS琼脂双层培养基进行厌氧培养，分离到50株乳酸菌，经生化鉴定为嗜热链球菌（2株）、乳酸乳球菌（1株）、保加利亚乳杆菌（5株）、嗜粪乳杆菌（10株）、嗜酸乳杆菌（8株）、乳酸乳杆菌（9株）、肠乳杆菌（10株）、弯曲乳杆菌（5株）。采用乳酸菌16 SrDNA通用引物，对分离的8种菌的16S rDNA-段可变区序列进行扩增，均得到大小约470bp的产物；扩增产物经纯化、测序后与GenBank中标准菌株的核甘酸序列比较，同源性均大于97．5％，同源性分析与生化试验的结果是一致的。证实，牦牛肠道和粪便的乳酸菌较为丰富，且乳杆菌的数量较多，这可能与牦牛复杂的生长环境有关。     

表达鼠源GLP-2重组嗜酸乳杆菌的构建

嗜酸乳杆菌是一种常见的肠道益生菌。嗜酸乳杆菌及其代谢产物可以调节肠道菌群的比例,增强肠道屏障功能,调节相关免疫反应,从而维护肠道内环境稳态,在一定程度上达到了治疗IBD的作用。胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptide-2,GLP-2)作为一种肠道营养因子,可促进肠粘膜增殖、抑制其凋亡,从而改善肠屏障功能,促进肠吸收功能恢复。本研究将GLP-2与嗜酸乳杆菌信号肽重组连接pMG36e质粒上,通过电转化转入感受态嗜酸乳杆菌中,构成重组嗜酸乳杆菌。结果表明,重组pMG36e质粒中扩增GLP-2基因与基因库公布的一致,通过Western blot检测到重组嗜酸乳杆菌上清液中有GLP-2蛋白表达。重组嗜酸乳杆菌的成功构建,使GLP-2与嗜酸乳杆菌对IBD发挥了双重疗效,为后续研究重组益生菌应用于临床治疗IBD奠定了基础。     

不同处理豆粕及嗜酸乳杆菌培养物对断奶仔猪肠道微生态系统的影响

研究旨在探讨不同处理豆粕及嗜酸乳杆菌培养物对断奶仔猪肠道微生态系统的影响。试验选用遗传背景、胎次和体重相近的21日龄断奶仔猪240头,按随机区组设计分为5个处理,每个处理4个重复,每个重复12头。对照组饲喂玉米-豆粕型基础饲粮。试验Ⅰ组仔猪饲喂发酵豆粕代替10%普通豆粕的试验饲粮,试验Ⅱ组仔猪饲喂用膨化大豆代替对照组饲粮中豆粕的饲粮,试验Ⅲ组饲粮是在对照组基础上用嗜酸乳杆菌培养物代替3%原有原料,试验Ⅳ组饲粮是在对照组基础上用嗜酸乳杆菌培养物代替5%原有原料。试验期21 d。结果表明,嗜酸乳杆菌培养物可促进仔猪肠道厚壁菌门丰富度增加,变形菌门数量降低(P>0.05),广古菌门丰富度和乳杆菌属数量显著增加(P<0.05);发酵豆粕可使仔猪粪球菌属数量显著上升、弧形杆菌属显著降低(P<0.05);膨化大豆及3%嗜酸乳杆菌培养物组仔猪肠道菌群丰富度显著高于对照组(P<0.05),其中膨化大豆组仔猪盲肠内乳酸杆菌数量显著升高,3%嗜酸乳杆菌组仔猪盲肠内乳酸杆菌、双歧杆菌数量显著升高(P<0.05)。由此可知,饲粮添加发酵豆粕、膨化大豆及嗜酸乳杆菌培养物均能在一定程度上有效增加仔猪肠道有益菌数量,促使肠道微生态系统更加稳定,且3%嗜酸乳杆菌培养物的效果最佳。     

基于PFGE技术的酸乳中乳酸菌的基因分型

采用选择性培养基分离酸乳中的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌,并利用生理生化和糖发酵实验结合16S rDNA同源性分析对分离所得菌株进行鉴定,获得保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌分离菌株。利用脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）分别对保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌分离株进行基因分型。结果表明：所检测的酸乳样品中均含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌;仅有2 种酸乳的嗜热链球菌为同一菌株,其余酸乳中的保加利亚乳杆菌及嗜热链球菌均为不同菌株。PFGE可以对保加利亚乳杆菌和嗜热     

乳酸杆菌对病原菌粘附肉鸡肠粘液的影响

研究嗜酸乳杆菌、禽大肠杆菌O78、大肠杆菌ATCC 25922、鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌与肉鸡不同肠段粘液糖蛋白的粘附性能,探讨嗜酸乳杆菌对四种病原菌的粘附排斥作用.结果表明,在不同的肠道部位,嗜酸乳杆菌、鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌与肠粘液糖蛋白的粘附能力不同,而禽大肠杆菌O78、大肠杆菌ATCC 25922在各肠段粘液上的粘附性能相近;在相同的肠道部位,所试菌与肠粘液糖蛋白的粘附能力有差异,其中嗜酸乳杆菌的粘附作用最强;嗜酸乳杆菌对所试病原菌均有不同程度的粘附排斥作用,其中对鸡白痢沙门氏菌的粘附排斥较强,而对大肠杆菌ATCC25922的则较弱.     

嗜酸乳杆菌的生理特性及应用

嗜酸乳杆菌可以在肠道中存活、定植，具有重要的生理功能。本文论述了嗜酸乳杆菌的营养需求、应用及保健作用。     

果洛地区传统发酵牦牛酸奶中乳酸菌的分离鉴定

本实验对青海省果洛藏族自治州4县8份传统发酵牦牛酸奶中的乳酸菌进行分离纯化,并利用生化鉴定试剂盒进行鉴定。结果表明,分离得到的16株乳酸菌中,3株为德式乳酸杆菌、2株为干酪乳酸杆菌、2株为罗伊氏乳杆菌、1株为嗜酸乳杆菌、8株为嗜热链球菌。     

基于16S rDNA测序分析腹腔注射苦参碱的昆明小鼠肠道菌群结构

旨在通过16S rDNA测序技术分析腹腔注射苦参碱的昆明小鼠肠道菌群的结构。本研究将20只昆明小鼠随机分为2组,分别是苦参碱组(MT组)和阴性对照组(NC组),连续腹腔给药5 d,每天给药2次,收集各组粪便和各肠段组织,进行β多样性、Lefse及Metastats分析,qPCR检测差异菌种在各肠段的mRNA表达量,通过KEGG分析肠道菌群变化导致的代谢途径差异。稀释曲线结果显示,所测样本数据足以反映样品中物种多样性;β多样性分析结果显示,苦参碱可以调节肠道菌群的结构,Lefse及Metastats分析结果均显示,苦参碱显著增加了拟杆菌门(Bacteroidetes)、拟杆菌目(Bacteroidales)、Muribaculaceae、益生菌嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的丰度,而显著减少了厚壁菌门(Firmicutes)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)和脱硫弧菌属(Desulfovibrio)的丰度。与Lefse及Metastats分析结果一致,qPCR结果显示苦参碱组小鼠粪便中嗜酸乳杆菌含量增加。同时,苦参碱可以增强嗜酸乳杆菌在各肠段的定植。通过KEGG分析发现,NC与MT组之间在聚糖的生物合成与代谢、运输与分解代谢等代谢途径存在显著差异。本研究结果表明,腹腔注射苦参碱可以显著改变昆明小鼠肠道菌群的结构,增加有益菌嗜酸乳杆菌在肠道中的定植,并造成了聚糖生物合成与代谢、运输与分解代谢等代谢途径的差异,为进一步揭示苦参碱发挥药效作用的机理奠定了基础。     

基于16S rDNA测序分析腹腔注射苦参碱的昆明小鼠肠道菌群结构

旨在通过16S rDNA测序技术分析腹腔注射苦参碱的昆明小鼠肠道菌群的结构。本研究将20只昆明小鼠随机分为2组,分别是苦参碱组(MT组)和阴性对照组(NC组),连续腹腔给药5 d,每天给药2次,收集各组粪便和各肠段组织,进行β多样性、Lefse及Metastats分析,qPCR检测差异菌种在各肠段的mRNA表达量,通过KEGG分析肠道菌群变化导致的代谢途径差异。稀释曲线结果显示,所测样本数据足以反映样品中物种多样性;β多样性分析结果显示,苦参碱可以调节肠道菌群的结构,Lefse及Metastats分析结果均显示,苦参碱显著增加了拟杆菌门(Bacteroidetes)、拟杆菌目(Bacteroidales)、Muribaculaceae、益生菌嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的丰度,而显著减少了厚壁菌门(Firmicutes)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)和脱硫弧菌属(Desulfovibrio)的丰度。与Lefse及Metastats分析结果一致,qPCR结果显示苦参碱组小鼠粪便中嗜酸乳杆菌含量增加。同时,苦参碱可以增强嗜酸乳杆菌在各肠段的定植。通过KEGG分析发现,NC与MT组之间在聚糖的生物合成与代谢、运输与分解代谢等代谢途径存在显著差异。本研究结果表明,腹腔注射苦参碱可以显著改变昆明小鼠肠道菌群的结构,增加有益菌嗜酸乳杆菌在肠道中的定植,并造成了聚糖生物合成与代谢、运输与分解代谢等代谢途径的差异,为进一步揭示苦参碱发挥药效作用的机理奠定了基础。     

嗜酸乳杆菌P302所产类细菌素的生物学特性及菌株耐药性分析

对嗜酸乳杆菌P302所产的类细菌素进行生物学特性的研究结果表明,类细菌素对动物肠道内革兰氏阴性和革兰氏阳性致病菌均有抑菌作用,PH值仅在3.0和4.0有抑菌活性,在121℃处理20min后活性略有下降,用蛋白酶处理后抑菌活性降低.嗜酸乳杆菌P302对83种抗生素的耐药性结果表明,嗜酸乳杆菌P302对其中的19种抗生素有耐药性.     

嗜酸乳杆菌的研究进展

嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)具有调节肠道菌群、抑制病原菌、增强免疫力、降低血脂等多种益生功效,其在食品、医药、饲料等领域中的应用日益增多。文章根据国内外嗜酸乳杆菌的研究与利用情况,对嗜酸乳杆菌的生物学特性、安全性、益生功能与应用等方面进行论述,并在此基础上探讨了嗜酸乳杆菌的发展前景。     

嗜酸乳杆菌SR-1发酵代谢产物的体外抑菌试验分析

通过药敏试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对66种抗生素的耐药性;平板抑菌试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对35种常见病原菌抑菌作用;与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合培养,确定其对致病菌的颉颃作用.结果表明:嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对15种常见的抗生素有耐药性;pH值为3.0时,其有广谱的抗菌活性,对35种常见革兰阳性和革兰阴性致病菌均有明显的抑制作用,但对肠道内益生菌无抑制作用;在与致病菌混合培养40 h内可以彻底清除金黄色葡萄球菌,48 h内可以完全消灭大肠杆菌.体外抑菌试验结果表明嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物具有较强的抑菌作用.     

嗜酸乳杆菌SR-1发酵代谢产物的体外抑菌试验分析

通过药敏试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对66种抗生素的耐药性；平板抑菌试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对35种常见病原菌抑菌作用；与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合培养，确定其对致病菌的颉颃作用。结果表明：嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对15种常见的抗生素有耐药性；pH值为3．0时，其有广谱的抗菌活性，对35种常见革兰阳性和革兰阴性致病菌均有明显的抑制作用，但对肠道内益生菌无抑制作用；在与致病菌混合培养40h内可以彻底清除金黄色葡萄球菌，48h内可以完全消灭大肠杆菌。体外抑菌试验结果表明嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物具有较强的抑菌作用。     

不同处理豆粕及嗜酸乳杆菌培养物对断奶仔猪生长性能和肠道形态结构的影响

本研究旨在探讨不同处理豆粕及嗜酸乳杆菌培养物对断奶仔猪生长性能和肠道形态结构的影响。试验选用遗传背景、胎次和体重相近的21日龄断奶仔猪240头,随机分为5个组,每组4个重复,每个重复12头仔猪。对照组仔猪饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,发酵豆粕组饲粮中用10%发酵豆粕代替部分普通豆粕,膨化大豆组饲粮中用膨化大豆代替所有普通豆粕,嗜酸乳杆菌培养物组饲粮中分别添加3.0%和5.0%的嗜酸乳杆菌培养物。各组饲粮消化能和粗蛋白质等营养水平相近。试验期21 d。结果表明:1)与对照组相比,发酵豆粕组断奶仔猪料重比显著降低(P0.05),3%嗜酸乳杆菌培养物组断奶仔猪平均日采食量显著提高(P0.05)。3%嗜酸乳杆菌培养物组和5%嗜酸乳杆菌培养物组之间断奶仔猪平均日采食量差异不显著(P0.05)。2)3%、5%嗜酸乳杆菌培养物组断奶仔猪十二指肠、空肠、回肠的绒毛高度显著高于对照组和发酵豆粕组(P0.05)。3%、5%嗜酸乳杆菌培养物组断奶仔猪十二指肠、回肠、空肠的绒毛高度/隐窝深度(V/C)值显著高于对照组和发酵豆粕组(P0.05)。膨化大豆组断奶仔猪十二指肠的V/C值显著高于对照组(P0.05)。3)透射电镜下发现,对照组断奶仔猪空肠微绒毛疏密不等、长短不一,而3%、5%嗜酸乳杆菌培养物组断奶仔猪空肠微绒毛更为密集,整齐一致。由此可知,饲粮中添加发酵豆粕或嗜酸乳杆菌培养物可改善断奶仔猪生长,饲粮中添加嗜酸乳杆菌培养物还能改善肠道形态结构。综合生长性能和肠道形态结构,断奶仔猪饲粮中嗜酸乳杆菌培养物添加量以3%为宜。     

嗜酸乳杆菌SR-1发酵代谢产物的体外抑菌试验分折

通过药敏试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对66种抗生素的耐药性;平板抑茵试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对35种常见病原菌抑菌作用;与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合培养,确定其对致病菌的颉颃作用.结果表明:嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对15种常见的抗生素有耐药性;pH值为3.0时,其有广谱的抗菌活性,对35种常见革兰阳性和革兰阴性致病茵均有明显的抑制作用,但对肠道内益生茵无抑制作用;在与致病菌混合培养40 h内可以彻底清除金黄色葡萄球菌,18 h内可以完全消灭大肠杆菌.体外抑菌试验结果表明嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物具有较强的抑菌作用.