液相色谱—串联质谱法测定猪尿中苯乙醇胺A

建立了一种超高效液相色谱—串联质谱法测定猪尿中苯乙醇胺A的方法。猪尿样品以莱克多巴胺—D3为内标,尿液经酶解提取后经MCX固相萃取柱净化,超高效液相色谱—串联质谱法测定。苯乙醇胺A监测离子为m/z344.7>149.5和m/z344.7>326.7。结果表明在1~100ng/mL范围内苯乙醇胺A呈良好的线性关系,高中低浓度相对回收率在98.8%~118.0%,变异系数小于10%,定量限为0.2ng/mL。该方法用同位素内标法定量准确,适用于猪尿中苯乙醇胺A的残留测定。     

液相色谱串联质谱测定动物肠衣中残留苯乙醇胺A

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC/MS/MS)测定肠衣中的苯乙醇胺A残留的方法。肠衣样品经乙酸铵溶液提取酶解,MCX固相萃取柱净化,流动相溶解后HPLC/MS/MS进行检测。苯乙醇胺A标准曲线线性关系良好(r=0.999);回收率87.0%～93.5%,相对标准偏差为3.2%～8.4%;检出限0.2μg/kg,定量限0.25μg/kg。     

饲料中苯乙醇胺A测定方法的应用

对饲料中苯乙醇胺A采用ELISA试剂盒初筛,ELISA试剂盒提供的标准曲线范围为0.025~2.025ng/mL,饲料中苯乙醇胺A添加浓度在10.0~40.0μg/kg之间,回收率范围在74%~140%之间。采用液相色谱-质谱联用仪(LC-MS/MS)法测定苯乙醇胺A在0.01~0.50μg/mL范围内呈良好的线性关系,回收率为83%。结果表明采用ELISA试剂盒初筛操作简便,能减小工作量,但易出现假阳性;采用LC-MS/MS法测定操作复杂,是确证法,但容易污染仪器。建议先采用ELISA试剂盒初筛,检测为阳性的样品采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)加以确证。     

固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法快速测定猪尿中的赛庚啶

建立了猪尿中赛庚啶的固相萃取-超高效液相色谱串联质谱的测定方法。猪尿样品经酸化,混合型阳离子交换固相柱萃取后,以超高效液相色谱串联质谱测定,外标法定量。本方法的测定线性范围为0.2～5.0μg/L,在0.2、0.4、2.0μg/L低、中、高三个浓度的回收率为80%～120%,批内、批间精密度小于20%。本方法简便、快速、灵敏,经实际样品分析,适用于猪尿中赛庚啶的定量测定和确证。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪牛组织中甲基盐霉素残留量

建立超高效液相色谱-串联质谱法测定猪牛组织中甲基盐霉素残留量。猪、牛组织中残留的甲基盐霉素,经乙腈溶液提取,硅胶固相萃取柱净化,超高效液相色谱-串联质谱法测定,外标法定量。甲基盐霉素在5 ng/mL～250 ng/mL的浓度范围内呈现良好的线性关系,甲基盐霉素在猪、牛肌肉、肝脏、肾脏、脂肪中的检测限均为2.5μg/kg,定量限均为5.0μg/kg,猪牛肌肉、肝脏、肾脏、脂肪中5.0 ng/g～100 ng/g添加浓度范围内的回收率均值为71.9%～88.4%,批内批间RSD值均<15%。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定原料乳中苯并咪唑类药物

建立了超高效液相色谱—串联四级杆质谱法测定原料奶中苯并咪唑类药物残留量的检测方法。原料奶经乙酸乙酯提取,MCX固相萃取柱净化,用UPLC-MS/MS进行检测。色谱条件为：色谱柱为ACQUITYUPLCTMBEHC18柱（2.1 mm×100 mm,1.7μm）;流动相为：乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min。采用ESI正离子模式,多反应监测（MRM）模式检测,外标法定量。本方法检测测苯并咪唑类药物残留的检测限为0.5μg/kg,定量限为1.0μg/kg。     

猪肉及组织中β-受体激动剂UPLC-MS/M检测方法研究

超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测猪肉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇3种β-受体激动剂残留方法.选用盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶水解,混合型阳离子交换固相萃取净化,以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液-甲醇为流动相,超高效液相色谱串联质谱法检测,在1.0、5.0、10μg/kg浓度添加水平,空白肌肉组织中3种药物添加平均回收率范围84~95%,标准偏差3.6~8.1%.该方法检测限为0.1μg/kg,定量限为0.3μg/kg,具有准确敏感特性.     

猪可食性组织中加米霉素残留量的UPLC-MS/MS检测方法研究

建立一种可靠、快速、灵敏的超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)用于猪可食性组织中加米霉素残留量的检测方法。猪可食性组织(肌肉、皮脂、肝脏、肾脏)经绞碎、均质后,用乙腈提取,MCX固相萃取柱净化,Acquity UPLC BEH C_(18)色谱柱梯度洗脱,在电喷雾正离子(ESI+)下选用多反应监测(MRM)模式进行待测物的分析,内标法定量。该方法的检测限(LOD)与定量限(LOQ)分别为2μg·kg~(-1)和5μg·kg~(-1);待测物加米霉素在2~600μg·kg~(-1)的浓度范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系(r2>0.99);加米霉素在猪肌肉、皮脂、肝脏、肾脏组织中的添加回收率为86.8%~107.4%,日内精密度及日间精密度<16.5%。本研究建立了猪可食性组织中加米霉素残留量检测的制样和超高效液相色谱-串联质谱检测方法,适用于猪可食性组织中加米霉素残留量的测定。     

动物尿液中盐酸克仑特罗残留检测LC-MS/MS法探讨

本文在参考国内外文献的基础上,对高效液相色谱串联质谱法测定猪尿中盐酸克仑特罗残留进行了探讨,建立了快速测定动物尿液中盐酸克仑特罗的高效液相色谱串联质谱检测法。用移液枪准确吸取1.00 m L样品于50 m L离心管中,加入10 m L乙腈水,涡旋混合后超声。取样液过固相萃取小柱,用玻璃小管收集,移出至黑色带刻度离心管,再用45℃水浴氮吹至吹干。最后用1.00 m L流动相溶解定容,充分涡旋混合,过膜后上UPLCMS/MS测定,建立了猪尿中盐酸克仑特罗残留的高效液相色谱串联质谱检测方法。具有良好的线性关系,相关系数r=0.999 86;加标回收试验的变异系数及回收率范围等结果满足GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》的要求。本试验方法前处理过程简便、快捷、易操作,LC-MS/MS及流动相梯度等一系列的条件设置合理,经LC-MS/MS打碎后的定性定量离子辨识度高,有较高的响应,测得检出限可满足检测需求,验证结果具有较好的精密度和准确度,可用于猪尿中盐酸克仑特罗残留检测[1]。     

苯乙醇胺A被农业部列为饲料中违禁添加物

<正>近日,苯乙醇胺A(又称:克伦巴胺)已被农业部第1519号公告列为"禁止在饲料和动物饮水中使用的物质"。此前,还研制了《饲料中苯乙醇胺A的测定高效液相色谱-串联质谱法》和《饲料中苯乙醇胺A的测定高效液相色谱法》等检测方法标准,已分别由农业部1486号公告和四川省地方标准发布并实施。     

猪排泄物中恩诺沙星和环丙沙星含量的HPLC检测方法

为了对猪排泄物中恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)和环丙沙星(ciprofloxacin,CIP)进行定量检测,试验建立了测定猪粪尿中ENR和CIP含量的高效液相－荧光检测方法。将猪粪经乙腈－氨水超声提取后,加入三氯乙酸酸化,然后分别将经磷酸酸化后的猪尿和提取后的猪粪溶液经固相萃取小柱富集净化,取净化液进行HPLC分析。HPLC流动相为乙腈(A):柠檬酸/乙酸铵缓冲液(B),梯度洗脱:0~25 min,A 10%~40%;25~30 min,A 40%至10%,荧光检测器的激发波长278 nm,发射波长465 nm。结果表明,ENR和CIP 在尿中的最低检测限(LOD)<0.01 mg/L,在粪中的LOD<0.021 mg/kg,在尿中的最低检测限(LOQ)<0.03 mg/L,在粪中LOQ<0.056 mg/kg,猪尿中的ENR和CIP在0.01~1.0 mg/mL范围内线性关系良好,R²分别为0.9994和0.9992;猪粪中的ENR和CIP在0.02~2.0 mg/mL范围内线性关系良好,R²分别为0.9986和0.9981。ENR在猪粪和猪尿中的回收率分别为79.4%和88.5%,CIP在猪粪和猪尿中的回收率分别为75.8%和89.9%。该方法样品处理简单,检测结果准确可靠,且灵敏度较高,是值得推广的检测方法。     

Method for Determination of Enrofloxacin and Ciprofloxacin in Pig Excreta by HPLC

A HPLC-FLD method was developed for determination of enrofloxacin (ENR) and ciprofloxacin (CIP) levels in feces and urine of pig.The pig feces was ultrasonic extracted by acetonitrile-ammonia, then added trichloroacetic acid to make the extraction acidification.The pig urine was acidulated by phosphoric acid and the extraction of feces solution were enriched and purified by solid phase extraction small column, took purification liquid for HPLC analysis.Conditions of HPLC mobile phase was acetonitrile (A):citric acid/ammonium acetate buffer (B), the procedure of gradient elution was 0 to 25 min, A:10% to 40%;25 to 30 min, A:40% to 10%.The detector of fluorescence excitation wavelength was 278 nm, emission wavelength was 465 nm, chromatographic data were measured and recorded.The results showed that the LOD of ENR and CIP were lower than 0.01 mg/L in urine and 0.021 mg/kg in feces, the LOQ of ENR and CIP were lower than 0.03 mg/L in urine and 0.056 mg/kg in feces.ENR and CIP in the concentration of 0.01 to 1.0 mg/mL levels range had good linear relationship, R² were 0.9994 and 0.9992 in pig urine, respectively;ENR and CIP in the concentration of 0.02 to 2.0 mg/mL levels range had good linear relationship, R² were 0.9986 and 0.9981 in pig feces, respectively.The recovery ratio of ENR were 79.4% and 88.5%, and the recovery ratio of CIP were 75.8% and 89.9% in pig feces and urine.After get on validation, the method was easy in sample processing and testing, the results were accurate, reliable and high sensitivity, which was a worth promoting detection method.     

猪尿中6种β-受体激动剂残留的超高效液相色谱-串联质谱法同时测定

建立了猪尿中苯乙醇胺A、莱克多巴胺、克仑特罗、西马特罗、特布他林、沙丁胺醇等6种β-受体激动剂在多反应监测模式下超高效液相色谱．串联质谱同时检测的方法。尿样经酶解,调至酸性,经固相萃取技术（SPE）净化富集。6种受体激动剂在0．2-5ng／mL的浓度范围内线性关系良好。方法的检出限和定量限分别为0．2ng／mL和0．5ng／mL。考察了0．5ng／mL、1ng／mL和2ng／mL三个添加浓度的回收率。6种化合物的加标回收率为87．2％-106．6％：RSD为1．2％-13．8％。该方法精密度好,灵敏度高,重现性好,能简便、快速、准确地测定猪尿中六种β-受体激动剂。     

Identification of hydroxyropivacaine glucuronide in equine urine by ESI+/MS/MS.

Ropivacaine is a local anesthetic that has a high potential for abuse in racing horses. It can be recovered from urine collected after administration as a hydroxylated metabolite following beta-glucuronidase treatment of the urine. Based on these findings, it has been inferred that ropivacaine is present in equine urine as a glucuronide metabolite; however, these metabolites have never been directly identified. Using ESI+/MS/MS, the presence of a [M+H]+ molecular ion of m/z 467 was demonstrated in urine corresponding to the calculated mass of a hydroxyropivacaine glucuronide +1. The abundance of this ion diminished after glucuronidase treatment with concomitant appearance of a m/z 291 peak, which is consistent with its hydrolysis to hydroxyropivacaine. In further work, the m/z 467 material was fragmented in the MS/MS system, yielding fragments interpretable as hydroxyropivacaine glucuronide. These data are consistent with the presence of a hydroxyropivacaine glucuronide in equine urine and constitute the first direct demonstration of a specific glucuronide metabolite in equine urine.     

固相萃取-液相色谱串联质谱法测定猪尿中的巴氯芬

为了建立用固相萃取-液相色谱串联质谱法测定动物尿液中巴氯芬药物残留的检测方法,试验采用叔丁醇-叔丁基甲醚对猪尿样品进行提取,提取液经混合型阳离子固相萃取小柱（MCX）净化、富集后,以液相色谱串联质谱测定,外标法定量。结果表明,该方法检出限为0.2 ng/mL,定量限为0.8 ng/mL,巴氯芬在0.8~20 ng/mL的添加浓度范围内线性良好,线性相关系数大于0.9997,在低、中、高（0.8、1.6、5.0 ng/mL）三个浓度的添加水平回收率在80%~120%之间,批内、批间精密度均小于10%。该方法灵敏度高,定性、定量准确,可用于猪尿中巴氯芬药物残留的定性、定量检测。     

超高效液相色谱测定猪配合饲料中苯乙醇胺A的研究

研究建立了超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)—二极管阵列检测器(PDA)测定配合饲料中苯乙醇胺A的方法。通过应用0.1%甲酸甲醇溶液提取、混合阳离子固相萃取净化及样品基质校正外标定量方法进行测量。在优化条件下,苯乙醇胺A在0.1~20.0 mg/kg浓度范围内线性关系良好,线性相关系数(R²)达到0.9945;在1.0、5.0、10.0 mg/kg等不同添加浓度下,方法回收率高于90.36%,变异系数低于5.98%;方法检测限为0.06 mg/kg,定量限为0.10 mg/kg。结果表明,该方法灵敏度高、精密度好、准确可靠且操作简单,能够满足配合饲料中苯乙醇胺A的测定需要。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测猪尿中20种β-受体激动剂残留

建立了猪尿中吡布特罗、西马特罗、特步他林等20种β-受体激动剂残留检测的超高效液相色谱一串联质谱方法。猪尿样品经酶解后,调节pH值至碱性,用叔丁醇和叔丁基甲醚（6＋4,V／V）萃取,MCX柱净化,以0．1％甲酸乙腈溶液和0．1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。同位素内标法和外标法定量。20种β-受体激动剂在系列浓度范围内呈现良好线性关系,相关系数1．2均大于0．99;20种药物在猪尿中的检测限为0．25μg/L,定量限为0．5μg／L。从0．5、1和5μg／L三个添加浓度检测结果可以看出,20种药物的回收率为75．7％～110．7％,批内批间相对杯准偏差均小于20％。该方法具有简便快捷、灵敏度高、定性准确等特点。     

GC/MS法研究猪体内盐酸克伦特罗的残留代谢规律

样品用乙酸乙酯提取,盐酸溶液萃取后,再经SCX固相萃取柱净化,50℃水浴中氮气吹干后衍生化。以气相色谱-质谱选择86、212、262、277四个碎片离子进行定性定量分析。盐酸克伦特罗在0.01～2.0 mg/L成线性（R2为0.999）,猪肉中3种不同添加浓度0.01、0.10和0.20mg/kg下克仑特罗平均回收率分别为88.31%、92.85%、93.97%,相对标准偏差分别为5.26%、7.58%、4.59%,样品中最低检测限（S/N=3）为0.1 ug/kg。应用该方法研究了克仑特罗在猪体内的消除并初步探讨其代谢机理。结果表明,在饲喂浓度（3 mg/kg）1个月后,猪体内盐酸克伦特罗蓄积量不算太高,最高蓄积浓度为493.59 ug/kg,而且停药后代谢又非常快。     

兰州百合鳞片组织培养研究

以兰州百合的内层鳞片为外殖体,以MS为基本培养基并添加不同配比生长调节剂,进行组织培养研究。结果表明,以MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基对初代培养形成不定芽最佳,低温有助于外殖体分化;不定芽增殖最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA;1/2 MS+0.2 mg/L NAA+蔗糖60 g/L适宜苗的生根培养,生根率达100%,且结鳞茎率达73.4%。