广西某集约化猪场猪伪狂犬病的监测及净化

为了解某集约化猪场伪狂犬病病毒（PRV）的感染情况,清除感染猪只,净化伪狂犬病,提高猪群的健康水平.采用PRV gE抗体ELISA检测试剂盒,对该场免疫了猪伪狂犬病基因缺失疫苗的猪群进行3次野毒感染检测;应用荧光PCR方法,对临床发病的仔猪进行PRV病原检测.经过动态监测、加强综合防控和逐步淘汰措施,该猪场的PRV野毒感染率从35.29％逐步降低至0％,猪场自繁的仔猪存活率高,无PRV感染,净化效果良好.     

伪狂犬病毒感染ST细胞的增殖抑制及对细胞周期的影响

以猪伪狂犬病毒(PRV)容A株感染体外培养的ST细胞为模型,采用体外细胞培养技术、噻唑蓝(MTT)还原法、流式细胞计数检测梯度剂量的PRV病毒感染ST细胞株过程中细胞的增殖抑制及对细胞周期的影响.结果显示,PRV感染前期(8h和16h)促进ST细胞的增殖,24h以后可显著抑制细胞增殖,这种抑制与时间密切相关,与感染剂量无显著相关.PRV感染ST细胞可显著地改变细胞周期各时相分布,24 h时细胞G1、S期所占比例明显升高,48 h细胞停滞在G2期,出现明显的凋亡峰.结果表明,PRV在感染过程中对细胞生长的影响与时间紧密联系,最终可显著使细胞停滞在G2期,诱发细胞调亡.     

猪Beclin1基因调控伪狂犬病病毒诱导细胞自噬和凋亡的机制分析

旨在研究伪狂犬病病毒(PRV)感染后细胞自噬和凋亡情况,进一步分析鉴定PRV感染条件下与Beclin1互作的猪宿主凋亡家族蛋白。利用免疫印迹(WB)方法检测PRV感染细胞的自噬水平;利用流式细胞术探讨凋亡水平;最后利用免疫共沉淀试验分析PRV感染PK-15细胞中Beclin1与Bcl-2和Bcl-xL的结合水平。结果显示,PRV感染导致LC3-Ⅱ的表达明显增多,而P62显著下降,且AKT(S473)磷酸化水平显著减少;其次,PRV感染诱导细胞凋亡且显著上调剪切型Caspase-9/8的表达水平;最后,免疫共沉淀结果显示PRV感染条件下Beclin1能与Bcl-2和Bcl-xL结合,但结合的水平明显降低。PRV感染诱导的细胞自噬可能依赖于PI3K-Ⅰ/AKT信号通路,PRV感染可能同时激活了线粒体凋亡途经和死亡受体途经从而诱导细胞凋亡,而PRV感染诱导的细胞自噬和细胞凋亡可能通过抑制Beclin1和Bcl-2、Bcl-xL结合而相互关联。     

伪狂犬病毒人工感染小鼠模型的建立

为建立伪狂犬病毒(PRV)人工感染小鼠的模型,本研究采用PRV强毒株接种猪、羊及小鼠,疫苗株接种小鼠,应用组织病理技术观察PRV人工感染不同动物导致的组织病变。以1×102~4.5×104TCID50不同梯度剂量PRV强毒株通过滴鼻或皮下接种途径人工感染小鼠,6×104~2.7×105TCID50不同剂量疫苗株皮下接种小鼠,统计各人工感染剂量下小鼠存活率。感染PRV动物脑部病理切片经苏木素-伊红(HE)染色观察,结果显示PRV强毒株及疫苗株接种小鼠后与PRV感染猪、羊后出现相似病理变化,均可导致炎性细胞的浸润及大脑实质内小胶质细胞的增殖。免疫组化染色表明PRV可以感染小鼠脑组织。本研究最终采用小鼠作为实验动物,应用PRV疫苗株,采用1×105TCID50剂量通过皮下注射接种小鼠,在接种后6 d观察病变。该实验模型为进一步研究PRV感染小鼠后的天然免疫机制提供了实验依据。     

猪伪狂犬病抗体检测与分析

为了调查湖北省规模化猪场猪伪狂犬病病毒(PRV)免疫抗体水平和野毒感染情况,试验应用猪PRV gB和PRV gE抗体ELISA检测试剂盒对采集的湖北省11个市(州)的16个规模化猪场的1 109份血清样品按照不同猪场、不同地区和不同生长阶段三个方面进行了PRV gB和PRV gE抗体的检测(包括阳性数和阳性率),并对检测结果进行统计分析。结果表明:被检测的16个猪场中有12个为野毒阳性感染场,占比为75%。在不同猪场,PRV gB阳性样品数为953份,阳性率为85. 93%; PRV gE阳性样品数为223份,阳性率为20. 11%; PRV gB抗体阳性率与PRV gE抗体阳性率呈显著负相关。在不同地区,PRV gB抗体阳性率最高的地区为鄂中,为90. 36%; PRV gE抗体阳性率最高的地区为鄂东,为30. 75%。在不同生长阶段,PRV gB抗体阳性率最高的猪为后备母猪,为93. 06%; PRV gE抗体阳性率最高的猪为经产母猪,为30. 38%。     

伪狂犬病病毒免疫及免疫逃逸的几种策略

伪狂犬病(pseudorabies,PR)又称aujeszky,是由疱疹病毒科(herpesviridae)α-疱疹病毒亚科伪狂犬病病毒(PRV)引起的多种家畜、家禽和野生动物的以发热、奇痒(除猪外)、繁殖障碍及脑脊髓炎为主要症状的一种急性传染病.猪是本病的原发感染宿主,又是病毒的长期储存和排毒者.PRV-旦感染猪将在其体内处于长期潜伏状态.为了很好地根除PRV的感染,国内外针对PRV的免疫及免疫逃逸策略进行了深人研究,为PRV疫苗的研制和防疫提供有力的理论依据.     

安徽省规模化种猪场猪伪狂犬病血清学调查

为了解安徽省规模化种猪场猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染情况,采集99个不同规模种猪场血清样品3 344份,用ELISA方法开展PRV抗体血清学调查。结果表明,99个猪场中,66个种猪场PRV gE抗体阳性,阳性率66.67%;检测种猪血清3 344份,PRV gE抗体阳性率为18.96%。12个市的种猪场均有PRV感染的情况,其中滁州市PRV抗体阳性率最高;种猪群规模在200头以下的猪场,猪群PRV抗体阳性率较高,4胎以上的经产的母猪,免疫接种2次的母猪感染率较高,且差异极显著(P0.01)。说明安徽省不同规模种猪场PRV感染相当普遍,疫苗免疫接种并未从根本上消除PRV的隐性感染。     

猪伪狂犬病的临床诊断鉴别要点

伪狂犬病（PR）是由伪狂犬病毒（PRV）又名猪疱疹病毒Ⅰ型引起的多种家畜的急性传染病。除猪以外的其它动物感染发病后,通常具有发热、奇痒、流涕及脑脊髓炎等典型病状,且为致死性感染。猪是PRV的自然宿主和重要传染源。猪感染PRV后其症状因日龄而异。育肥猪多呈隐性感染,仔猪特别是幼龄仔猪感染PRV则表现呕吐、昏睡和神经症状,并引起大批死亡,母猪感染PRV则表现繁殖障碍。     

抗猪伪狂犬病病毒gH抗体的制备及gH在感染细胞中表达分析

为检测伪狂犬病病毒(PRV)在体外细胞中糖蛋白H(gH)的表达情况,本研究构建原核表达重组质粒pET-gHN660,并在大肠杆菌中诱导表达重组蛋白,纯化的gH重组蛋白免疫实验动物制备抗PRV gH抗体,经western blot和IFA检测到病毒感染细胞中gM蛋白的表达,病毒感染细胞后表达的gH蛋白大小为95 ku,定位于细胞浆中,gH蛋白在病毒感染细胞4 h可以检出,随PRV的复制gH蛋白表达增加,gH蛋白可以作为PRV复制的指示蛋白.本研究利用制备的抗体分析感染细胞中gH蛋白的表达情况,初步探讨感染细胞中PRV的复制,为PRV和宿主相互作用的研究奠定基础.     

猪伪狂犬病病毒疑似感染人的实验室诊断及分析

为给人感染伪狂犬病病毒(PRV)来源分析及其感染机理研究提供相关信息，对一例疑似感染PRV患者的血清、脑脊液、拭子及其工作猪场的病猪血清、组织等样品进行病原学、血清学检测及病毒分离，对其工作猪场开展流行病学调查，并采集患者同事血清样品进行PRV抗体检测。结果显示：病人样品经数字PCR检测均为PRV核酸阳性；病人发病后5～90 d内的血清样品均为PRV gB抗体阳性，gE抗体发病后18 d转为阳性并一直持续到发病后90 d；病人同事均未表现临床症状，其血清样品PRV gB抗体阳性率为22.2%,gE抗体均为阴性；从病人工作猪场的病猪样品中分离到PRV，且样品经荧光定量PCR核酸检测及ELISA抗体检测均检出阳性；病人工作猪场为PRV阳性场，病人及PRV gB抗体阳性同事均有直接接触病猪史。结果表明，患者感染的PRV来自其工作猪场猪群的可能性较大，人感染后表现出和动物感染相似的抗体消长规律。PRV对公共卫生的影响及其感染机制需进一步关注和研究。