猪瘟野毒感染抗体阻断ELISA检测方法的建立与初步评价

以猪瘟野毒E2蛋白为包被抗原、辣根过氧化物酶标记的猪瘟野毒单抗作为酶标抗体,建立检测猪瘟野毒抗体的阻断ELISA方法。猪瘟野毒E2最适包被浓度为0.03μg/mL,待检血清最适稀释度为1∶4,酶标猪瘟野毒单抗稀释度为1∶1 000。用建立的阻断ELISA方法检测369份临床阴性血清,计算阻断率,确定临界值,阻断率>40%为猪瘟野毒抗体阳性,阻断率≤40%为猪瘟野毒抗体阴性。用建立的ELISA方法检测84份血清,其中78份为免疫猪瘟疫苗的血清,6份为猪瘟病毒感染血清。结果显示,78份免疫血清均检测为猪瘟野毒抗体阴性,6份猪瘟感染血清均检测为猪瘟野毒抗体阳性。因此可初步判定该方法可用于鉴别诊断猪瘟病毒自然感染动物和C株疫苗免疫动物的血清抗体,并为临床检测猪瘟野毒抗体提供便捷、快速,精准的检测工具,对猪瘟的临床诊断、预防以及猪瘟净化工作具有非常重要的参考意义。     

应用三种方法筛选猪瘟抗体阴性猪的比较试验

为了寻找筛选猪瘟抗体阴性猪更简便的方法,本试验应用猪瘟中和试验(SN)、阻断ELISA和正向间接血凝(IHA)三种方法分别对170份未经猪瘟活疫苗免疫的仔猪血清进行猪瘟抗体检测。结果显示,SN、ELISA和IHA检测出的猪瘟阴性血清分别为144份、150份和131份,表明三种检测方法有较好的符合率,其中SN与ELISA的检测符合率为90.59%,SN与IHA的检测符合率为82.94%,而ELISA法与另两种方法比较阴性符合率最高。本结果表明,ELISA法具有较高的敏感性,适合应用于猪瘟活疫苗安全检验抗体阴性猪的筛选。     

猪瘟病毒阳性血清的猪瘟抗体检测与分析

为掌握猪瘟病毒阳性血清的猪瘟抗体水平分布情况,应用美国IDEXX公司的猪瘟病毒抗体检测试剂盒对江苏省农业科学院动物疫病诊断检测中心临床门诊近期收集的经PCR检测为猪瘟病毒阳性的26份血清进行猪瘟抗体水平的检测,以期为猪场猪瘟的有效防控提供科学数据参考。结果显示:猪瘟抗体阳性率为26.9%,阴性率为57.7%,可疑率为15.4%,抗体阻断率平均值为28.0%,且78.6%的猪瘟抗体阴性血清阻断率小于10%,即不同猪瘟抗体水平的血清均可检出猪瘟病毒,但猪瘟抗体阻断率小于10%的血清所占比例最大,达42.3%。因此,猪场在日常的猪瘟抗体检测中,如果发现猪瘟抗体阻断率小于10%的猪只所占比例越大,则预示着猪群中猪瘟带毒的比例越高。     

2018年新疆部分地区规模化猪场猪瘟病毒抗体检测与分析

为了解2018年新疆部分地区猪瘟病毒抗体水平,笔者采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法对采自7家规模化猪场不同日龄猪的321份血清样品进行猪瘟抗体检测与分析。结果显示,猪瘟病毒抗体平均阳性率为84.11%(270/321),高于国家规定标准(70%),平均阻断率为66.60±24.44。各猪场间猪瘟病毒抗体水平差异极显著。各日龄段猪群抗体的阳性率在60%～100%之间,存在一定差异。保育猪阳性率最低(为60%),且低于国家规定标准(70%),其他各日龄段猪群抗体的阳性率均在80%以上。结果表明,在新疆地区7个规模化猪场中,有6个猪场的猪瘟病毒抗体阳性率能达到国家标准(70%),但离散度普遍较高,需要制定更加合理的免疫程序。     

3种猪瘟抗体检测试剂盒的比较与分析

为掌握3种猪瘟病毒抗体检测试剂盒的优缺点,本研究应用IHA、间接ELISA、阻断ELISA试剂盒分别对67份猪血清样品进行检测,结果显示IHA、间接ELISA、阻断ELISA分别检测出阳性样品48份、56份、59份,阳性率分别为71.64%、83.58%、88.06%,与中和试验的符合率分别为89.55%、92.53%、94.03%。结果表明IHA灵敏度稍低,对血清质量要求高,但检测快速、操作简单及无需特殊仪器设备,适合个体检测和基层实验室使用;间接ELISA和阻断ELISA敏感性高、通量高,但对操作人员有专业水平要求、需要酶标仪,适合对畜群检测和一般实验室使用。     

非洲猪瘟病毒p72蛋白阻断ELISA检测方法的建立

本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白阻断ELISA抗体检测方法。以纯化的重组p72蛋白作为包被抗原,HRP标记的6E5抗体作为阻断抗体,通过对反应条件进行优化,建立了基于ASFV p72蛋白的阻断ELISA方法。用建立的阻断ELISA方法检测119份临床阴性血清,计算血清阻断率确定临界值,确定了该方法的判定标准：当阻断率PI≥50%时判定为ASFV抗体阳性;PI≤40%时判定为ASFV抗体阴性;当阻断率介于两者之间时,判定为可疑。该方法与猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、A型塞内卡病毒、猪口蹄疫病毒、猪大肠杆菌、猪多杀性巴氏杆菌、副猪格拉瑟菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的抗体阳性血清无交叉反应,批间、批内试验的变异系数均小于15%。用该方法与商品化ASFV抗体检测试剂盒同时检测447份猪临床血清样品,两种方法的相对敏感性和相对特异性分别为95.3%和94.5%,符合率为94.9%。本研究建立的阻断ELISA方法具有较高的敏感性和良好的特异性,可用于ASFV感染诊断和流行病学调查。     

应用Kappa法检验IHA和ELISA在检测猪瘟抗体中的一致性

[目的]比较IHA和ELISA 2种基层使用较广泛的猪瘟抗体检测试剂盒检测结果的一致性。[方法]用产品A(IHA)和产品B(ELISA)对237份猪血清进行抗体检测,分别计算阳性率、阳性一致性、阴性一致性、符合率,并进行Kappa检验。[结果]产品B检测的阳性率(73.8%)高于A(67.1%),且有统计学意义(p<0.01)。2种试剂盒共同检出128份猪瘟抗体阳性和31份阴性,阳性一致性为80.5%(95%置信区间:74.3%-86.7%),阴性一致性为39.7%(95%置信区间:28.9%-50.6%),符合率67.1%(95%置信区间:61.1%-73.1%);Kappa值为0.214(95%置信区间:0.088-0.339)。[结论]2种试剂盒的检测结果阳性率有差异,结果一致性强度为弱。     

某规模化猪场猪瘟抗体水平及其野毒感染的检测与分析

为了解某规模化猪场后备种猪群猪瘟野毒感染情况和猪瘟抗体免疫状况,研究分别采用荧光抗体技术和阻断ELISA方法对该场825份猪扁桃体样品和825份血清样品进行了猪瘟病毒和猪瘟抗体检测。结果表明:猪瘟病毒阳性率为2.06%(17/825),猪瘟抗体阳性率为86.06%(710/825),抗体离散度为33.02%。说明该场后备种猪群的猪瘟免疫情况较理想,猪瘟病毒阳性率较低,并且猪瘟抗体免疫合格率较高,但抗体离散度偏高。分析猪瘟抗体水平和感染猪瘟野毒之间的相互关系可知,无论猪瘟免疫抗体水平是否合格,均有可能感染猪瘟野毒,但感染率随着猪瘟抗体阻断率的升高而逐渐降低。     

猪流行性腹泻病毒N蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

旨在建立一种猪流行性腹泻病毒(PEDV) N蛋白阻断ELISA抗体检测方法。本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原,通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验。对140份临床血清样品进行检测,并将检测结果与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒试剂盒进行比较。结果显示,建立的阻断ELISA方法的抗原最佳包被浓度为625 ng·mL^-1,血清最佳稀释比例为1∶1;酶标抗体的最佳工作浓度为1∶5 000;检测健康猪血清以及猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等常见猪病病原的阳性血清,均无交叉反应;PEDV阳性血清的灵敏度为1∶16,与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒(效价1∶32)的敏感性相当;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,说明具有良好的重复性和稳定性;对140份临床血清样品的检测并与商品化试剂盒检测结果进行比较,两者的kappa值为0.87,为高度一致。综上表明,本研究建立的阻断ELISA抗体检测方法可以应用于PEDV的防控、流行病学调查以及疫苗免疫后抗体水平的监测。     

应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平的探讨

为了解应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测犬狂犬病抗体水平的效果,对东莞市采集的54份犬血清应用ELISA进行检测,采用Synbiotics软件进行分析,同时将该批血清送至军事医学科学院军事兽医研究所作荧光抗体病毒中和试验(FAVN)比较.ELISA检出阳性数35份,阳性率为64.82%,与军事医学科学院军事兽医研究所的测定结果差异不显著,符合率为85.19%.证明应用ELISA检测犬狂犬病抗体水平定性检测具有较高的准确率,适合在短时间内监测大批量的血清样品.     

抗体在动物医学中的研究进展

自抗体被发现以来，人们有计划地对抗体基因序列进行改造，使抗体及其相关产品在多种动物疾病诊断和治疗中发挥着重要的作用。抗体工程技术随着现代生物技术的发展而不断发展，将在动物医学领域占有越来越重要的地位。     

兽用抗体制品制造技术与应用

重点介绍了目前我国兽用抗血清、卵黄抗体和单克隆抗体等方面的发展情况,并以实例对制品的理论、制造技术和应用作以简要说明。     

基因工程小分子抗体及其在动物疾病研究中的应用

利用基因工程方法构建的小分子抗体,不仅具备亲本抗体可与抗原特异性结合的特征,更因其分子量小、组织穿透性强、免疫源性低、血液清除快、可经济方便地生产等优点在疾病的诊断和治疗中凸显出重要价值。文章对基因工程小分子抗体结构、抗体功能、在动物疾病研究中的应用等方面的进展情况进行了简要综述。     

单克隆抗体研究进展

杂交瘤技术使鼠源单克隆抗体被广泛用于人类疾病的诊断和研究,建立了治疗性抗体的第一个里程碑。随着生物学技术的发展和抗体基因结构的阐明,应用DNA重组技术和抗体库技术对鼠单抗进行人源化改造,先后出现了嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体,它们从不同角度克服了鼠单抗临床应用的不足,使抗体制备技术进入了一个全新的时代。     

Development and validation of an improved enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of thyroglobulin autoantibodies in canine serum samples

An enzyme-linked immunosorbent assay to detect thyroglobulin autoantibodies (TGAB) in canine serum was developed and validated. The test result for each sample was derived from the optical density readings (OD) and expressed as an Ab-score(%) calculated from three in-house calibrators. The assay specifically detected TGAB as judged from lack of response in the assay after samples had been incubated with specific antigen. Intra- and interassay coefficients of variation ranged from 2.0–4.9% and 4.6–9.9%, respectively. The detection limit, an Ab-score of 5.6%, was close to the median Ab-score of 10% observed in healthy dogs (n = 132). The median Ab-score of dogs with primary hypothyroidism and lymphocytic thyroiditis (n = 11), skin diseases (n = 35), and non-thyroidal diseases (n = 63) was 340%, 12%, and 8%, respectively. The prevalence of TGAB in hypothyroid dogs with lymphocytic thyroiditis (sensitivity) was 91% (95% confidence limits: 59%–99%). In dogs with dermatological diseases without lymphocytic thyroiditis the prevalence of TGAB was 3% corresponding to a specificity of 97% (95% confidence limit: 85%–100%). In dogs with non-thyroidal diseases and healthy dogs the prevalence of TGAB was 5% and 6%, respectively. The diagnostic accuracy of serum TGAB was evaluated by subjecting the data from 11 dogs with lymphocytic thyroiditis and 35 control dogs without lymphocytic thyroiditis to receiver-operating characteristic curve analysis. The area under the receiver-operating characteristic curve (W = 0.966; 95% confidence limit 87%–100%) was significantly higher than that of a worthless test (0.5) (P < 0.0001), thereby indicating that serum TGAB measurements distinguished between dogs with and without lymphocytic thyroiditis.     

鸡抗大肠杆菌血清抗体和卵黄抗体变化规律研究

用猪源大肠杆菌四价(K88、K99、987P、F41)灭活疫苗免疫蛋鸡,微量凝集法定期检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体的效价。结果表明,血清抗体比卵黄抗体出现早,免疫蛋鸡血清中和卵黄中4种抗体的消长规律基本相似,但不同抗体水平之间存在明显的差异,整个试验期间血清抗体水平均比卵黄抗体水平高。     

基因组单核苷酸多态性图谱构建方法研究进展

为了获得高质量的金标孕酮单抗，通过采用柠檬酸三钠还原法，制备出符合要求的30 nm胶体金溶液，在此基础上摸索胶体金标记孕酮单克隆抗体的最佳条件，并对其进行质量鉴定。结果发现，用柠檬酸三钠还原法制备的30 nm胶体金溶液呈深红色，透射电镜观察，胶体金颗粒大小基本一致；胶体金标记孕酮单克隆抗体的最低稳定浓度为16 μg/mL，最适稳定浓度为19.2 μg/ mL，最适标记pH为8.5。制备的金标抗体复合物经电镜观察，周围有一层明显的低电子密度晕圈，且其D_{520 nm}值在0.2~0.4之间。     

体液免疫在鸡球虫感染中的作用

球虫感染后可诱发宿主产生保护性免疫反应 ,其中体液免疫在抗球虫免疫中发挥着不可忽视的作用。球虫感染鸡后可很快检测到循环抗体。初次感染IgM出现最快 ,2次感染可产生高水平的IgG ,且持续时间也较长 ,提示IgG在球虫 2次感染中起着主导作用。黏膜免疫是体液免疫的重要组成部分 ,即产生分泌型IgA。研究发现高浓度IgA与小肠中子孢子复活率降低相关。母源抗体可抑制球虫感染雏鸡 ,雏鸡体内母源抗体水平与其抗球虫感染的变化具有高度一致性。作者对体液循环抗体、分泌型抗体以及母源抗体在球虫保护性免疫中的作用进行全面系统的综述 ,旨在为防制球虫病提供重要的科学依据     

应用单克隆抗体鉴别鼻疽和类鼻疽血清抗体的研究

应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了2个类鼻疽菌的McAbs。特异性实验结果表明,这些McAb仅同类鼻疽菌反应,而与包括鼻疽菌在内的其它细菌不发生反应。应用其中的一个McAb—3Al,以ELISA抑制试验检测了49份鼻疽血清和16份类鼻疽血清,结果发现,McAb 3Al的类似抗体是类鼻疽血清的特异性抗体,以此可使两病的血清学诊断得到明确的鉴别。     

Indirect fluorescent antibody techniques for demonstration of trout viruses and corresponding antibody

Two variations of the indirect fluorescent antibody technique (FAT) have been utilized in the work concerning two important virus diseases of trout, viral haemorrhagic septicaemia (VHS) and infectious pancreatic necrosis (IPN). A “two layer” indirect FAT allowed demonstration of the respective viruses in cell cultures and a “three layer” indirect FAT allowed demonstration of trout antibody to the viruses. Antibody, by means of the latter technique, could be demonstrated only in artificially immunized trout.