饲料中盐酸克伦特罗酶联免疫吸附测定法的现状

盐酸克伦特罗(CL)，商品名为瘦肉精、克喘素等，是一种人工合成的选择性β-肾上腺素受体激动剂，临床用于防治支气管哮喘和支气管痉挛。CL在饲料中使用，可显著提高瘦肉率，促进肌肉生长。从20世纪80年代国外开始使用，我国从90年代后期也开始在饲料中添加，它的添加给经营者带来了巨大的利润。但是，随着CL在畜牧生产中的应用，人们很快发现，动物食用后会在内脏和组织中形成蓄积性残留，人们食用了含有这些药物的动物组织会产生严重的毒副作用，如血压升高、血管扩张、心跳加快、呼吸加剧、体温升高、肌肉颤抖，也会产生头痛、胸闷、神经过敏、肌肉疼痛、心悸、恶心、呕吐等症状；更为严重的是它可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏．四肢、脸、颈部骨骼肌震颤；另外还会引起代谢紊乱。     

猪尿中克伦特罗检测方法--酶联免疫吸附测定法

农业部于2001年11月1日发布农牧发[2001]38号文，发布10种动物源食品中兽药残留检测方法。方法之十：猪尿中克伦特罗检测方法——酶联免疫吸附测定法。全文如下：猪尿中克伦特罗检测方法——酶联免疫吸附测定法1范围本标准规定了猪尿中克伦特罗检验的制样和酶联免疫吸附测定方法。本标准适用于猪尿中克伦特罗的残留常规快速筛选检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是…     

胶体金法与ELISA法检测盐酸克伦特罗的比较试验研究

[目的]本试验通过研究胶体金法与ELISA法在检测猪尿中盐酸克伦特罗的应用，得出两种方法在目前盐酸克伦特罗快速检测中结合使用的可能，从而在保证检测灵敏度和特异性的前提下，大大提高检测速度，并以此为基础建立一个不同于以前的监管模式。[方法]采用胶体金法和酶联免疫法(ELISA)进行比较。[结果]快速检测试纸条的灵敏度为5ng／nd，共检测442份猪尿样品，ELISA阳性7份，阳性率1．6％，胶体金阳性9例，阳性率2％；假阳性率为O．5％，符合率为99．5％；并可应用在宰后猪尿、猪肝检测中。【结论】胶体金法检测盐酸克伦特罗，具有操作简便、观察直观、快速、省时，其特异性、敏感性均达到ELISA水平；可作为饲养场、生猪中转站、屠宰场、菜市场筛查盐酸克伦特罗的重要手段，具有重要意义。     

生猪尿液中盐酸克伦特罗残留测定方法——酶联免疫吸附测定法

通过酶联免疫反应测定尿液中盐酸克伦特罗的含量。该方法适用于猪尿中盐酸克伦特罗残留的常规快速筛选检测。     

猪尿液中盐酸克伦特罗残留的ELISA法和GC-MS法检测

克伦特罗(Clenbuterol，CL)，是一种人工合成的β2-肾上腺素受体激动剂。其药理作用为松弛支气管平滑肌、增加肺活量、降低气道阻力、增强支气管纤毛运动和促进痰液排出，临床上常用于防治哮喘、肺气肿等呼吸系统疾病。但当其应用剂量达治疗量的5～10倍时，CL可增强肌肉发育，降低脂肪沉积，因此又称为“瘦肉精”，常被作为饲料添加剂非法用于肉用动物的生产之中。更为重要的是，由于CL在动物体内吸收快，分布广，脂溶性高，具有残留性积累和半衰期长等药理特性。人在食用残留CL肉品后引起的中毒事件不断发生。因此，各国政府都禁止CL作为饲料添加剂用于肉用动物的生产中，我国政府也规定严禁在饲料中添加CL。同时制订了CL的最高残留限量标准。为了建立快速、敏感、特异、快速的CL免疫检测方法，本研究应用ELISA法和GC-MS法对照检测饲喂盐酸克伦特罗育肥猪的尿液样品，以确证盐酸克伦特罗快速检测ELISA试剂盒的精确性和稳定性。     

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制

研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,以用于对猪尿中盐酸克伦特罗的检测。以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸条。如待测尿样中无盐酸克伦特罗,则金标抗体能顺利地与固相载体结合,形成肉眼可见的红色带;如待测尿样中含有盐酸克伦特罗,则与金标抗体以同样的机会与固相载体结合,竞争性地占去了金标抗体与固相载体结合的机会,使金标抗体与固相载体的结合量减少,无法形成肉眼可见的红色带。经过试验制成了可检测出猪尿样中盐酸克伦特罗浓度为2 ng/mL的试纸条,可在8 min完成测试,肉眼即可判断;该试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备,具有敏感、特异、快速、简便的特点,适用于现场快速检测和筛选工作。     

饲料中盐酸克伦特罗快速测定-酶联免疫吸附测定方法

盐酸克伦特罗(clenbuterol)，商品名称为克喘素、息喘宁、舒喘宁、平喘素、安喘素、瘦肉精等，是一种人工合成的选择性β2-肾上腺素受体激动剂。临床用于防治支气管哮喘和支气管痉挛，且具有调节动物神经兴奋及其体内营养素重分配的功能。70年代美国人将之作为“促生长剂”和“营养重分配剂”引入禽畜生产，确实起到了改善动物肉质品质，     

对304份猪尿样中盐酸克伦特罗的快速筛选检测报告

为了摸清湖北某市屠宰生猪盐酸克伦特罗（瘦肉精）的残留情况，我们于2005年4月至2006年12月间，在该市城区3家定点屠宰场和该市下辖的1个县屠宰场，分18个批次，共计取样304份，用酶联免疫吸附法（EUSA）进行了快速筛选检测，按照大于1μg／L作为阳性的判定标准，总阳性率达到18．75％。     

ELISE测定猪尿、猪肝中克伦特罗残留的研究

ELISA(酶联免疫吸附法)测定猪尿、猪肝中违禁药物克伦特罗残留量影响实验结果表明,德国拜发与北京望尔生产的两种ELISA试剂盒具有操作简单、时间短、成本低、敏感度高等特点。在室温20-22℃条件下,试验制备过程中必须做到控温度、控转速、控流速及洗板过程中应注意事项,这样可大大提高在实际操作过程中检测的准确性。     

猪肝和猪尿中沙丁胺醇和克伦特罗残留的酶联免疫吸附检测法研究

采用混合酸酐法将沙丁胺醇与牛血清白蛋白偶联，并免疫家兔制备抗沙丁胺醇抗血清。以间接ELISA法测定血清效价，测得抗血清最佳工作浓度为1：6400，该抗沙丁胺醇抗血清对克伦特罗有110％的交叉反应性。建立了能够同时检测SAL和CL的间接竞争ELISA方法，该方法对沙丁胺醇的检测范围为0．48ng／mL～8．0μg／mL，对克伦特罗的检测范围为0．43ng／mL～7．3μg／mL，对沙丁胺醇的检测灵敏度为o．48ng／mL，对克伦特罗的检测灵敏度为0．43ng／mL。在猪肝和猪尿中添加1～50ng／g(ng／mL)的沙丁胺醇，添加回收率为72．2％～84．8％，变异系数为4．2％～28．3％，在猪肝脏和猪尿中添加1～50ng／g(ng／mL)的克伦特罗，添加回收率为84．3％～103．4％，变异系数为O．3％～35．5％。     

猪尿样中盐酸克伦特罗的快速筛检分析

为了调查上海屠宰生猪盐酸克伦特罗(瘦肉精)的残留情况,2010—2011年对该市4个定点屠宰场分25个批次,共取猪尿样本2 791份,用ELASA进行快速筛检,结果显示:阳性率为4.73%(132/2 791)。     

ELISA试剂盒用于检测猪尿中赛庚啶残留的考察

对市场销售的四种未明确标识可用于猪尿样品的赛庚啶ELISA试剂盒进行考察,使用空白猪尿和不同浓度的空白添加猪尿对其反应原理、可操作性、灵敏度、检测限、回收率等进行研究,发现其中三种赛庚啶ELISA试剂盒可用于猪尿中赛庚啶残留检测,但需根据试剂盒的特点按需选择。结果表明使用市售的ELISA试剂盒监测猪尿中赛庚啶残留简便可靠,可作为初筛方法,检坝0限为0．5μg／L。     

猪瘟抗体检测试纸条与ELISA试剂盒的检测结果比对试验

四川成都某生物技术有限公司研发了一款检测猪瘟抗体的免疫胶体金试纸条,为检验此产品,选取美国产、武汉产ELISA试剂盒与其做对比试验,比较猪瘟抗体检测的特异性、敏感性和符合率。结果表明:成都产试纸条同批次产品性能稳定,总符合率与美国产、武汉产ELISA试剂盒间差异不显著。     

胶体金法与酶联免疫吸附测定法检测猪瘟抗体的比较

为比较胶体金法与ELISA法检测猪瘟抗体的符合率,以了解胶体金法的特异性与敏感度,用胶体金法和ELISA法平行检测受检猪血清标本猪瘟抗体滴度.结果表明,胶体金法和ELISA法检测猪瘟抗体的结果符合率为86.6％,胶体金法较ELISA法敏感度、特异度低,用胶体金法检测猪瘟抗体滴度存在一定程度的漏检率及误诊率,只能初步筛查猪瘟抗体.具有一定技术力量的县级兽医实验室使用ELISA法检测猪血样的猪瘟抗体滴度更为合适,对于胶体金法筛查阴性的猪血样,建议用ELISA法复检以防漏检.     

Study on Colloidal Gold Immunochromatographic Assay for Rapid Detection of Estradiol in Milk

In order to develop a sensitive and specific method for the detection of estradiol residues (E₂) in milk, a colloidal gold immunochromatographic method was established. Colloidal gold particles were prepared by trisodium citrate reduction method and labeled with rabbit polyclonal antibodies (PcAb) by physical adsorption method. After optimization of reaction conditions such as the amount of coating antigen and labeled antibody to assemble test strip, the sensitivity, specificity, repeatability and accelerated preservation of the test strip were determined. The estrogen analogue cross reaction and milk matrix interference reaction were also measured. The results showed that the optimized concentration of E₂-OVA antigen was 2 mg/mL and the optimized antibody concentration was 20 μg/mL, visual detection limits of E₂ was 10 μg/L in PBS within 10 min. The cross reaction rate of this method with estriol was 40%, there were no negligible cross-reactivities with other estrogen compounds including estradiol valerate, estradiol benzoate, estrone, diethylstilbestrol, quinestrol, ethinyloestradiol and nonylphenol. Milk samples only needed two times diluted before analysis, and the results could judge by naked eye after 10 min with cut-off of 20 μg/L. The results demonstrated that the developed method was suitable for rapid on-site screening of E₂ residues in milk samples.     

牛奶中雌二醇胶体金试纸条快速检测技术研究

为了建立快速、敏感、特异的雌二醇（E₂）残留免疫检测方法,本研究应用胶体金免疫层析技术,研究制备一种快速检测牛奶中E₂的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,采用物理吸附法将E₂兔多克隆抗体偶联至胶体金,经过优化抗原包被量和多克隆抗体标记量等反应条件组装成检测试纸条,测定检测试纸的灵敏度、特异性、重复性和加速保存等参数,并对E₂类似物交叉反应和牛奶基质干扰反应进行了测定。结果表明,试纸条最优包被抗原浓度为2 mg/mL,抗体浓度为20 μg/mL。采用消线法判定结果,检测时间10 min,PBS缓冲液中E₂检测限为10 μg/L,该方法与雌三醇的交叉反应率为40%,与戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、雌酮、己烯雌酚、炔雌醚、乙炔雌二醇、壬基酚等类似物均无可见交叉反应,牛奶样品经2倍稀释消除基质干扰直接用于检测,该方法在牛奶样品中的判定值为20 μg/L。本研究建立的E₂胶体金试纸条使用简单方便,适合现场快速检测牛奶中E₂残留。     

柱状黄杆菌胶体金免疫层析快速检测方法的建立

为建立一种通过胶体金免疫层析技术快速检测柱状黄杆菌的方法,试验采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20 nm的胶体金颗粒,将其标记纯化的抗柱状黄杆菌单克隆抗体(McAb)制备出金标抗体结合垫。纯化的兔抗柱状黄杆菌多克隆抗体(PcAb)和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)与质控线(C)上,制备出胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性及稳定性进行测定。结果显示,该试纸条检测灵敏度为1×10³ CFU,检测时间为3.5 min,制备的试纸条与迟钝爱德华氏菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌均无交叉反应,且稳定性好。本研究首次成功建立了柱状黄杆菌胶体金快速检测方法,所制备的试纸条具有灵敏、特异、稳定、快速等优点,可用于柱状黄杆菌的检测。