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相似文献
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1.
《中国兽医学报》2014,(9):1513-1519
将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK分别用0、0.5、1.0、2.0μmol/L醋酸铅作用12h后,MTT法检测不同剂量的醋酸铅对其增殖的抑制率,Annexin V-FITC/PI双染法检测醋酸铅引起的NRK凋亡,罗丹明123检测线粒体膜电位的变化,Western blot检测caspase-3和caspase-9蛋白的表达,以及caspase广谱抑制剂和caspase-9的抑制剂(Z-VAD-FMK和Ac-LEHD-FMK)对醋酸铅诱导细胞凋亡的抑制作用。结果显示,与对照组相比,细胞存活率明显下降(P<0.05或P<0.01),醋酸铅明显抑制NRK细胞增殖,且呈一定剂量效应,IC50为(2.44±0.32)μmol/L;凋亡检测表明,随着醋酸铅浓度的升高,细胞凋亡现象越明显;明显减低线粒体膜电位;激活体caspase-3和caspase-9的表达水平呈剂量依赖性增加;caspase抑制剂能显著抑制醋酸铅诱导的细胞凋亡。结果表明,醋酸铅抑制NRK细胞增殖,可能通过激活caspase依赖性的线粒体信号通路而诱导NRK细胞凋亡。  相似文献   

2.
旨在研究Fas/FasL通路对镉激活PC12细胞MAPK通路的影响,用10 μmol L-1醋酸镉(CdAc2)分别处理插入非特异性序列PC12细胞与Fas基因沉默PC12细胞12 h;用10 μmol·L-1CdAc2与40 μmol·L-1 Z-IETD-FMK (caspase-8特异性抑制剂)单独或联合处理PC12细胞12 h。通过Western blot检测Fas/FasL通路相关蛋白Fas、FasL、Fas相关死亡域蛋白(FADD)、Cleaved caspase-8、死亡结构域相关蛋白(Daxx)、凋亡信号调节激酶1(ASK1)的表达与MAPK通路相关蛋白ERK1/2、JNK1/2、p-ERK1/2、p-JNK1/2的表达;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示,Fas shRNA慢病毒极显著抑制镉引起的PC12细胞Fas/FasL通路相关蛋白表达量和凋亡率的升高(P<0.01),缓解镉引起的PC12细胞凋亡形态学变化;Fas shRNA与Z-IETD-FMK均能够极显著抑制镉引起的PC12细胞MAPK通路相关蛋白ERK1/2与JNK1/2磷酸化水平升高(P<0.01)。综上表明,Fas/FasL通路调控MAPK通路参与镉致PC12细胞凋亡。  相似文献   

3.
旨在探究死亡受体Fas在镉致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)凋亡中的作用及其对线粒体通路的调控机制,用10 μmol·L-1镉处理Fas基因沉默的PC12细胞株12 h,通过Western blot检测BH3相互作用域死亡激动剂(BID)、半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)的活化情况,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、凋亡诱导因子(AIF)、核酸内切酶G(Endo G)的表达情况,以及细胞色素C(Cyt C)在细胞内的分布情况,免疫荧光染色检测AIF核转位。结果显示,镉极显著上调tBID/BID比值和Bax/Bcl-2比值,诱导Cyt C从线粒体释放到细胞质,激活caspase-9、caspase-3和PARP,增加AIF和Endo G蛋白表达水平(P<0.01),并诱导AIF核转位;沉默Fas极显著抑制镉引起的tBID/BID比值和Bax/Bcl-2比值升高,Cyt C从线粒体释放到胞浆,caspase-3、PARP蛋白活化和AIF、Endo G蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),显著抑制镉激活的caspase-9(P<0.05),并抑制AIF核转位。综上表明,Fas通过调控线粒体通路参与镉致PC12细胞凋亡。  相似文献   

4.
《中国兽医学报》2014,(10):1672-1675
为研究α-硫辛酸(α-lipoid acid,α-LA)对镉致PC12细胞线粒体凋亡途径的保护作用。10μmol/L醋酸镉和100μmol/Lα-LA单独或联合作用PC12细胞24h,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表达量和细胞色素C(cytochrome c,Cyt C)的释放。结果表明,镉引起细胞凋亡率上升,cleaved caspase-3表达上调,Bcl-2/Bax比值极显著下降(P<0.01),Cyt C从线粒体释放进入胞浆中(P<0.01);α-LA联合Cd处理,细胞凋亡率下降,cleaved caspase-3表达量下降,Bcl-2/Bax比值升高,并且能抑制线粒体中Cyt C的释放。表明α-LA对于镉诱导的PC12细胞凋亡的线粒体途径具有一定的保护作用。  相似文献   

5.
为探究二烯丙基二硫化物(DADS)对马立克氏病肿瘤细胞系(MDCC-MSB-1细胞)的增殖抑制作用及其信号通路的调控机制,以MDCC-MSB-1细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测不同浓度DADS分别作用MDCC-MSB-1细胞24、48、72 h后对细胞增殖抑制的影响。用0、80、160、240μmol/L DADS预处理MDCC-MSB-1细胞24 h后,光学显微镜观察细胞形态变化;Hoechst 33342核酸染色法检测细胞形态变化;caspase-8活性试剂盒检测细胞中caspase-8蛋白酶活性;并用荧光定量PCR法检测Fas/FasL信号通路关键因子mRNA的转录水平。结果显示,40μmol/L~240μmol/L的DADS抑制MDCC-MSB-1细胞的增殖呈时间剂量依赖性;随着浓度的升高,细胞形态逐渐出现细胞核核膜消失,染色体降解为多个片段并且边缘化,形成凋亡小体;240μmol/L的DADS可诱导MDCC-MSB-1细胞caspase-8蛋白酶活性及Fas、FADD、caspase-8、Bid和caspase-3 mRNA的转录水平极显著升高(P0.01)。结果表明,DADS可诱导MDCC-MSB-1细胞的凋亡,并活化其Fas/FasL死亡受体凋亡信号通路,可为鸡马立克氏病的治疗提供参考。  相似文献   

6.
为探讨Fas/FasL在镉致PC12细胞凋亡线粒体通路中的作用,用10μmol/L CdAc_2和10 mg/L Anti-FasL单独或联合处理PC12细胞12 h,通过Hoechst 33258染色检测细胞的凋亡形态学变化,流式细胞术检测线粒体膜电位的变化情况,Western blot检测BID、caspase-9、caspase-3、PARP的活化情况,Bax和Bcl-2的表达情况。结果:与对照组相比,Cd处理组细胞凋亡率、tBID/BID比值、Bax/Bcl-2比值、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、cleaved PARP蛋白表达量均极显著升高(P0.01),线粒体膜电位极显著降低(P0.01);与Cd处理组相比,Anti-FasL与Cd共处理组细胞凋亡率、tBID/BID比值、Bax/Bcl-2比值、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、cleaved PARP蛋白表达量均极显著降低(P0.01),线粒体膜电位极显著升高(P0.01)。结果表明,Fas/FasL在镉致PC12细胞凋亡线粒体通路中具有重要作用。  相似文献   

7.
本试验旨在探讨β-羟丁酸(BHBA)对体外原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响以及p38MAPK在其中的调控作用。选择培养72h的肝细胞,添加不同浓度的BHBA(0、0.6、1.2、2.4mmol/L),培养9h,每个浓度3个重复。另外选取细胞,p38MAPK抑制剂SB203580(10pmol/L)预处理1h后,添加BHBA,使其终浓度为2.4retool/L;PI/An—nexinV—FITC双染,运用荧光显微镜观察肝细胞凋亡情况;ELISA法检测p38的活性;实时荧光定量PCR方法检测p38、Caspase-3、Caspase9、bcl2基因的mRNA表达水平。结果表明,与对照组相比,1.2和2.4mmol/I—BHBA组的肝细胞凋亡明显增加;p38酶活性明显升高;p38、caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平均显著增加(P〈0.01)。bcl2基因mRNA表达水平显著降低(P〈0.05);添加p38抑制剂后,caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平显著降低(P〈0.01),bcl-2基因mRNA表达水平显著增加(P〈O.05)。高浓度的BHBA可以诱导体外原代培养犊牛肝细胞凋亡,p38在BHBA诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。  相似文献   

8.
旨在以体外培养的小鼠成肌细胞(C2C12)为研究对象,探讨氧化损伤可能的路径。本试验分为3个处理组,每个处理组6个重复。处理组分别为:对照组(Control),以DMEM培养基培养的细胞作为空白对照,培养24 h;吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组(PDTC),以每个孔1 mL的PDTC(20μmol·L~(-1))孵育细胞24 h;H_2O_2组(H_2O_2),加入0.5 mmol·L~(-1)的H_2O_2处理细胞24 h。检测各组细胞的存活率、ROS水平与凋亡率,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印记法检测细胞凋亡和自噬相关基因的表达以及NF-κB信号通路相关因子的表达。结果表明,与对照组相比,PDTC可显著提高细胞的总凋亡率(P0.05),可显著上调细胞半胱天冬蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-6、caspase-9的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平(P0.05),显著上调Beclin 1的mRNA表达量和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II/I的值以及LC3-II蛋白表达水平(P0.05),显著下调核因子kappa B副族1(p50)、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白(Bcl-2)、v-rel禽网状内皮增生病病毒癌基因同源物A(RelA)和环氧合酶(Cox)-2的mRNA表达量以及NF-κB蛋白表达水平(P0.05);H_2O_2可显著提高细胞的ROS水平和细胞总凋亡率(P0.05),可显著上调caspase-3、caspase-6、caspase-8、caspase-9的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平(P0.05),显著上调Beclin 1和LC3-II/LC3-I的mRNA表达量以及LC3-II蛋白表达水平(P0.05),显著提高Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达量(P0.05),显著下调p50、Bcl-2、RelA和Cox-1、Cox-2的mRNA表达量以及核因子kappa B(NF-κB)蛋白表达水平(P0.05)。结果提示,H_2O_2会引起C2C12细胞的ROS升高,并且能够通过抑制NF-κB信号通路介导细胞凋亡和自噬的发生,这与NF-κB因子的特异性抑制剂PDTC的作用相类似。  相似文献   

9.
鸡免疫器官中半胱天冬酶-3、Bcl-2的表达与细胞凋亡的关系   总被引:11,自引:4,他引:7  
用流式细胞法测定了30日龄AA肉鸡的胸腺、法氏囊和脾脏细胞中半胱天冬酶-3(caspase-3)、Bcl-2蛋白的表达及细胞周期和细胞凋亡率。结果:胸腺、法氏囊、脾脏中G0/G1期细胞比例分别是:96.44%、68.09%、92.97%;G2/M期细胞比例是:0.80%、1.04%、2.36%;S期细胞分别为:2.77%、30.52%、4.67%,表明细胞增殖活性的增殖指数(PI)是:3.56、31.92、7.03。胸腺、法氏囊、脾脏细胞凋亡率分别为:3.99%、0.32%、0.22%;caspase-3表达的阳性细胞率是:14.24%、8.60%、5.49%,与细胞凋亡率呈方向一致的变化;Bcl-2蛋白表达阳性细胞率依次是:20.59%、30.24%、31.32%,与细胞凋亡率呈反向变化。上述结果表明:鸡免疫器官细胞凋亡是依赖caspase-3介导的细胞凋亡,caspase-3和Bcl-2是鸡免疫器官发育的重要调节物。  相似文献   

10.
为了观察去甲斑蝥素(NCTD)对人白血病U937细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响,试验将5,10,20 nmol/L去甲斑蝥素与U937细胞共同培养48 h,采用MTT法测定细胞活性,应用免疫组织化学法检测细胞中细胞型FLICE抑制蛋白(cFLIP)、存活蛋白(survivin)以及胱天蛋白酶-3(caspase-3)的表达。结果表明:与阴性对照组比较,5,10,20 nmol/L去甲斑蝥素组细胞活性下降(P<0.05或0.01);去甲斑蝥素显著抑制cFLIP和存活蛋白的阳性表达,促进胱天蛋白酶-3的阳性表达(P<0.05或0.01)。推测去甲斑蝥素可能通过下调cFLIP和存活蛋白的表达,上调胱天蛋白酶-3的表达诱导U937细胞凋亡。  相似文献   

11.
目的:探讨西洋参皂苷对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,及抑制心肌细胞凋亡的机制。方法:利用原代培养的乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注模型;采用MTT、TUNEL法检测心肌凋亡细胞;Western blot检测caspase-3,caspase-9蛋白的表达。结果:缺血再灌注组出现心肌凋亡细胞;caspase-3,caspase-9的表达缺血再灌注组较对照组明显增加(P0.05),PQS治疗组较缺血再灌注组明显下降(P0.05)。结论:心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡,PQS治疗可以显著减少缺血再灌注心肌细胞的凋亡。PQS通过抑制caspase-3;caspase-9,而抑制心肌细胞凋亡。  相似文献   

12.
为探讨硒对氟中毒鸡睾丸组织caspase-3 mRNA表达的影响,将8日龄海兰褐雏鸡180只随机分为3组:Ⅰ组为正常对照组,饲喂全价日粮;Ⅱ组为高氟组,全价日粮中添加氟化钠(NaF),使每千克日粮中氟含量为1 000 mg;Ⅲ组为硒颉颃组,在高氟日粮中添加亚硒酸钠(Na2SeO3),使每千克日粮中硒含量为4 mg。试验期共90 d,分别于试验期第30、60、90天,空腹心脏采血后,剖杀试验鸡,取睾丸组织并检测caspase-3 mRNA表达水平。结果表明:在试验的各个阶段,Ⅲ组中caspase-3 mRNA转录水平均高于同期Ⅱ组。提示硒可以在一定程度上影响氟中毒鸡睾丸组织caspase-3 mRNA的表达水平。  相似文献   

13.
玄红专  胡福良 《中国蜂业》2009,60(9):35-36,40
本文对蜂胶抑制血管生成的作用及可能的机制进行了综述。研究结果表明,蜂胶可能通过抑制细胞外存活信号ERK1/2,活化caspase-3途径促进内皮细胞凋亡,抑制内皮细胞增生而发挥抑制血管生成的功效;蜂胶及其组分作为治疗包括肿瘤在内的与血管生成有关疾病药物的开发具有潜在的价值。  相似文献   

14.
10周龄SD大鼠单剂量腹腔注射5 mg/kg玉米赤霉烯酮玉米油溶液,分别于3、6、12、24、48、72、96 h时剖杀取卵巢组织,检测不同时间卵巢组织Caspase-3和Caspase-8的表达.病理组织学观察发现,卵巢组织出现不同程度损伤,卵泡颗粒细胞发生凋亡.免疫组织化学超敏PV法结果表明,试验组与对照组卵巢组织中均有Caspase-3和Caspase-8的表达,并且随着时间的推进呈现动态变化.Caspase-3和Caspase-8试验组表达量均高于对照组.试验组卵巢组织中Caspase-3在3~96 h时表达量均比较高,与对照组相比较差异显著(P<0.05),且3、6、12、24、48 h的表达量均高于72 h和96 h的表达量.6、12、72、96 h卵巢组织中Caspase-8表达量与对照组相比较差异显著(P<0.05),3、24、48 h时与对照组相比差异不显著(P>0.05),且3、6、12、24、48 h的表达量均高于72 h和96 h的表达量.结果表明,大鼠玉米赤霉烯酮中毒可引起卵巢组织的病变及颗粒细胞凋亡,且Caspase-3和Caspase-8在玉米赤霉烯酮中毒大鼠卵巢颗粒细胞凋亡中起着重要作用,进一步证明本试验中死亡受体途径的激活可能参与凋亡的发生.Caspase-8表达量在个别时间段与对照组差异不显著还有待于进一步深入研究.  相似文献   

15.
以茶皂素(Teasaponin,TS)作为候选药物,研究茶皂素对Marc-145细胞受体CD163和波形蛋白(Vimentin)基因合成和蛋白表达的影响,以及茶皂素是否能通过细胞凋亡内源性通路影响PRRSV感染细胞,探究茶皂素抗PRRSV的作用机制。通过qRT-PCR和Western blot检测TS对细胞受体CD163和Vimentin的基因合成和蛋白表达的影响。运用Western blot技术检测TS对细胞内源性凋亡通路启动子caspase-9活化的影响,初探TS的抗PRRSV机制。qRT-PCR结果表明TS能显著抑制感染PRRSV的Marc-145细胞受体CD163和Vimentin基因的合成。Western blot结果表明TS能显著抑制细胞受体CD163和Vimentin的蛋白表达。TS能够引起细胞内源性凋亡通路启动子caspase-9的活化。研究表明,TS能抑制PRRSV在Marc-145细胞上的穿入过程,从而达到抗PRRSV的作用;亦可通过激活细胞凋亡内源性通路以早期促进细胞凋亡的方式产生抗PRRSV的作用。  相似文献   

16.
为了研究家蚕凋亡蛋白酶(caspase-1)的原核表达及剪切方式,用PCR法扩增出家蚕caspase-1基因的cD-NA,然后插入pET28a载体,得到阳性质粒pET28a-caspase-1,并转化感受态细胞BL21,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导了caspase-1蛋白的表达。应用SDS-PAGE和Western blot分析对其性质作检测,诱导3 h后caspase-1蛋白得到剪切,5 h开始降解。研究结果表明,caspase-1基因可在大肠杆菌BL21中诱导表达,并且能够进行自我剪切。  相似文献   

17.
The present study was conducted to investigate the effect of silymarin on experimental liver toxication induced by Fumonisin B1 (FB1) in BALB/c mice. The mice were divided into six groups (n = 15). Group 1 served as the control. Group 2 was the silymarin control (100 mg/kg by gavage). Groups 3 and 4 were treated with FB1 (Group 3, 1.5 mg/kg FB1, intraperitoneally; and Group 4, 4.5 mg/kg FB1). Group 5 received FB1 (1.5 mg/kg) and silymarin (100 mg/kg), and Group 6 was given a higher dose of FB1 (4.5 mg/kg FB1) with silymarin (100 mg/kg). Silymarin treatment significantly decreased (p < 0.0001) the apoptotic rate. FB1 administration significantly increased (p < 0.0001) proliferating cell nuclear antigen and Ki-67 expression. Furthermore, FB1 elevated the levels of caspase-8 and tumor necrosis factor-alpha mediators while silymarin significantly reduced (p < 0.0001) the expression of these factors. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and fibroblast growth factor-2 (FGF-2) expressions were significantly elevated in Group 4 (p < 0.0001). Silymarin administration alleviated increased VEGF and FGF-2 expression levels (p < 0.0001). In conclusion, silymarin ameliorated toxic liver damage caused by FB1 in BALB/c mice.  相似文献   

18.
The potential reproduction power of domestic animals is limited by a complicated follicular atresia process. P53, caspase-9 (Casp9), Bax, Bcl-2 and Fas play a crucial role in the ovarian mitochondrion-dependent apoptosis and death receptor pathway. In accordance with this study, the expression levels of Casp9, Bax, Bcl-2 and Fas were analysed in ovaries and oviducts of yak by immunohistochemistry (IHC). P53 and the above in ovarian granulosa cells (GCs) from atretic (3–6 mm) to healthy follicles (6–8 mm) and in oviducts were examined from the luteal phase to the follicular phase during the oestrous circle by Western blot (WB) and real-time PCR (RT-PCR). Results demonstrated that typical classic apoptotic factors Casp9, Bax, Bcl-2 and Fas were expressed in the cytoplasm and zonal pellucida of oocytes, primordial follicles, primary follicles, ovarian surface epithelium, ovarian GCs, granular lutein cells, surface epithelia in oviduct uterotubal junction and oviduct ampulla during the luteal phase. RT-PCR and WB revealed that P53 and Fas significantly increased in GCs of atretic follicles. P53 and Casp9 increased in oviduct epithelium during the luteal phase, but Fas was unchanged. A contrary tendency was noted in Bcl-2 and Bax expression. Overall, P53 and Fas play an essential role in inducing GC apoptosis, and Bax, Bcl-2, Casp9 and P53 are involved in oviduct epithelial regeneration in yak.  相似文献   

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