猪链球菌2型多重耐药菌株的人工诱导

采用6种常用抗菌药物对临床分离的38株猪链球菌2型进行敏感性检测,从中选择3株对红霉素和环丙沙星敏感的菌株,采用体外递增药物浓度的方法分别诱导成对红霉素和环丙沙星耐药的菌株,按临床检验标准委员会(CLSI)推荐的方法测定了红霉素和环丙沙星对同一亲本的敏感株和诱导耐药株的体外最小抑菌浓度(MIC),并测定在外排泵抑制剂利血平存在的情况下敏感株和诱导耐药株的MIC变化情况。微量稀释法测定的MIC结果显示:在所选的6种抗生素中,氟苯尼考和氨苄西林对临床分离的38株猪链球菌的作用最好,抑菌率都为100%,红霉素及环丙沙星有一定作用,耐药率分别达39.5%(15/38)和28.9%(11/38),而磺胺间甲氧嘧啶、四环素的抑菌效果最差,耐药率达100%。浓度递增法成功诱导了猪链球菌2型菌株对红霉素和环丙沙星耐药性,其MIC值分别由0.001 8 mg/L上升至128 mg/L。在外排泵抑制剂利血平存在的情况下,抗菌药物对部分猪链球菌2型菌株的MIC值下降。结果提示:逐步增加药物浓度可以诱导猪链球菌2型菌株对红霉素和环丙沙星的耐药性,而且猪链球菌2型菌株耐药性的产生可能与耐药性相关的主动外排机制有关。     

致病性猪链球菌2型的病原分离鉴定及毒力因子的PCR检测

通过对广西某猪场急性死亡的猪进行病原分离,分离到革兰氏阳性球菌,用链球菌快速鉴定试剂条Rapid ID 32 Strep鉴定为猪链球菌2型;并对分离菌进行猪链球菌2型荚膜多糖抗原（cps2J）及其重要毒力因子溶菌酶释放蛋白（MRP）、细胞外蛋白因子（EF）和溶血素（SLY）的多重PCR检测,同时对cps2J基因进行序列测定,与GenBank发表的猪链球菌2型相比,同源性为98.8%,毒力因子MRP、EF和SLY检测均为阳性,证实广西某猪场急性死亡的猪为高毒力猪链球菌2型感染所致。动物试验中,该菌可引起小白鼠部分死亡,家兔体温最高升至40.3℃,最后败血而死。     

猪链球菌毒力因子的研究进展

猪链球菌病是一种重要的人畜共患病,给人类和养猪业的健康发展造成极大的危害。猪链球菌的毒力因子包括荚膜多糖(CPS)、溶菌酶释放蛋白(MRP)、胞外因子(EF)、溶血素(SLY)、毒力相关序列(ORF2)、纤连蛋白和血纤蛋白原结合蛋白(FBPS)、谷氨酸脱氢酶(GDH)、IgG结合蛋白等,它们与猪链球菌的致病性有着密切的关系。笔者通过总结毒力因子对猪链球菌致病机理的影响,以期为猪链球菌病疫苗的研制和治疗提供理论基础。     

山西省致病性猪链球菌毒力基因测定及耐药性监测

研究对从山西省主要养猪区30多个养猪场(户)分离并初步鉴定的80株有致病性的猪链球菌菌株进行主要毒力相关基因测定及耐药性监测。毒力基因测定研究结果表明:87.5%毒株含毒力因子谷氨酸脱氢酶(GDH),62.5%毒株含毒力因子溶菌酶释放蛋白(MRP),58.75%毒株含毒力因子胞外因子(EPF),72.5%毒株含毒力因子溶血素(SLY)。对致病菌株的溶血素(SLY)、胞外因子(EPF)、溶菌酶释放蛋白(MRP)这3个主要毒力相关基因进行克隆和核苷酸序列分析,未见变异。耐药性监测研究结果表明:分离鉴定的猪链球菌菌株对氨苄西林、头孢他啶和头孢曲松高度敏感;对卡那霉素、螺旋霉素、氧氟沙星、恩诺沙星中敏;对青霉素、环丙沙星、链霉素、庆大霉素、强力霉素、阿莫西林、复方新诺明、诺氟沙星、红霉素、磺胺二甲基嘧啶和土霉素等药物有耐药性。这一研究结果为山西省猪链球菌病防控措施的制定提供了科学依据。     

猪链球菌的鉴定及其主要毒力基因的多重PCR检测

通过革兰氏染色镜检、生化试验及PCR鉴定,对分离的猪源链球菌进行初步研究.同时根据猪链球菌主要毒力因子基因Sly、MRP、EF的核苷酸序列,设计并合成了3对特异性引物,通过体系和条件优化,建立多重PCR检测方法,对实验菌株及阴性对照菌株进行检测分析.结果从不同地区分离到的30株猪源链球菌中,确认16株为猪链球菌.多重PCR检测结果显示,Sly检出率为5/16,MRP检出率为4/16,EF检出率为2/16,阴性对照菌株毒力因子检测结果均为阴性.分析结果表明,该多重PCR体系可用于猪链球菌毒力相关因子Sly、MRP、EF的基因检测,特异性和敏感性较好.     

猪链球菌2型胞外蛋白因子基因片段的克隆与表达

根据猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2)胞外蛋白因子（extracellular factor protein,EF)基因序列，设计和合成1对引物，以猪链球菌2型江苏98分离株HA9801的基因组DNA为模块，通过PCR技术，扩增epf基因1207－1675bp序列，并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pGEX-6p-1中谷胱甘肽转移酶（GST）基因的下游；将重组质粒转化入大肠杆菌BL21株，经IPTG诱导可表达相对分子质量约为41000的融合蛋白。用EF抗血清进行的免疫印迹分析表明，含有epf基因1207－1675bp序列编码的肽段的融合蛋白不能被EF抗血清识别。     

猪链球菌2型毒力因子及其检测方法

猪链球菌病是由多种致病性链球菌引起的一种细菌性人兽共患传染病,是由D、E及L群链球菌引起猪的多种疾病的总称,其中以2型猪链球菌病的流行最广。已发现的猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2,SS2）的毒力因子包括溶血素（suilysin,SLY）、溶菌酶释放蛋白（muramidase-relased protein,MRP）、细胞外蛋白因子（extracellular factor,EF）、IgG结合蛋白等。 SS2的毒力因子与其致病性密切相关,目前有多种检测SS2毒力因子的方法,常用的有免疫印迹、ELISA和PCR等检测方法。主要就猪链球菌病及其猪链球菌2型毒力因子的检测方法进行概述。     

细菌性 人畜共患病之——猪的链球菌病

猪的链球菌病≠猪链球菌病,今年7、8月间在四川省部分县市发生的猪链球菌病（Swine streptococosis）,是由携带MRP（溶菌酶释放蛋白）、EF等（细胞外因子）多种毒力因子的R-2型链球菌引起的一种人畜共患传染病,已被大家公认为：“猪链球菌病”，而猪的链球病所包函的内容更为广泛，除由R-2型所致的猪链球菌病外，还有由C群菌-马链球菌兽疫亚种（S．epui subsp zooepidemicus）；     

四川猪链球菌Ⅱ型分离株生物学特性的初步研究

猪链球菌Ⅱ型是导致许多国家猪链球菌病的主要病原，自90年代晚期江苏发生猪链球菌Ⅱ型感染以来已成为我国引起人畜共患病的一种重要的新病原菌。最近在四川省部分地区发生了不明原因的猪源人畜共患病，且具有较高的死亡率。我们从病死猪的病料中成功分离到三株猪链球菌分离株，经革兰氏染色、生化试验、血清凝集试验和PCR鉴定，最终证实为猪链球菌Ⅱ型。通过对其毒力因子进行鉴定．结果发现MRP和EF均为阳性。进一步的药敏试验证实：分离菌株对氨苄青霉素、先锋霉素Ⅳ、羧苄青霉素、复方新诺明、头孢肤肟等抗菌药高度敏感。     

链球菌2型对恩诺沙星耐药机制及耐药株毒力变化研究进展

猪链球菌病(Swine Streptococcosis,SS)是由多种溶血性链球菌引起的急性发热性人兽共患传染病,是近年来严重危害我国养猪业发展的新发细菌性传染病。猪链球菌耐药问题非常突出。本文对链球菌2型对恩诺沙星耐药机制及耐药株毒力变化研究进展进行综述,重点介绍猪链球菌2型逐渐演变为耐药菌时,其毒力因子和致病性之间的关系。最大限度地降低细菌耐药性与延长抗菌药物的疗效周期是人类所面临的长期挑战。