“猪地方性肺炎及其防治控制”专栏三：猪肺炎支原体的诊断

猪肺炎支原体可引发猪地方性肺炎,仍然是导致养猪业疫病的重要病原体之一。这种复杂的小型微生物可定殖在猪呼吸道的纤毛细胞中,使其几乎不暴露于免疫系统下。证实猪肺炎支原体的存在、并确定其在呼吸道疾病和肺炎中的作用,对兽医行业仍然具有挑战性。虽然猪肺炎支原体的培养仍然是对其作出鉴定的黄金标准,但血清学方法、聚合酶链反应和检测组织中猪肺炎支原体的各种不同方法仍是实验室常用的检测技术。由于猪肺炎支原体在由并发的细菌和病毒感染引发的严重肺炎中所起的作用日益增加,了解猪肺炎支原体的发病机制和现有的诊断方法对开发有效的干预措施以及在猪群水平上控制猪群呼吸道疾病非常关键。     

猪肺炎支原体的诊断

猪肺炎支原体可引发猪地方性肺炎,仍然是导致养猪业疫病的重要病原体之一.这种复杂的小型微生物可定殖在猪呼吸道的纤毛细胞中,使其几乎不暴露于免疫系统下.证实猪肺炎支原体的存在、并确定其在呼吸道疾病和肺炎中的作用,对兽医行业仍然具有挑战性.虽然猪肺炎支原体的培养仍然是时其作出鉴定的黄金标准,但血清学方法、聚合酶链反应和检测组织中猪肺炎支原体的各种不同方法仍是实验室常用的检测技术.由于猪肺炎支原体在由并发的细菌和病毒感染引发的严重肺炎中所起的作用日益增加,了解猪肺炎支原体的发病机制和现有的诊断方法对开发有效的干预措施以及在猪群水平上控制猪群呼吸道疾病非常关键.     

不同因素对猪肺炎支原体颜色变化单位测定的影响

为摸清猪肺炎支原体的颜色变化单位(CCU)测定是否受试验相关因素的影响,通过不同培养体系、不同种类的容器、不同的稀释方法测定猪肺炎支原体的CCU,观察培养基的变色情况,最终通过测定各组猪肺炎支原体的CCU来分析不同因素对猪肺炎支原体培养滴度的影响。结果显示,利用不同培养体系、不同容器及不同的稀释方法测定猪肺炎支原体的CCU,其结果差异均不显著(P>0.05)。该研究可为今后支原体的CCU测定提供参考。     

我国市场上猪支原体肺炎疫苗现状及应用效果

目前,市场上猪支原体肺炎疫苗主要为常规的全菌体疫苗,根据我国猪支原体肺炎产品注册情况,本文主要从猪支原体肺炎疫苗的制备技术、免疫程序及免疫效果三个方面对国内报批、销售的猪支原体肺炎疫苗进行比较研究,并简要分析各疫苗产品的特点。     

绵羊肺炎支原体与猪肺炎支原体交叉抗原研究

为了研究绵羊肺炎支原体标准株Y98与猪肺炎支原体标准株232全菌蛋白免疫原性的异同,试验采用SDS-PAGE和免疫印迹分析技术对其进行了研究,结果表明:绵羊肺炎支原体标准株Y98同猪肺炎支原体标准株232免疫印迹结果基本一致,在70,50,40,25 ku蛋白带处存在共同抗原。     

冬春猪气喘病的综合防治

冬春季节,气温低,昼夜温差大,如果猪舍通风不良,极易诱发猪气喘病,给养猪业带来一定的经济损失。因此,冬春季节搞好猪气喘病的防治工作,对确保养猪业的健康发展,提高养猪效益具有重要意义。猪气喘病又称猪支原体肺炎,是由猪肺炎支原体引起的一种慢性接触性呼吸道传染病。其特征为咳嗽、气喘、融合性支气管肺炎和肺的“肉变”现象。1病原猪肺炎支原体是一种无细胞壁的多形性微生物,多呈球形、环状或椭圆形,革兰氏染色为阴性。猪肺炎支原体对外界环境的抵抗力不强,污染圈舍、饲槽、用具的病原2~3 d后就失去致病力,对阳光和多种化学消毒药物敏…     

猪肺炎支原体PCR快速检测方法的建立和应用

根据猪肺炎支原体P36基因序列,设计1对引物,建立了猪肺炎支原体PCR诊断方法,该方法对猪肺炎支原体的扩增结果为阳性,对照菌株扩增结果均为阴性,对猪肺炎支原体检测的灵敏性为1 pg总DNA量。并用建立的PCR诊断方法检测52份猪肺炎支原体疑似病料,检出阳性病例18份,以上结果表明该PCR方法特异性强敏感性高、简便、快速,可用于猪肺炎支原体疾病的诊断。     

两例猪支原体肺炎的治疗

猪支原体肺炎又称猪喘气病、猪地方性流行性肺炎．是猪的一种慢性接触性传染病，其病原是猪肺炎支原体寄生于呼吸道而引起的一种高接触性传染病，国外称为猪地方性肺炎（SEP）我国称为猪气喘病或喘气病。     

猪支原体肺炎防治研究进展

猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumoniae of swine,MPS)又称猪气喘病,是支原体科猪肺炎支原体(Mycoplasmal hyopneumoniae,Mhp)引起的一种接触性、慢性、呼吸道传染性疾病,其主要表现为猪只咳嗽、生产性能降低。此外,猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)、絮状支原体(Mycoplasma fl occulare,Mfl oc)及猪滑液支原体(Mycoplasma hyosynoviae,Mhyo)也是猪群中常见的支原体科病原。Mhr易引起猪继发性肺炎,Mfl oc可引起猪轻微损伤,Mhyo与猪关节炎息息相关。     

规模化猪场猪支原体肺炎控制及净化技术研究

在四川蒲江某规模化８养猪场 ,对该场的猪支原体肺炎采用以监测、免疫为主,隔离、治 疗、淘汰、消毒等综合防制技术进行控制与净化,对全场有猪支原体肺炎症状的猪及可疑病猪进行隔治疗,治愈后的猪经与易感猪同居感染不发病,分离猪肺炎支原体为阴性,试验表明治愈后的猪不带菌。对全场种猪和后备健康猪群进行猪支原体肺炎疫苗的免疫接种,经抗体监测和攻毒试验,免疫后２４０天猪支原体肺炎的ＩＨＡ抗体仍可达到１：１０,保护率     

用探针杂交法检测鸡毒支原体和滑液囊支原体

根据鸡毒支原体(MG)和滑液囊支原体(MS)的16SrRNA基因序列，设计并合成了探针MG和MS共同目的基因，跨幅为580bP的一对引物。用这对引物对2个标准的MG和1个标准的Ms菌株DNA模板进行聚合酶锭反应(PcR)，结果得到了预期大小约580bP的PcR产物。回收纯化琼脂糖电泳凝肢中的MG扩增产物克隆至T载体中，DIG随机引物法合成核酸探针，斑点杂交试验对MG和MS均呈阳性，检测灵敏度分别为2ng和3ng，其它对照菌(毒)株为阴性。     

几种动物病原菌对替米考星耐药性的体外诱导

在测定替米考星对鸡毒支原体、多杀巴氏杆菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度基础上,采用药物浓度递增法体外诱导3种病原菌对替米考星的耐药性。结果鸡毒支原体经9次传代对替米考星产生了高水平耐药,多杀巴氏杆菌经7~9次传代对替米考星产生了高水平耐药,猪胸膜肺炎放线杆菌经14次传代对替米考星的耐受浓度未发生明显变化;鸡毒支原体和多杀巴氏杆菌替米考星诱导耐药株对红霉素、阿奇霉素、泰乐菌素、吉他霉素和林可霉素表现交叉耐药。研究结果提示,替米考星较易诱导鸡毒支原体和多杀巴氏杆菌产生耐药性,兽医临床应合理应用。     

猪肺炎支原体及其生物学研究进展

猪肺炎支原体是引起猪支气管肺炎的主要病原 ,严重危害着养猪事业的发展。虽然猪肺炎支原体的结构简单 ,但由于它对营养要求较高 ,故培养难度大 ,也是人们不能对其深入研究的一个主要原因。近年来利用克隆技术 ,对猪肺炎支原体从基因水平上进行了多种研究 ,已经取得了一些可喜成果。文章从它的生物学特性、荚膜结构、膜蛋白研究以及基因水平的研究等方面进行了综合性论述 ,并简明地指出了目前研究中存在的问题以及未来展望     

禽副粘病毒2型(PMV-2)致病性的研究

7日龄SPF鸡经滴鼻、点眼感染PMV-2，可引起轻微的呼吸道症状，病理组织学观察可见气管粘液分泌亢进和少量的淋巴细胞浸润。PMV-2与传染性支气管炎（IBV）或鸡毒支原体（MG）协同感染比单纯感染这三种病原的任何一种均呈现更严重的呼吸道症状，病理组织变化呈气管纤毛部分或全部脱落，气管粘膜上皮细胞不同程度的变性、脱落。固有层和粘膜下层严重水肿，有大量淋巴细胞、巨噬细胞和异嗜细胞浸润。SPF雏鸡感染PMV-2后的不同时间检查病毒在鸡体内的分布规律，结果表明，PMV-2在法氏囊中大量分布；气管、肺、胸腺中有较多病毒；大脑、脾和肾脏只有少量病毒存在。上述实验结果揭示PMV-2感染SPF雏鸡致病性较弱，PMV-2在鸡呼吸道综合征中起一定作用。     

应用双重PCR方法检测羊支原体肺炎病原

通过对丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.capri,Mmc)特异性引物MmcF/MmcR和绵羊肺炎支原体(M.ovipneumontiae,Mo)特异性引物LmF/LmR退火温度、引物浓度比例等条件的选择,建立了一个可以同时检测Mmc和Mo的双重PCR方法。该方法可同时扩增出Mmc 195 bp和Mo 361 bp目的片段,但对其他病原菌不能扩增出任何条带,具有良好的特异性。敏感性试验表明,该方法能够分别检测出0.1ng的Mmc DNA和0.01 ng的Mo DNA,或同时检测出1ng Mmc和1ng Mo混合的DNA。用该双重PCR方法可对实验室保存的4株绵羊肺炎支原体和2株丝状支原体山羊亚种进行准确鉴定,并可从临床病料中检测出相应支原体,表明建立的双重PCR方法可用于Mmc和Mo的快速鉴定、实验室诊断和病原学调查。     

鸡毒支原体敏感药物的筛选

用泰乐菌素、强力霉素、罗红霉素、红霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、双氟沙星、呋喃唑酮、呋喃他酮、泰妙菌素等药物对3株鸡毒支原体进行体外抑菌试验。结果证明，它们对鸡毒支原体均有抑菌作用，但以泰乐菌素、泰妙菌素、环丙沙星和双氟沙星抑菌效果最好，达到10^-8g／L。     

猪肺炎支原体P97蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其初步应用

为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）单克隆抗体（MAb）,本研究将原核表达的Mhp J株P97蛋白C末端包含R1区的肽段（P97CR1）作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp P97蛋白MAb的杂交瘤细胞株A3。鉴定结果显示,A3 MAb是IgG1亚类,轻链为κ链。Western blot结果显示A3 MAb能够和原核表达纯化的P97CR1蛋白特异性反应,并且在流式细胞仪分析中能够识别天然的Mhp。通过逐渐截短表达分析该MAb识别的表位序列为LDDNLQ,该抗原表位在Mhp菌株中高度保守。阻断ELISA初步试验结果显示,A3 MAb与蛋白抗原的结合能够被Mhp高免阳性血清阻断。该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的Mhp阻断ELISA检测方法奠定了基础。     

绵羊肺炎支原体GH3-3株在改良KM2培养基中的增殖情况

绵羊肺炎支原体GH3-3 MoGH3-3株是我国绵羊支原体肺炎灭活疫苗制苗菌株.为研究MoGH3-3株在改良KM2培养基中的生长及繁殖特性,利用活菌计数方法对其在不同培养阶段的生长滴度(颜色变化单位)进行测定,并绘制生长曲线.结果表明,传代稳定的MoGH3-3株在改良KM2培养基中培养12 h开始进入对数生长期,培养7...     

丝状支原体丝状亚种SC生物型PCR检测方法的建议

建立了一个可以识别丝状支原体丝状亚种SC生物型（MmmSC)的PCR方法。根据丝状支原体丝状亚种SC生物型（MmmSC)相关核苷酸序列，设计合成了MC1、MC2和SC1、SC2两对引物。MC1、MC2是一对簇特异性引物，用于鉴别丝状支原体族6个成员，对MmmSC、MmmLC扩增出与预期结果相符的462bp片段；而SC1、SC2是针对MnnSC的一对特异性引物，只能对MmmSC扩增出277bp的片段，经过VspI、Bsp143I和Dral三种限制性内切酶鉴定与预期结果相符，而不能扩增出MmmLC型Y－goat代表株，说明具有非常好的特异性。对MmmSC进行的敏感性试验显示SC1、SC2引物能够检测到100个CFU，具有非常高的敏感性。     

丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQ N末端基因克隆与序列分析

脂蛋白LPPQ是丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)非洲株、欧洲株和疫苗株所特有的。LPPQ N末端域具有良好的免疫原性，在牛体内可诱导产生强大、特异、早期、持续的免疫反应。本研究根据已发表的LPPQ基因序列设计引物，用Pyrobest^TM高保真DNA聚合酶从MmmSC HVRI X株中扩增出了LPPQ N末端基因序列，并进行了克隆与序列测定。核苷酸序列比较结果显示，HVRI X株的LPPQ N末端基因序列与国外发表的序列同源性为99．7％，由其推导的氨基酸序列同源性为99，1％，为脂蛋白LPPQ N末端基因体外表达奠定了基础。