酸不溶灰分法在家畜消化试验中应用的研究

<正> 开展家畜消化试验是评定饲料营养价值和研究家畜消化性能的重要手段。以往,多采用传统的全部收粪法(即常规法)。但是,这种方法操作繁琐,费工费时,需要较高的设备,不便推广应用。多年来,国内外学者为了寻求简易方法,进行过不少探索和试验。并较成功地应用了外源指示剂(Exogenous marker)法,即向日粮中外加氧化铬(Cr_2O_3)等物质作为标记物测定饲料消化率方法和内源指示剂(Endogenous marker),即利用饲料中原有的不溶于盐酸灰分(Acid Insoluble Ash,缩写AIA)作为标记物测定饲料消化率方法。但是,对这些方法的研究进展及其评价尚缺乏系统资料。     

日粮标记物烷烃氮

１理想的标记物：烷烃氮（Ｎ┐Ａｌｋａｎｅｓ）理想的标记物必须易于鉴定和分析，在消化道中呈惰性状态，同时能和被标记的日粮混合均匀，并且随日粮在消化道中一起移动。事实上并不存在这类真正的理想标记物。目前，利用内源标记物和外源标记物可以较为准确地测定在正常...     

体外法估测日粮和饲料原料外源代谢葡萄糖值

试验旨在建立体外测定日粮和常用饲料原料中外源代谢葡萄糖(MG)含量的方法。试验采用单因子设计,以小肠消化时间为处理因素,分为1、2、4、6 h和8 h共5个处理。通过"胃蛋白酶-胰蛋白酶两段法"以四种不同日粮为底物进行体外模拟消化。将体外法测得的日粮淀粉降解率与体内法测得的日粮淀粉消化率进行相关性对照,确定两者相关系数最高的时间点,且将此设定为体外模拟消化的最佳时间。用此模拟消化时长,测定6种猪料原料外源MG水平。结果显示,体外法测定淀粉消化率,最佳的消化时长为6 h,此时与体内法测定的淀粉消化率建立的回归方程为:y=0.137 4x+84.834(R2=0.871 1)。最终得到体外法估测日粮外源MG的公式:外源MG=小肠淀粉量×(0.14×体外法测的小肠淀粉消化率+84.83)/0.9,并根据此方法测定出了几种常用饲料原料外源MG。     

单、双食糜标记物技术测定真胃食糜干物质流量对比试验

5头带瘤胃和真胃瘘管的绵羊饲喂7种不同的日粮,日粮中加入食糜标记物——三氧化二铬(Cr_2O_3)和聚乙二醇(PEG)以测定真胃食糜干物质日流量。使用单标记物Cr_2O_3、PEG和双标记物(Cr_2O_3和PEG)的技术测定日干物质流量时,结果没有显著的差异,但单标记物PEG的测定结果变异较大。     

猪瘟活疫苗外源病毒BVDV不同检测方法之比较

对于猪瘟细胞活疫苗的外源病毒检测,我国的《中国兽药典》有严格的要求和详细的检测方法,《中国兽药典》规定采用细胞培养法判定外源因子感染情况,应无外源病毒污染。但随着PCR技术的发展,许多农业学校、研究所、兽药监测机构常用PCR方法检测猪瘟细胞活疫苗中的BVDV(牛病毒性腹泻病毒)外源病毒。我们同时采用外源病毒检验的细胞培养法(法定的)和PCR方法(流行的)选用了一些猪瘟细胞苗做了BVDV检测的比较试验,结果显示:细胞培养法除了能检测到BVDV,还可检测蓝舌病病毒、细小病毒,对外源病毒检测更全面;PCR方法经常会有假阳性,如果对阳性结果不做基因测序,可能出现BVDV假阳性的结果,导致结果偏差,我们的试验结果希望引起同行的注意。     

基于液质联用技术定量分析牛体外受精胚胎中谷胱甘肽含量

旨在为探索外源谷胱甘肽(glutathione,GSH)影响胚胎发育的机制提供研究方法。将牛体外受精胚胎分别置于含GSH(3 mmol·L~(-1),处理组)和不含GSH(对照组)的培养液中培养7 d,统计两组胚胎的卵裂率、桑椹胚率、囊胚率和囊胚总细胞数;并分别采用荧光染色法和液质联用技术(liquid chromatography mass spectrometry,LC/MS)对不同发育阶段的牛受精卵(受精后8、18、24、32 h)中GSH进行定量和跟踪分析,同时分析其中氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的含量。另外,在受精卵培养液中添加GSH的同位素标记物(GSX),利用LC/MS检测受精卵及其培养液中GSX含量。结果表明:1)外源GSH可显著或极显著降低受精后18、24、32 h胚胎内ROS的含量(P 0. 05,P 0. 01)。2)处理组胚胎的桑椹胚率(58. 67%vs. 48. 46%)、囊胚率(50. 83%vs. 34. 88%)和囊胚总细胞数(102. 26 vs. 76. 27)显著高于对照组(P 0. 05)。3)各发育阶段(受精后18、24、32 h)的处理组受精卵中,GSH的含量均显著高于对照组(P 0. 05),且随发育进程而逐渐下降。4)外源GSX也显著提高了处理组受精卵(受精后18、24、32 h)中GSH含量(P 0. 05),培养液中GSX的浓度则随培养时间的延长而持续下降。综上表明,外源GSH可清除胚胎内ROS,提高胚胎发育率和囊胚质量; LC/MS是定量分析胚胎内GSH及其同位素标记物的可靠方法,可用于外源GSH促进胚胎体外发育的机制研究。     

基因工程技术在反刍动物上的应用研究

基因工程技术(主要是转基因技术)应用于反刍家畜还处在起始阶段,要在实践中进行应用还需要做大量的工作。本文就当前基因工程技术对改善、提高反刍动物生产性能方面的研究现状和发展前景作一简述。1　转基因技术1 1　核显微注射法　核显微注射法是转基因技术中最常用的方法。它是在显微镜下将外源基因注到受精卵细胞的原核内,注射的外源基因与胚胎基因组融合,然后进行体外培养,最后移植到受体母畜子宫内发育,这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段。这种方法的缺点是效率低、位置效应(外源基因插入位点随机性)造成的表达结果…     

应用酶联免疫法检测动物源性食品中氟霉素残留

测定的基础是抗原抗体反应.微孔板包被有针对兔ⅠgG(氯霉素抗体)的抗体.加入氯霉素抗体,氯霉素酶标记物,氯霉素标准或样品溶液.游离氯霉素与氯霉素酶标记物竞争氯霉素抗体结合位点(竞争性酶免疫分析),同时氯霉素抗体也与固定的抗体结合.没有结合的氯霉素酶标记物在洗涤步骤中被除去,氯霉素酶标记物与氯霉素抗体结合的数量反比于游离氯霉素的数量,以TMB为底物,测量450nm波长的吸光度值,按标准曲线计算样品中的氯霉素含量.本方法的测定低限为100ng/kg,添加回收率及精密度试验表明符合目前国际上氯霉素残留检测的要求.     

应用酶联免疫法检测动物源性食品中氯霉素残留

测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对兔ⅠgG(氯霉素抗体)的抗体。加入氯霉素抗体,氯霉素酶标记物,氯霉素标准或样品溶液。游离氯霉素与氯霉素酶标记物竞争氯霉素抗体结合位点(竞争性酶免疫分析),同时氯霉素抗体也与固定的抗体结合。没有结合的氯霉素酶标记物在洗涤步骤中被除去,氯霉素酶标记物与氯霉素抗体结合的数量反比于游离氯霉素的数量,以TMB为底物,测量450nm波长的吸光度值,按标准曲线计算样品中的氯霉素含量。本方法的测定低限为100ng/kg,添加回收率及精密度试验表明符合目前国际上氯霉素残留检测的要求。     

尿中嘌呤衍生物是估测瘤胃微生物合成量的一种指示物

确定瘤胃微生物细胞净合成量对反刍动物营养十分重要。这是因为微生物蛋白质量是反刍动物宿主对蛋白质需要的重要来源。用标记物和在动物小肠安装瘘管的方法来测定瘤胃合成的净微生物细胞量或微生物细胞进入下一级消化道的数量不仅费时，且精度不高。Ｌｉｎｇ等（１９７８）研究了许多用以区分进入绵羊小肠食糜中微生物蛋白质的微生物标记物。食糜中ＲＮＡ与总氮比率是一种测定进入十二指肠食糜氮中微生物氮含量的适宜标记物。然而Ｂｒｏｄｅｒｉｃｋ等（１９９２）认为常用的微生物标记物（嘌呤、ＲＮＡ、ＤＮＡ、二氨基庚二酸及同位素标记…     

4种断奶仔猪日粮外源代谢葡萄糖水平的估测

代谢葡萄糖可准确地评定饲料的营养价值以及不同年龄和生理阶段的动物对葡萄糖的需要量。本研究旨在通过测定不同日粮外源代谢葡萄糖值,建立仔猪日粮外源代谢葡萄糖摄入量的估测方法。试验选择(25±2)日龄体重6~7 kg的杜×长×大三元杂交安装回肠末端"T"型瘘管断奶仔猪20头,随机分为4个处理,每个处理饲喂不同淀粉(或葡萄糖)含量的日粮。测定不同日粮的仔猪外源代谢葡萄糖水平,同时以日粮外源代谢葡萄糖含量为因变量Y,分别以日粮中淀粉、粗脂肪、粗蛋白和粗纤维含量为自变量,建立估测日粮外源代谢葡萄糖水平的多元回归公式。结果表明:4种断奶仔猪日粮的外源代谢葡萄糖水平分别为209.37、258.02、394.07 g/kg和420.19 g/kg。估测日粮外源代谢葡萄糖水平的多元回归公式为Y=-39.84+9.09X_1+10.61X_2(R~2=0.9999,X_1和X_2分别表示日粮中淀粉和粗纤维含量)。     

瘤胃微生物蛋白质合成定量方法研究进展

定量十二指肠瘤胃微生物蛋白对定量过瘤胃蛋白是必要的。内标(DAP,二氨基庚二酸;AEP,二氨基乙磷酸)和核酸(RNA,DNA),外标(15N,35S)的使用非常广泛。通过安装有真胃或十二指肠瘘管的奶牛,检测其食糜流量就可以测定微生物蛋白的流量。一个理想的标记物必须将瘤胃液相和固相中的细菌和原虫计算在内,目前还没有理想的标记物。尿液嘌呤衍生物(PDs)方法以其对奶牛没有侵犯、简便、准确的特点而得到了很多学者关注和广泛研究,但其是否为理想的标记尚须进一步研究。     

制作石蜡切片验证鸡胚盘显微注射外源DNA的效果

胚盘下腔是禽类胚胎发育到囊胚时出现的特有腔室,通过向禽类胚盘下腔注射外源细胞或基因是常用的制备嵌合体和转基因禽类的方法。本试验通过制备石蜡切片,验证胚盘下腔显微注射效果的方法。以白来航鸡种蛋为模型,向胚盘下腔中微注射少量的标记物,经过琼脂糖包埋脱水后制作石蜡切片,获得完整的鸡胚Ⅹ期胚盘切片。经过HE染色,可以观察到鸡胚Ⅹ期胚盘的上下胚层及胚盘下腔,鉴定标记物是否准确注入胚盘下腔中。结果表明利用本方法可以获取完整胚盘各个切面,准确检验胚盘显微注射效果,为改进显微注射方法和提高转基因禽类制备效率提供新的有利途径。     

外源酶制剂评定的方法探讨

目前,外源酶制剂的评定方法主要包括酶活评定、稳定性评定、酶应用的生产性能评定、体内养分消化率评定(全收粪法和回肠末端收粪法)以及体外模拟法测定的评定。其中酶活和酶制剂的稳定性主要应用于产酶菌种筛选以及酶制剂化学性质的基础评估,酶应用生产性能的测定主要应用于大生产评估,由于其具有较强的实践性和直观性,成为广大养殖户和饲料厂验证酶制剂效果的主要手段和措施。而体内养分消化率和体外模拟法的评定由于其操作复杂、工作量大,因此仍然限制于实验室的应用研究中,但相对前三种评定方法,该两种方法具有良好的可重复性和相关性。因此文章重点从基本概念、方法分类、二者相关关系以及家禽消化道对酶制剂评定的影响方面综述了该两种方法利弊,以期为外源酶制剂评定的方法学研究提供理论基础。     

外源hDAF基因在转基因猪中的表达研究

衰变加速因子(DAF)是补体激活途径中的一个重要调节蛋白,转人DAF(hDAF)基因猪可以作为异种器官移植的供体.采用直接免疫荧光法对转hDAF基因猪耳组织冰冻切片进行了观察,并应多媒体图文分析系统测定荧光照片的平均灰度.结果表明,14头转基因猪中,有7头动脉肌肉展表达了外源hDAF基因,它可以作为外源基因在供体中表达的主要指标,用于转基因猪的检测.     

泰和鸡蛋氨酸表观消化率与真消化率的比较测定

准确测定饲料氨基酸消化率(AAD)已成为动物营养学评定饲料氨基酸生物效价的主要研究课题之一.sibbald建立的强饲法,用于测定饲料AAD的方法,由于未考虑鸡盲肠微生物对饲料氨基酸消化率的影响,可能导致低估饲料AAD.鸡盲肠是消化道微生物主要活动场所,对氨基酸有降解作用.用切除盲肠的鸡,进行氨基酸利用率的研究,更能真实反映饲料蛋氨酸(Met)的利用率.本研究的目的,是通过测定去盲肠与不去盲肠的两组试验鸡内源Met排泄量和Met排泄量及所测饲料中Met表观消化率和真消化率的差异,来探讨盲肠微生物主要是对内源Met还是外源Met起降解作用,为合理配制泰和鸡日粮提供依据.     

外源褪黑激素对昆明白鼠生长和繁殖性能的影响

研究外源褪黑激素(MT)对昆明白小鼠生长和繁殖性能的影响,为外源MT在畜牧生产上的应用提供依据。将40只昆明白小鼠(公、母各半)随机分成4组,用皮下埋植的方法埋植不同剂量(0、1、4、8mg)的外源MT,每3d称量1次小鼠的体重并记录;MT处理11周后,试验公鼠与正常母鼠交配,记录受精卵的数量;试验母鼠与正常公鼠交配,记录冲出卵的数量,14周后HE染色,制作睾丸和卵巢切片。在体重增长方面,外源MT对昆明白公鼠体重增长有促进作用,皮下埋植8mg组的促进作用显著(P<0.05);对昆明白母鼠体重增长有抑制作用,皮下埋植8mg组的抑制作用显著(P<0.05)。在繁殖性能方面,外源MT对昆明白鼠公鼠繁殖性能抑制作用显著,皮下埋植1mg和4mg组抑制作用显著(P<0.05),但皮下埋植外源MT8mg组和对照组间无统计学差异(P>0.05)。外源MT对昆明白鼠生长和繁殖性能有影响,并存在性别和剂量的依赖性。     

犬肾脏标记物研究进展

<正>肾脏损伤或肾功能评估的传统血液检查(如血清肌酐和尿素氮)和尿液检查(如尿蛋白肌酐比和尿比重)被广泛用于临床诊断。但由于目前临床诊断指标的限制性,急需探索更多反映肾小球滤过率(Glomerular Filtration Rate,GFR)和肾小球或肾小管损伤的生物标记物,特别是对肾脏疾病有早期诊断意义的标记物,以便早发现、早治疗,提高宠物生活质量。血液标记物易于采集,而肾脏尿液标记物可     

分子育种手段之转基因技术

1显微注射法转基因猪的研究中最常用的技术方法是核显微注射法。其原理是在显微镜下将外源基因注入到原核期或经重构发育至原核期的受精卵细胞的胚胎原核中,注射的外源基因与胚胎基因组融合,然后进行体外培养,最后移植到受体母畜子宫内发育,这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段,此即转基因后代。显微注射法的缺点是效率低、位置效应(外源基因插入位点随机性)造成表达结果的不稳定性、动物利用率低等。其优点是外源基因的转移率和整合效率都较高。迄今为止,核显微注射法还是最有效、最实用的动物转基因方法。2核移植转基因法…     

用减压法和卡氏法对硫氰酸红霉素水分的测定比较

前言对药品进行水分含量的测定是控制药物质量的主要指标之一,水分含量的高低直接影响着药物有效成分、保存期等,对不同药物的水分含量测定有不同的方法,在药典中,目前,最常用的方法有干燥失重法(常压、减压干燥失重)、卡氏水分滴定法和甲苯蒸馏法,它们之间各有优缺点,除此之外,在作为专门的研究中,还有更为精确的差热扫描法、热熏法、红外分光光度法等测定方法。