首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 109 毫秒
1.
猪繁殖与呼吸综合征胶体金抗体检测技术的建立和初步应用   总被引:11,自引:0,他引:11  
用胶体金标记纯化后的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程表达抗原,建立一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV抗体的胶体金免疫层析法(GICA).特异性交叉试验证明GICA检测PRRSV抗体有较高的特异性.与其他方法对比检测证实了其敏感性.生产了一批免疫胶体金试纸条,检测36份临床样本,其中30份经免疫胶体金试纸条及ELISA、免疫荧光检测均为阳性.猪繁殖与呼吸综合征免疫胶体金抗体检测技术的建立为检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体提供了一种快速简便的方法.  相似文献   

2.
为了组装胶体金免疫层析试纸条对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行快速检测,试验采用现有的猪繁殖与呼吸综合征单克隆抗体3D6与15nm胶体金结合,制备胶体金探针。结果表明:该单克隆抗体与15nm胶体金能够产生良好的特异性反应,得到的胶体金探针可在今后的试验中使用。  相似文献   

3.
《中国兽医学报》2014,(6):853-858
猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)能引起猪的繁殖障碍等疾病,是世界养猪业中的一大难题。本研究以HP-PRRSV病毒的N(核衣壳)蛋白为研究基础,原核表达N蛋白后,获得纯化蛋白,进行动物免疫,获得单克隆抗体株,优化间接ELISA和胶体金试纸条的条件。纯化后重组核衣壳蛋白的纯度大于90%;Western blot出现明显的反应条带;建立间接ELISA试验方法,且无明显交叉反应;筛选出9株针对N蛋白的抗体,特异性较好;组装的胶体金试纸条可检测最低稀释抗原质量浓度约为5mg/L。该试验为快速检测PRRSV、提高检测速率奠定一定的基础。  相似文献   

4.
为建立一种快速、简便、灵敏的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的胶体金免疫层析方法(GICA),本研究采用柠檬酸三钠还原法制备了胶体金颗粒,标记抗PRRSVN蛋白的单克隆抗体(MAb) 2D7制备免疫检测探针,将抗PRRSVN蛋白的MAb 1G7和羊抗鼠IgG抗体印迹在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,经条件优化,组装成胶体金免疫层析试纸条.本研究制备的PRRSV胶体金试纸条的最低检测限度为103.0 TCID50/mL;在特异性试验中,试纸条检测PRRSV呈阳性,其它主要猪病病原均为阴性;不同批次试纸条重复检测,结果无差异;对现地猪场送检的150份病料进行PRRSV病原检测,与RT-PCR相比较,试纸条的特异性和敏感性分别为98.13%和88.37%.两种方法的一致性Kappa值为0.882.建立的PRRSV抗原胶体金免疫层析检测方法具有良好的的敏感性、特异性、重复性及现地应用性.该试纸条的研制为PRRS的快速诊断及免疫预防提供了技术手段.  相似文献   

5.
本试验旨在建立一种快速的猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)经典株和变异株的鉴别诊断方法。根据GenBank中已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)经典株与变异株Nsp2基因序列,设计1对特异性引物,建立能鉴别诊断PRRSV经典株和变异株的RT-PCR检测方法;该方法能从经典株与高致病性株PRRSV基因组中分别扩增出549和459 bp的特异性片段;该方法对猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒的扩增结果均为阴性;该方法能分别检测出1 pg经典株和0.1 pg变异株RNA含量。建立的RT-PCR鉴别检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,可以准确、快速鉴别出PRRSV经典株与变异株,将为猪繁殖与呼吸综合征病毒的临床诊断、病料检测和分子流行病学调查等提供一种高效、快速、特异、灵敏的鉴别诊断方法。  相似文献   

6.
以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)-猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为诊断抗原和胶体金标记物,以羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带,制作检测猪伪狂犬病毒gE抗体的双抗原胶体金试纸条。利用方阵滴定试验筛选出金标抗原最佳工作浓度为17.6μg,检测线诊断抗原最佳标记量为1.76μg,血清最佳稀释度为1∶10,作用时间15 min,与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪布鲁菌(Brucella)阳性血清和PRVgE缺失疫苗接种的猪免疫血清检测线均不出现红色条带,与PRV标准阳性血清反应检测线出现红色条带。试纸条操作简单,肉眼于15 min内可判定结果;试纸条在室温保存6个月,其特异性和敏感性没有明显变化;与美国IDEXX和法国LSI gE-ELISA抗体检测诊断试剂盒检测结果比较,1 164份猪血清的符合率均为90.55%。制备的胶体金试纸条具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。  相似文献   

7.
为建立一种快速诊断鸭坦布苏病毒(DTMUV)的方法,以2株(B9D7B8G10和B9D10C7株)抗DTMUV的单克隆抗体制备DTMUV胶体金免疫层析试纸条。采用经典的柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液,利用rProtein G琼脂糖凝胶亲和层析法对两株单克隆抗体腹水进行纯化并鉴定;以纯化的B9D7B8G10株单克隆抗体作为标记抗体,通过调节单克隆抗体浓度与pH确定胶体金探针最佳结合条件;同时,在硝酸纤维素膜(NC膜)检测带包被纯化的B9D10C7株单克隆抗体,质控带包被山羊抗小鼠IgG抗体,建立检测DTMUV胶体金免疫层析试纸条;成功建立试纸条后,对试纸条敏感性、特异性、重复性和稳定性进行检测,并与RT-PCR检测方法进行比较,对200份临床疑似感染样品进行检测。结果显示:制备的胶体金试纸条在15 min内即可完成检测,最低检测稀释度为1:50,且不与鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅星状病毒、禽白血病病毒发生交叉反应;应用试纸条和RT-PCR方法分别对200份临床疑似样品进行检测,两者符合率达98%。结果表明,制备的胶体金试纸条敏感性高、特异性强、稳定性好、重复性好,为DTMUV的快速检测提供了...  相似文献   

8.
某规模化自繁自养猪场产房母猪出现流产,保育猪关节肿胀、倒地不起、大量死亡,为研究发病原因,采集流产胎儿、死亡仔猪的肺脏、脾脏、淋巴结和关节液,进行分子生物学检测,病毒和细菌分离鉴定,并检测不同胎龄母猪猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体,结果显示猪繁殖与呼吸综合征病毒检测为阳性,使用PAM分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒,经序列鉴定为高致病性毒株;抗体结果表明四胎及以上母猪猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率异常升高;病料分离的细菌经鉴定为猪链球菌,经实验室诊断确定猪场发病的原因为猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株与猪链球菌混合感染。  相似文献   

9.
为摸清贵州省某猪场猪只发病死亡的原因,采用流行病学调查、临床症状观察、病理解剖诊断、猪繁殖与呼吸综合征抗体快速金标检测卡检测和RT-PCR检测核酸确诊等方法,对该猪场发病猪进行了诊断.试验诊断结果表明:通过流行病学调查、剖检病理和猪繁殖与呼吸综合征抗体快速金标检测卡检测初步诊断该猪场发病猪疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒感染,RT-PCR检测核酸确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒野毒感染.  相似文献   

10.
犬细小病毒胶体金检测试纸条的制备与初步评价   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
为快速检测及诊断犬细小病毒及其引起的传染性疾病,应用胶体金免疫层析技术.采用柠檬酸三钠还原法制备25nm的胶体金颗粒,标记抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—F1株后包被于玻璃纤维膜作为金标垫,在硝酸纤维素膜上分别包被羊抗小鼠IgG二抗和抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—B6株作为质控线和检测线,将吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫分别粘贴于背衬板上制成犬细小病毒抗原胶体金检测试纸条。特异性试验及与血凝试验的对比结果表明,该试纸条具有良好的特异性和敏感性,与进口产品的总符合率为98%。本研究为进一步研发犬细小病毒检测试纸奠定了基础。  相似文献   

11.
半定量检测新城疫抗体胶体金试纸条的研制   总被引:2,自引:0,他引:2  
为建立半定量快速检测新城疫抗体方法,本研究利用柠檬酸钠还原氯金酸,形成胶体金颗粒,应用直径20nm的胶体金颗粒标记新城疫抗原,制作了半定量快速测定新城疫抗体的免疫胶体金试纸条。用试纸条检测60份样品,检测结果与血凝抑制试验(HI)法测得结果的符合率为93.8%,最小检测HI滴度为410g2,与其他病毒的阳性血清没有交叉反应,且室温下有效保存期为3个月。试纸条应用方便、快速,适合临床推广以及流行病学调查。  相似文献   

12.
为快速检测犬狂犬病毒IgG抗体,应用狂犬病毒G蛋白作为捕获抗原,鼠抗狂犬病毒G蛋白单克隆抗体和羊抗犬IgG分别作为胶体金标记物和诊断抗体,羊抗鼠IgG作为质控线,制备胶体金免疫层析抗体检测试纸。该试纸卡具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,与快速荧光灶抑制实验检测值对比总符合率为82.1%。研究显示,本试纸卡能够快速、准确检测犬狂犬病毒IgG抗体,可为临床诊断和宠物犬狂犬疫苗免疫效果的评价提供参考。  相似文献   

13.
For development of a rapid test strip for detecting vomitoxin (DON) residue in milk.We used DON-OVA and secondary antibody goat anti-mouse to coat nitrocellulose membrane,and used anti-DON monoclonal antibody to prepare colloidal gold labeled antibody,then lyophilized in micro-holes of reaction plate.At last we prepared a rapid test strip that could be used for detecting DON residue in milk.The results showed that the limit of detection of the test strip was 100 μg/L,and the repeatability and the specificity were preferably,so the rapid strip could be used for detecting DON residue in milk.  相似文献   

14.
牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用   总被引:10,自引:0,他引:10  
为了建立一种快速检测牛分支杆菌抗体的新方法用于诊断牛结核病,利用胶体金免疫层析技术原理,用原核诱导表达的牛分支杆菌抗原蛋白MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条.结果表明,粒径为40 nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.0,MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5 μg,MPB70抗原的最适包被浓度为3.0 mg/mL,抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5 mg/mL,交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性.比较试验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条.在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较.本试纸条与牛分支杆菌分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%.快速检测牛结核抗体的免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核病根除计划中具有良好的应用前景.  相似文献   

15.
The aim of this study was to establish a colloidal gold immunochromatographic assay for the rapid detection of Flavobacterium columnaris.Colloidal gold particles with diameter 20 nm were prepared by the sodium citrate reduction method.Purified Flavobacterium columnaris monoclonal antibodies (McAb) labelled with 20 nm colloidal gold particles to form colloidal gold combined pad.Purified polyclonal antibody (PcAb) against Flavobacterium columnaris and goat anti mice IgG were coated on the nitrocellulose membrane to be the test line (T line) and the control line (C line).Gold immunochromatographic strips which prepared to detect Flavobacterium columnaris were obtained.Its sensitivity,specificity and stability were evaluated.The results showed that sensitivity of the strip reached to 1×103 CFU.The testing time was 3.5 min.Specificity analysis showed no cross-reaction with other aquatic pathogenic bacteria such as Edwardsiella tarda,E.coli,Aeromonas hydrophila,Vibrio anguillarum,Vibrio alginolyticus,Vibrio parahaemolyticus and Vibrio harveyi.The strip showed good stability either.This study successfully established colloidal gold immunochromatographic assay of the rapid detection of Flavobacterium columnaris for the first time.The strip prepared was sensitive,specific,stable and rapid.It could be used for the detection of Flavobacterium columnaris.  相似文献   

16.
利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫快速检测试纸条。该试纸条检测O、A、Asia 1型3种血清型灭活口蹄疫病毒均为阳性,检测水疱性口炎病毒、猪水疱病病毒、蓝舌病病毒、猪蓝耳病病毒4种灭活抗原及小反刍兽疫病毒疫苗株均为阴性,试验结果与口蹄疫实时荧光定量RT-PCR方法的完全一致,表明其具有良好的特异性。敏感性试验结果是,试纸条的检测极限为1∶160稀释的样品,其敏感性相当于实时荧光定量RT-PCR方法的1/64。由于试纸条具有操作方便、检测快速等优点,因此该试纸条可以用于大量临床样品的快速检测和现场检测。  相似文献   

17.
为建立一种方便、快捷、实用的检测猪δ 冠状病毒(PDCoV)方法,本研究利用原核表达猪δ 冠状病毒N 蛋白,以纯化的N 蛋白免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤细胞技术研制2株分泌PDCoV N 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为E8、A10。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性及特异性良好,E8亚类为IgG2a,A10亚类为IgG1。以E8作为金标抗体,A10作为检测抗体,兔抗鼠作为质控线抗体,制备猪δ 冠状病毒胶体金检测试纸条,检测猪δ 冠状病毒敏感性为100TCID50,检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪δ 冠状病毒阴性对照均为阴性。本研究建立的胶体金试纸条检测方法敏感性及特异性良好。该检测方法的建立,为猪δ 冠状病毒(PDCoV)流行病学调查提供一种方法,同时为规模化养殖集团及基层兽医组织提供一种检测猪δ 冠状病毒产品。  相似文献   

18.
柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用柞蚕微孢子虫孢子液直接免疫家兔获得柞蚕微孢子虫多克隆抗体后,分别采用双抗夹心法和竞争法制作胶体金免疫层析试纸条,建立能简便、快捷、准确诊断柞蚕微粒子病的柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法。双抗夹心法和竞争法分别是将柞蚕微孢子虫多克隆抗体与25 nm和17 nm的胶体金颗粒结合并固定在金标垫上,然后均将羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素膜上作为质控点(C),但是2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的反应模式不同:前者是以柞蚕微孢子虫多克隆抗体作为检测点(T),而后者以柞蚕微孢子虫孢壁蛋白作为检测点(T)。2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的检测时间均为10 min,检测灵敏度为0.8×107个/mL,与柞蚕血淋巴无交叉反应,特异性强,操作简单,其中,以双抗夹心法制作的试纸条显色更清晰,结果更可靠,更具实用价值。  相似文献   

19.
本研究利用原核表达、纯化的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)N 蛋白免疫BALB/C小鼠,成功筛选到两株分泌CDV N 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为D3、D6。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性、特异性良好,能识别不同来源的犬瘟热病毒株,单抗亚类均为IgG1。以D3作为金标抗体,D6作为检测抗体,兔抗鼠IgG作为质控线抗体,制备犬瘟热病毒胶体金检测试纸条,检测犬瘟热病毒敏感性为1000TCID50,能有效检测区分犬瘟热病毒、犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒2型(Canine adenovirus type 2,CAV2)、狂犬病病毒(Rabies virus,RV)。综上,本研究建立的胶体金试纸条检测方法,灵敏度高、特异性强,适用于犬瘟热病毒临床快速诊断。  相似文献   

20.
To establish a rapid, simple, sensitive and adapting field application assay for water buffalo Fasciola gigantica, the monoclonal antibodies of hybridoma cell strains 7D1 and 7D4 against excretory-secretary antigen(ES Ag) of Fasciola gigantica were prepared and purified. Meanwhile, the colloidal gold particle was prepared by the sodium cirrate reduction method, then the affinity purified 7D1 monoclone antibodies was labeled with the 30 nm colloidal gold particles. The 7D4 monoclonal antibodies and the goat anti-mouse IgG antibody using as secondary antibodies were coated on the surface of nitrocellulose filter(NC) membrane as the test line (T line) and control line (C line), respectively. The immune colloidal gold test strip was developed by optimizing the experiment conditions. The test results showed the prepared strip had a detecting prescribed minimum of 0.94 μg/mL of Fasciola gigantica excretory-secretary antigen, and it had no any cross reaction with the antigens of Eurytrema pancreaticum, Paramphistome, Chlamydia, Toxoplasma gondii and Trypanosoma evansi. Using the prepared strip to investigate the 334 fresh feces from buffaloes in Guangxi and the positive rate was 38.62%. These results indicated that this strip method was simple, rapid and easy determination, good specificity, high sensitivity, and adapted field application assay for Fasciola gigantica.  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号