N+注入诱导突变乳酸菌筛选及对苜蓿青贮品质的影响

可溶性糖含量低影响乳酸菌添加剂产酸是影响苜蓿(Medicago sativa)青贮品质的重要因素之一。本研究采用N~+注入诱变的方法提高乳酸菌分解纤维素性能,以增强其在苜蓿青贮中的产酸能力。对具有良好抑菌活性及产酸能力的出发菌株植物乳杆菌ZZU A345进行N~+注入诱变,筛选出对羧甲基纤维素钠具有较好分解作用的突变菌株zw2-21和zw3-57,两株突变菌株酸化苜蓿粉的能力相较ZZU A345有显著(P0.05)提高,纤维素内切酶的活性亦高于ZZU A345,但没有显著差异(P0.05);苜蓿青贮试验结果显示,青贮65 d,添加zw2-21的处理组p H降至4.83,显著低于未添加乳酸菌的对照组(p H 5.5),也低于添加ZZU A345的处理组(p H 5.08),但没有显著差异;添加zw2-21的处理组乳酸含量达到1.22%,比添加ZZU A345的处理组提高了一倍。结果表明,N~+注入诱变技术在提高乳酸菌分解纤维素性能及苜蓿青贮高效产酸乳酸菌菌种选育方面具有潜在应用价值。     

Lactobacillus plantarum A491的筛选及其在苜蓿青贮中的应用研究

为筛选适合苜蓿青贮用乳酸菌,本研究对64株苜蓿附生乳酸菌进行多糖利用能力的考察,结果显示有5株乳酸菌能较好利用葡聚糖和木聚糖产酸,进一步的抑菌活性试验筛选出对李斯特氏菌、大肠杆菌和沙门氏菌都有较好抑菌活性的菌株A491。通过生理生化试验、16S r RNA基因序列分析及rec A基因扩增试验将筛选菌株A491鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。将菌株A491进行苜蓿青贮应用研究,青贮95 d后,与自然青贮和添加商业添加剂的处理组相比,添加菌株A491处理组的乳酸含量较高(P0.05),而p H较低(4.62)(P0.05),有害菌较少,发酵品质较好。表明菌株A491在苜蓿青贮中具有潜在的应用价值。     

上海地区苜蓿附生乳酸菌中优良菌株的筛选和鉴定

研究旨在筛选和鉴定适用于低可溶性糖含量的牧草青贮中的优良乳酸菌。将上海地区35个苜蓿样品中分离得到的67株乳酸菌进行抑菌活性检测和产酸性能的测定,分离菌株在葡萄糖浓度为0.5%的MRS液体培养基中进行发酵试验,并对发酵苜蓿粉的性能进行检测,从中筛选出优良乳酸菌。通过生理生化试验和16S r RNA序列分析对筛选优良乳酸菌进行鉴定。发现其中ZZU A95、ZZU A101、ZZU A104和ZZU A105菌株的抑菌活性较强、产酸速率较快,能于24 h内将培养基p H值降至4.0以下。筛选出的优良乳酸菌ZZU A95在低可溶性糖条件下发酵产酸性能较好,被鉴定为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)。研究表明,菌株ZZU A95在低可溶性糖含量的牧草青贮中具有潜在的应用价值。     

青贮苜蓿中抑菌活性乳酸菌的筛选及鉴定

研究旨在从苜蓿青贮材料中筛选出有高效抑菌活性的乳酸菌,并分析其抑菌机理。实验从苜蓿青贮材料中分离出104株乳酸菌通过牛津杯双层平板法筛选得到两株具有高效抑菌活性的菌株;在对其抑菌活性进行初步分析后发现,其中一株菌发挥抑菌活性的主要成分为蛋白类物质,另一株菌发挥抑菌活性的主要成分为有机酸。经过生理生化、碳源发酵及16S r DNA序列同源性分析,这两株乳酸菌分别被鉴定为Enterococcus mundtii及Lactobacillus plantarum。两株菌的抑菌活性物质在pH值范围及温度范围分别表现出广泛的耐受性,表明它们在苜蓿青贮中具有潜在的应用价值。     

乳酸菌对苜蓿青贮发酵品质和细菌菌群的影响

为探究乳酸菌作为青贮添加剂对苜蓿青贮发酵品质和细菌菌群的影响,试验选取萎焉苜蓿为原料分为三个处理组,分别为无添加剂对照组(CK组)和分别添加1×106cfu/g乳酸菌YX(LPI组)、乳酸菌ZZU A341(LPA组)。结果表明:LPI或LPA组乳酸积累量显著高于CK组(P<0.05),pH和氨态氮含量显著低于CK组(P<0.05),且pH均降至5.00以下;CK组或LPI组的优势菌属为Pediococcus属(56.40%、98.63%),LPA组为Lactobacillus属(98.88%)。综上所述,乳酸菌作为青贮添加剂可通过调控青贮环境中细菌菌群的组成或相对丰度,从而提高青贮苜蓿的发酵品质。     

不同添加剂对苜蓿青贮品质的影响

为研究乳酸菌以及乳酸菌分别与甲酸、双乙酸钠的组合对苜蓿青贮效果的影响,进行了乳酸菌及乳酸菌组合不同添加剂量处理的苜蓿青贮发酵试验。结果表明:添加乳酸菌对苜蓿青贮效果有很大的改善作用,且乳酸菌组合作用均优于其单独作用。通过灰色关联度分析可知:乳酸菌与甲酸组合的高添加水平效果最佳,中等添加水平次之,对照组的青贮效果最差。     

盐碱地苜蓿青贮品质及微生物群落的研究

为了研究河套盐碱地区苜蓿青贮过程中,发酵微生物的活动对营养物质的影响,并为盐碱地苜蓿青贮提供科学依据,试验将纤维素酶添加到盐碱地苜蓿青贮中,设置对照组(CK),采用单因素随机试验设计,并对苜蓿青贮饲料的感官指标、营养物质及微生物多样性进行比较分析。结果表明:在非盐碱地苜蓿青贮中添加纤维素酶后,其感官评价均高于其他处理组;盐碱地苜蓿青贮pH值均在4.2以下,与CK相比差异显著(P0.05),但其乳酸和乙酸含量较低;青贮60 d后,盐碱地苜蓿的蛋白和可溶性碳水化合物含量最高,与CK存在显著差异(P0.05)。从微生物群落的角度来看,未使用添加剂的盐碱地苜蓿(CK)OTU数目最多,远高于其他处理组,且在盐碱地苜蓿中含量最多的乳酸菌为乳杆菌属。说明纤维素酶的添加完好地保存盐碱地苜蓿青贮的营养成分,且在青贮发酵过程中发挥较大作用的乳酸菌为乳酸杆菌(Lactobacillus);在盐碱地苜蓿青贮的微生物中,含有为数不多的蓝细菌(Cyanobacteria);对照组中微生物群落较为复杂,其中包含有肠球菌(Enterococcus)、肠杆菌(Enterococcus)及乳酸杆菌(Lactobacillus)等。     

生物添加剂对苜蓿青贮发酵品质的影响

为探明生物添加剂对苜蓿青贮发酵品质的影响,在第二茬和第三茬各2种含水率(高、低)的苜蓿中分别添加苜蓿绿汁发酵液(AFGJ)、猫尾草绿汁发酵液(TFGJ)、乳酸菌制剂(LAB)、纤维素酶(CEL)及LAB+CEI,(MIX)制作青贮.常温下贮存50d开封,测定青贮的发酵品质.结果表明:AFGJ和TFGJ对第二茬低含水率青贮和第三茬的2种含水率青贮、LAB、CEL和MIX对2茬各2种含水率苜蓿青贮的发酵品质均有显著的添加效果;在第二茬高含水率青贮中,CEL和MIX的添加效果最显著,在第二茬低含水率青贮中,MIX的添加效果最佳;在第三茬高含水率青贮中AFGJ和TFGJ的添加效果最显著,在第三茬低含水率青贮中TFGJ、AFGJ、LAB和MIX组的品质相近,优于CEL和CON组;青贮的发酵品质,第三茬优于第二茬;同茬同添加处理的高、低含水率青贮相比,第三茬青贮中的AFGJ组及TFGJ组相近,其他组均以低含水率青贮为优.     

单一和复合乳酸菌添加水平对苜蓿青贮营养品质及蛋白组分的影响

以第1茬现蕾期刈割的紫花苜蓿(Medicago sativa)为原料(干物质含量为42.56%),结合康奈尔碳水化合物-蛋白质体系(CNCPS),研究不同浓度的单一和复合乳酸菌对苜蓿青贮品质及蛋白组分的影响。发酵40d后取样分析其青贮发酵品质和营养成分,结果表明,所有乳酸菌处理组都能显著降低苜蓿青贮饲料的氨态氮含量(P0.05),并且均未检测到丁酸;添加量为1×10~7 cfu·g~(-1)的单一乳酸菌处理组氨态氮含量最低,乳酸含量最高;除添加量为1×10~5cfu·g~(-1)的复合菌处理组外,其它乳酸菌处理组的pH均显著低于无添加剂处理组(P0.05);乳酸菌处理后粗蛋白含量无显著变化(P0.05);复合菌处理组的非蛋白氮含量显著低于无添加剂处理组(P0.05);单一和复合乳酸菌都能降低蛋白组分中的非蛋白氮(PA)含量,增加快速降解真蛋白质(PB1)和中速降解真蛋白质(PB2)含量,复合菌处理的真蛋白质(PB)含量显著高于对照的(P0.05)。综上所述,高浓度的单一植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)处理的苜蓿青贮发酵品质最好,复合菌能保护更多的真蛋白不被降解。     

5株优良抑菌活性乳酸菌对全株玉米青贮品质的影响

为了探讨具有优良抑菌活性的乳酸菌对全株玉米青贮过程不同时期营养品质的影响,进一步验证并筛选出可提高玉米秸秆青贮品质的乳酸菌接种剂,将实验室前期从甘肃各地玉米秸秆青贮饲料中分离筛选获得的5株产酸快、多,且具有抑菌活性的优良乳酸菌分别添加到全株玉米秸秆中进行青贮,共设置6个试验组,分别在青贮第3、7、15、30天测定产物的干物质(DM)、粗蛋白(CP)、可溶性碳水化合物(WSC)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和氨态氮(NH₃-N)含量及第30 天乳酸(LA)、乙酸(AA)、丙酸(PA)和丁酸(BA)含量。结果显示,发酵30 d后,5个处理组的DM、CP、ADF和LA含量显著高于对照组(P<0.05),NH₃-N和WSC含量显著低于对照组(P<0.05),B3-1组NDF显著高于对照组(P<0.05),但与其他处理组差异不显著(P>0.05),B3-1和B5-2组AA含量显著高于对照组(P<0.05),但与其他处理组差异不显著(P>0.05);各组DM、CP、WSC含量均随发酵时间延长而降低,而ADF、NDF和NH₃-N含量均随发酵时间的延长而升高;B3-1组在玉米秸秆全株青贮发酵各期的发酵品质和营养品质最优。以上结果表明5株乳酸菌均能显著改善青贮饲料发酵品质,其中植物乳杆菌B3-1的效果最好。     

苜蓿青贮优势菌种筛选及应用效果

本试验旨在筛选自然发酵苜蓿青贮的优势菌种,应用于高水分苜蓿青贮的调制,研究不同微生物及组合对高水分苜蓿青贮品质的影响。试验先调制自然发酵苜蓿,青贮30 d后,从中筛选优势菌种并进行鉴定。根据优势菌种筛选结果,组合了9组发酵菌种用于苜蓿青贮的调制,分别为:以植物乳杆菌与乳酸片球菌为发酵菌种,活菌数比例分别为1∶1、1∶2和2∶1,编号为1、2、3组;以植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和乳酸片球菌为发酵菌种,活菌数比例分别为2∶1∶1、1∶1∶1和4∶1∶1,编号为4、5、6组;以植物乳杆菌、解淀粉芽孢杆菌和乳酸片球菌为发酵菌种,活菌数比例分别为2∶1∶1、1∶1∶1和4∶1∶1,编号为7、8、9组;以不加任何菌种的自然苜蓿青贮作为对照。每组3个重复,发酵60 d后,对苜蓿青贮进行感官评定,并测定氨态氮/总氮(NH3-N/TN)、总酸含量和pH。结果表明:用MRS、LB和NA 3种培养基从自然发酵苜蓿青贮中筛选到微生物菌种31株,对其中18株进行了分子鉴定,主要菌种为植物乳杆菌9株、乳酸片球菌1株、粪肠球菌2株、各种芽孢杆菌6株。感官评分结果表明乳酸菌(植物乳杆菌和乳酸片球菌)比例大的各组评分等级显著高于对照组和添加了添加枯草芽孢杆菌的各组(P<0.05)。对于NH3-N/TN、总酸含量和pH等指标,乳酸菌比例较低的2、5、8和对照组与其余各组差异显著(P<0.05)。综上所述,植物乳杆菌和乳酸片球菌是苜蓿青贮主要菌种,用于苜蓿青贮有利于青贮品质的提高。枯草芽孢杆菌会影响苜蓿青贮的气味,解淀粉芽孢杆菌为菌种会改善苜蓿青贮风味,但比例太高会增加NH3-N含量。     

添加不同青贮菌剂对苜蓿青贮效果的影响

对所筛选的三种青贮菌剂和一种国外青贮菌荆分别添加于苜蓿青贮中,从苜蓿青贮营养成分、微生物数量、有氧稳良陛和瘤胃降解率多方面对这4种青贮菌剂进行综合评价。结果表明：自选青贮菌剂和商品青贮菌剂苜蓿青贮效果相近,各青贮菌剂添加处理的pH值、丁酸含量,酵母菌和霉菌的数量显著低于对照（p〈0．05）,提高了苜蓿青贮品质。添加三种自选青贮菌剂的苜蓿NH3／TN值显著低于对照（p〈0．05）,有效地抑制了蛋白质水解。添加自选青贮菌剂的青贮苜蓿在有氧的条件下,CO2产生量显著小于对照处理和商品青贮菌剂处理（p〈0．05）,可以提高青贮苜蓿的有氧稳定性。添加自选青筘菌剂和商品青贮菌剂对苜蓿青贮NDF、ADF含量没有显著影响,对青贮苜蓿DM和NDF的瘤胃降解率没有显著影响。     

Interactive effect of inoculant and dried jujube powder on the fermentation quality and nitrogen fraction of alfalfa silage

The interactive effect of inoculants and dried jujube powder (DJP) on the fermentation and nitrogen fraction (PA, PB1, PB2, PB3 and PC fractions) of alfalfa silage was investigated. Three of the Lactobacillus plantarum inoculants (LP1, LP2 or LP3) were used. The DJP was added at rates of 0, 3, 6, 9, 12 or 15% of the whole fresh forage. The combination of DJP and inoculants decreased the pH value and ammonia nitrogen content and increased the PC portion. As the DJP ratio increased, there was a peak in lactic acid : acetic acid ratio (12% of DJP ratio) and PB2 fraction (9% of DJP ratio) while the PA content decreased linearly. The LP1 and LP2 had the highest lactic acid content. Inoculants decreased the PB1 portion of true protein. The LP1 treated silage had the highest acetic acid content with the lowest lactic acid : acetic acid ratio and had lower PB3 and PC and higher PB2 than LP2 or LP3 treated silages. The result showed that the application of DJP or inoculants have positive effect on the fermentation, nutrition and N fraction value in the high moisture alfalfa silages, and the combination of DJP and inoculants preserves best.     

不同乳酸菌添加剂对天然牧草青贮品质的影响

以内蒙古半干旱山地草原天然混合牧草为原料,通过添加不同的乳酸菌添加剂进行青贮对比试验,探讨不同乳酸菌添加剂对天然牧草青贮饲料品质的影响,筛选适宜的乳酸菌添加剂.结果表明:5种添加剂均能不同程度地改善天然牧草青贮品质,经过感官评定,乳酸菌添加剂青贮饲料优于对照组;青贮饲料的发酵品质和营养价值综合分析表明,在提高乳酸含量,降低氨态氮含量、pH值、酸性洗涤纤维等方面表现最佳的是中农1号乳酸菌,其次是中农3号,中农2号、4号和8号添加剂青贮效果改善不明显.     

刈割期和添加剂对苜蓿青贮发酵品质和 CNCPS蛋白组分的影响

为研究刈割时期及添加剂对苜蓿(Medicago sativa)青贮品质的影响,本试验选择2个茬次,现蕾、初花、盛花3个时期刈割,并以无添加(CK)、丙酸钠(SP,0.5%)、乳酸菌(LD,106 cfu·g~(-1))3种处理进行苜蓿青贮制作,在贮存45d后取样,分析其发酵品质及营养价值。结果发现,随着收获时期的延迟,青贮苜蓿pH值呈下降的趋势;丙酸钠及乳酸菌添加剂的添加对苜蓿青贮饲料的发酵品质有显著的改善作用;随着同一茬次生育期的延长,青贮苜蓿中的粗蛋白(CP)含量显著降低(P0.05);刈割时期可显著降低苜蓿青贮饲料的pH值并明显提高乳酸含量(P0.05),对乙酸及丙酸含量影响不显著(P0.05)。而添加剂可显著增加乙酸含量(P0.05),两者存在显著互作效应(P0.05)。添加乳酸菌的现蕾期苜蓿青贮品质最佳。应用康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系(CNCPS)提出的方法测定表明,第1茬盛花期的苜蓿青贮饲料的非蛋白氮(PA)含量较高,苜蓿青贮饲料各处理中的中速降解蛋白质(PB2)含量均是占可降解蛋白质(PB)含量的最大比例。     

单宁酸和乳酸菌对紫花苜蓿青贮品质和体外瘤胃发酵的影响

为评价单宁酸和乳酸菌单独以及组合添加对紫花苜蓿（Medicago sativa L.）青贮品质和体外瘤胃发酵的影响,本试验以晾晒至含水量约为55%的初花期紫花苜蓿为青贮原料,设无添加剂为对照组（CK）,单宁酸（Tannic acid,TC）、乳酸菌（Lactic acid bacteria,L）和单宁酸+乳酸菌（Tannic acid+Lactic acid bacteria,TL）为添加剂处理组。青贮60 d后开袋取样,测定相关指标。结果表明：添加剂处理组均显著降低了青贮饲料的pH值、乙酸和非蛋白氮含量（P<0.05）,干物质和真蛋白含量显著增加（P<0.05）;添加剂处理组均能促进瘤胃丙酸生成,提高微生物蛋白产量（P<0.05）;与TC处理组相比,TL处理组能够减轻TC处理组对青贮饲料干物质降解的抑制作用。综上,单宁酸和乳酸菌组合添加对紫花苜蓿青贮饲料品质的调控作用效果最好。     

植物乳酸菌和贮藏温度对辣木叶青贮品质的影响

从辣木叶青贮中筛选分离出4个乳酸菌菌株,鉴定后分别为Lactobacillus plantarum（LP）,Lactobacillus farciminis（LF）,Weissella thailandensis（W）和Lactococcus lactis（E）。试验旨在探究不同温度下添加植物乳酸菌对辣木叶青贮的青贮品质、营养成分和单宁含量的影响。采用双因素（温度×植物乳酸菌）完全随机设计,两个温度组为15和30 ℃,乳酸菌处理组为CK,LP, LF, W和E。在青贮第60天时开袋取样进行测定。结果表明,辣木叶原料粗蛋白质含量为25.31%,可溶性碳水化合物含量为7.53%,添加乳酸菌可以显著降低pH,增加乳酸和乙酸含量,同时使乳酸菌数量和氨态氮含量显著降低（P<0.05）。贮藏温度在15 ℃时,乳酸菌数量,真蛋白含量显著高于30 ℃（P<0.05）。同时,非蛋白氮、氨态氮和游离氨基酸含量在15 ℃的贮藏温度时都显著低于30 ℃（P<0.05）。青贮后,各处理组的单宁含量都有下降,但无显著差异（P>0.05）。辣木叶蛋白质丰富,易于调制青贮饲料,较低的贮藏温度和添加植物乳酸菌对辣木叶青贮品质有明显的改善作用,但对降解单宁含量并未产生显著影响。     

Effects of different source additives and wilt conditions on the pH value,aerobic stability,and carbohydrate and protein fractions of alfalfa silage

To improve the silage quality and reduce the silage additive cost, the present experiment was designed to evaluate the potential of applying the fermented juice of epiphytic lactic acid bacteria (FJLB) as an additive in alfalfa silage. The effects of FJLB on the fermentation quality, carbohydrate and protein fractions, and aerobic stability of alfalfa silage wilted under five different conditions were investigated and compared with commercial lactic acid bacteria (CLAB) and the control. The FJLB application decreased the pH value, the volatile fatty acids and non‐protein nitrogen content, and the loss of sugar by 9.9%, 22.9%, 19.6% and 9.6%, respectively; it increased the lactic acid concentration by 29.5% and the aerobic stability by 17 h in comparison to the control. The FJLB application also decreased the pH value (4.44 vs. 4.66) and volatile fatty acid content (38.32 vs. 44.82) and increased the lactic acid concentration (68.99 vs. 63.29) in comparison to the CLAB‐treated silage. However, the FJLB treatment had lower aerobic stability (254 h vs. 274 h) than the CLAB treatment. The FJLB application improved silage quality in comparison to the control; in addition, its effect as a fermentation stimulant may be comparable to or even better than CLAB.