兔出血症病毒结构蛋白及其降解产物的分析

采用弗里昂１１３抽提结合蔗糖梯度密度离心法从人工感染兔出血症（ＲＨＤ）病兔肚脏组织中纯化ＲＨＤ病毒，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，ＲＨＤＶ由一种结构蛋白构成，分子量为６０ＫＤ，称为ＶＰ６０。应用抗ＲＨＤＶ单克隆抗体进行免疫印迹试验表明，ＶＰ６０可发生蛋白降解，其产物有３８ＫＤ、２８ＫＤ和２６ＫＤ几种多肽成分．     

兔出血症病毒结构蛋白及其降解产物的分析

采用弗里昂１１３抽提结合庶糖梯度密度离心法从人工感染兔出血症病兔肚脏组织中纯化ＲＨＤ病毒，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，ＲＨＤＶ由一种结构蛋白构成，分子量为６０ＫＤ，称为ＶＰ６０。应用抗ＲＨＤＶ单克隆抗体进行免疫印迹试验表明，ＶＰ６０可发生蛋白降解，其产物有３８ＫＤ、２８ＫＤ和２６ＫＤ几种多肽成分。     

不同型魏氏梭菌菌体蛋白和膜蛋白SDS-PAGE电泳图谱分析

运用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ技术分别对Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ四个型魏氏梭菌的菌体蛋白和细菌膜蛋白进行分析。结果在菌体蛋白图谱中Ａ型缺少５４．９ＫＤ蛋白条带，Ｃ型缺少１０７．８ＫＤ和３６．１ＫＤ蛋白条带，Ｄ型缺少１０７．８ＫＤ和６６．６ＫＤ蛋白条带。在膜蛋白图谱中仅Ｂ型有９４．７ＫＤ蛋白条带但缺少５１ＫＤ蛋白条带，Ｃ型缺少７４．２ＫＤ蛋白条带，Ｄ型缺少３１ＫＤ蛋白条带，但比其它３个型多１个２４．３ＫＤ蛋白条带，且３     

酶标SPA在鸭病毒性肝炎免疫检测上的应用研究

在酶标ＳＰＡ（金色葡萄球菌Ａ蛋白）的Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ Ｉｍｍｕｎｏａｓａｙ（免疫斑点试验）中，ＳＰＡ能与鸭血清中ＩｇＧ分子Ｆｃ段结合。这一点，在国内外尚未见报道。用酶标ＳＰＡ的Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ ＥＬＩＳＡ及鸡胚中和试验，分别对ＤＨＶ（鸭肝炎病毒）Ａ毒株、及已知的Ｉ型ＤＨＶＲ毒株，进行交叉试验的结果一致。该试验以及病毒粒子的电镜观察，进一步表明，我们培育的优     

酶标SPA在鸭病毒性肝炎免疫检测上的应用研究

在酶标ＳＰＡ（金色葡萄球菌Ａ蛋白）的ＤｏｔＢｌｏｔＩｍｍｕｎｏａｓａｙ（免疫斑点试验）中,ＳＰＡ能与鸭血清中ＩｇＧ分子Ｆｃ段结合。这一点,在国内外尚未见报道。用酶标ＳＰＡ的ＤｏｔＢｌｏｔＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、ＤｏｔＢｌｏｔＥＬＩＳＡ及鸡胚中和试验,分别对ＤＨＶ（鸭肝炎病毒）Ａ毒株、及已知的Ｉ型ＤＨＶＲ毒株,进行交叉试验的结果一致。该试验以及病毒粒子的电镜观察,进一步表明,我们培育的优良鸭肝炎弱毒株Ａ６６确系Ｉ型ＤＨＶ。     

夹心ELISA和斑点杂交试验检测鸭血清中鸭乙型肝炎病毒的比较

用单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ和斑点杂交试验分别对４６例鸭血清样品中的鸭乙型肝炎病毒表面抗原（ＤＨＢｓＡｇ）和鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ进行平行检测，并根据夹心ＥＬＩＳＡ测定的Ｐ／Ｎ值和斑点杂交试验的反应斑点进行薄层扫描所测定的峰面积值，比较了１９例带毒鸭血清中ＤＨＢｓＡｇ和ＤＨＢＶＤＮＡ的相对含量。结果表明，两种试验的结果判定具有高度一致性。ＤＨＢｓＡｇ与ＤＨＢＶＤＮＡ在带毒鸭血清中呈并存关系，但其含量相关不显著（Ｐ＞０．０５）。     

新城疫病毒外膜蛋白脂质体疫苗的实验研究

本研究以冷冻干燥法制得新城疫病毒（ＮＤＶ）外膜蛋白脂质体疫苗，两次免疫后ＳＰＦ鸡的血清ＨＩ抗体效价结果显示：ＮＤＶ外膜蛋白脂质体疫苗免疫组的算术滴度要高于仅以ＮＤＶ外膜蛋白免疫组，二者间具有是生差异，且前者以ＮＤＶ强毒株攻击后的保护率也１００％，也优于单纯以ＮＤＶ外膜蛋白免疫组。     

细粒棘球蚴原头蚴可溶性蛋白质的SDS—PAGE及其Western印迹分析

本文利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹对细粒棘球蚴原头蚴可溶性蛋白进行了分析,结果其ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示其共有２９条蛋白多肽,主要成分为２３．３５,４２,５７,６９和９５ＫＤ。与羊阳性血清及犬阳性血清显色的条带分别为１９条及１２条,作用较强的条带分别为羊：３５,４０,４３,５７,６９和９５ＫＤ,犬：３２,３８,４０。,５７和８８ＫＤ。     

重庆地区鸭传染性浆膜炎病原分离鉴定

从重庆地区１９９９年自然发病鸭中分离的３８株鸭疫里氏杆菌属于２个不同血清型，人工感染１４日龄雏鸭均在１２０小时内致死全部试验鸭，并出现典型鸭传染性浆膜炎病理变化。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明分离菌株血清型不同，外膜蛋白存在差异。     

禽白血病／肉瘤病毒群特异性抗原P_（27）~（gag）的分离和纯化

本试验用差束离心和非线性蔗糖密度梯度离心法从感染雏鸡血浆中分离和提纯了禽成髓细胞性白血病病毒（ＡＭＶ）。并以ＳＤＳ法裂解病毒，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＡＭＶ结构蛋白成分，最后选用（ＬＫＢ）水平板式电泳系统，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ比较大量地分离提纯了Ｐｇａｇ２７。用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和琼脂扩散试验检验其抗原活性，并且用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量和纯度。结果表明，提纯的病毒蛋白具有抗原活性，且达到电泳纯。     

禽大肠杆菌病免疫保护机理的研究

以禽病原性大肠杆菌O18、O78分离株制成超声波裂解铝佐剂灭活苗免疫14日龄鸡，以相同或不同外膜蛋白型（Outer membrane protein pattern,OMP型）的O18、O78分离株攻毒。结果表明：O78血清相同和不同OMP型分离株间能获得最大保护；O18血清型相同OMP型分离株间获得最大保护，而不同OMP型分离株间不能保护；上述两个血清型的分离株间不论OMP型是否相同，均缺乏保护。以间接ELISA试验、间接血凝试验分别测定了试验鸡临攻毒前针对大肠杆菌OMPs和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS）的抗体。结果表明：免疫组鸡血清上述两种抗体明显高于攻毒对照组；在免疫组，存活鸡临攻毒前血清中上述两种抗体滴度恒高于死亡鸡，但除3个组外，多数组差异不显著。攻毒对照组这一关系不稳定。结果说明：禽大肠杆菌疫苗的免疫保护，主要与O血清型有关，部分与OMP型有关，如O18分离株，免疫保护性抗原含OMPs,LPS等多个抗原表位。     

鸭病毒性脑炎（暂定）病原分离与鉴定的初步研究

从以腹泻和腿麻痹为主要症状的康贝尔鸭肝、脾中分离到1株病毒。该病毒能适应于鸡胚、鸭胚，胚接种后不死亡，但有出血点。小鸭人工感染病毒后出现与自然病例相似的症状，并能回收到病毒。电镜观察病毒主要呈球形，有囊膜，大小约为30nm；病毒有3种结构蛋白，VP1（17KD）、VP2（41KD）和VP3（50KD），其中VP3为主要结构蛋白，病毒核酸为单链RNA。     

Identification of immunogenic, surface-exposed outer membrane proteins of Pasteurella haemolytica serotype 1

Pasteurella haemolytica serotype 1 (S1) is the bacterium most frequently recovered from the lungs of cattle that have succumbed to shipping fever pneumonia. P. haemolytica outer membrane proteins (OMPs) are important immunogens in the development of resistance to pneumonic pasteurellosis. The purpose of this study was to identify the repertoire of immunogenic, surface-exposed P. haemolytica (S1) OMPs, that could be important in the development of protective immunity. We determined surface exposure of OMPs by (1) their susceptibility to protease treatment and (2) their ability to adsorb out antibodies from bovine immune sera. For a comprehensive identification of immunogenic, surface-exposed OMPs, we used bovine antisera from calves that were resistant to experimental P. haemolytica challenge after (1) natural exposure to P. haemolytica, (2) vaccination with live P. haemolytica, or (3) vaccination with P. haemolytica OMPs. We identified 21 immunogenic, surface-exposed P. haemolytica OMPs. Most were recognized by all three immune sera. However, some were recognized by one or two of the three antisera. Our analyses identified surface-exposed, immunogenic proteins that were not identified in previous studies.     

10日龄肉鸭混合感染新型鸭肝炎病毒和多杀性巴氏杆菌的病原学研究

对1例疑似鸭肝炎病毒和多杀性巴氏杆菌混合感染的10日龄肉鸭采用常规的病毒、细菌鉴定方法和RT-PCR、PCR方法分别进行病毒、细菌的分离与鉴定。病毒鉴定为新型鸭肝炎病毒,细菌鉴定为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌多杀亚种。细菌对SPF鸡的毒力试验结果显示,分离的巴氏杆菌与强毒标准株C48-1毒力相近,为强毒株。细菌对10日龄肉鸭的致病性回归试验结果表明,一定数量的该株巴氏杆菌可导致10日龄雏鸭的感染死亡。结果表明,该批肉鸭为新型鸭肝炎病毒和A型多杀性巴氏杆菌混合感染。这是国内首例从感染鸭肝炎病毒10日龄雏鸭肝脏中分离到多杀性巴氏杆菌。     

鸭疫里默氏杆菌血清7型的病原特性

1994年1月～2000年10月,从全国23个省(市、自治区)不同代次(原种、祖代、父母代和商品代)的5～90日龄患有典型鸭传染性浆膜炎的病死鸭分离到87株血清7型的鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA).对其病原学特性研究的结果表明,血清7型RA在我国鸭群感染分布的范围极广,分离菌株对雏鸭具有很强的致病性,对小鼠无致病性,各地分离菌株表现出一致的形态特征和非常相似的生化特性;各地分离菌株耐药谱很广,但对头孢类药物(如头孢拉啶、头孢克洛等)和利福平却普遍高度敏感.用分离菌株制备的灭活疫苗免疫雏鸭具有良好的免疫原性.     

雏半番鸭呼肠孤病毒的致病性

从鸭体、禽胚和细胞 3个方面探讨了雏半番鸭呼肠孤病毒 FZ2 株的致病性。经试验表明 ,在实验室条件下 ,该株病毒可导致雏番鸭、雏半番鸭发病、死亡 ,对雏番鸭的致死率为 14 .3%～ 4 1.7% ,对雏半番鸭的致死率高达 38.5 % ,且死亡鸭表现出与自然感染呼肠孤病毒病死的雏番鸭、雏半番鸭相同的病变 ;人工感染幸存鸭大多生长发育明显受阻。该株病毒经尿囊腔途径接种 ,对番鸭胚、半番鸭胚、北京鸭胚、SPF鸡胚的致死率分别为 10 0 %、96 %、2 8%和 0 ,致死鸭胚的肝脏、脾脏表面见白色坏死点。经蛋传试验表明 ,该株病毒有可能经胚蛋垂直传染。以该株病毒在番鸭胚成纤维细胞 (MDEF)上连续传接 10代 ,结果细胞病变 (CPE)仍不明显 ,表明其不易适应 MDEF。由此可见 ,该株雏半番鸭源呼肠孤病毒具有较强的致病力     

Immunoelectrophoresis of duck sera and immunoglobulins

Duck whole sera (DWS) and immunoglobulins (DIg) were studied in immunoelectrophoresis (IE) and immunodiffusion (ID) tests by rabbit (R) anti-DWS and R anti-DIg sera, as well as by R antisera monospecific for DIgM and DIgG classes. Immunoelectrophoresis of adult DWS against R anti-DWS illustrated the presence of DIgM and two subclasses of DIgG. These observations were verified by the use of monospecific R anti-DIgM and R anti-DIgG sera. It appeared that DIgM is an electrophoretically heterogeneous protein with components that migrate more slowly than IgM of other species. The cathodal tip of the DIgM extended into the gamma2 migration zone almost as far as the DigG arc. Changes in the IE pattern of DWS from 1-to-14-day-old ducklings were observed that reflected a reduction in DIgG content from the age of 1 to 7 days followed by a gradual change toward the IE appearance of adult sera. Immunoelectrophoresis and ID failed to detect DIgM in sera of newly hatched ducklings. This class of DIg appeared in sera of 7-day-old duckling and seemed to be more concentrated in sera of 14-day-old ducklings.     

Isolation and characterization of a reovirus causing spleen necrosis in Pekin ducklings

High rates of mortality for Pekin ducklings have been recorded in several duck farms in China since 2006. Dead ducklings were characterized by spleen necrosis, suggesting microbial infection as a cause of disease. Laboratory investigations led to the isolation of a virus strain from the spleen tissues of dead ducklings, designated DRV-HC. Subsequent experimental infections with DRV-HC resulted in marked spleen necrosis in the ducklings similar to those observed in the natural outbreaks. Electron microscopy of the cultured DRV-HC revealed viral particles that were non-enveloped and icosahedral with a mean diameter of approximately 72 nm. Agar gel precipitating tests showed that the isolate shared a common group-specific antigen with chicken reovirus S1133. DNA sequencing revealed that this isolate was closely related to Muscovy duck reoviruses. Experimental infection with DRV-HC resulted in death of young chicks with necrotic foci in the liver and spleen. To the best of our knowledge, this is the first report of the isolation of a duck reovirus with high virulence in Pekin ducklings and SPF chickens.     

中华硬蜱唾液腺抗原成分的分析研究

中华硬蜱唾液腺提取物（ＳＧＥ）经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出２４条蛋白带，其中主带有６条，分子量分别为１４２、１０５、９４、６６、６４和５６ＫＤ。用中华硬蜱叮刺家兔后血清做免疫印渍，特异性抗原带为１０５和９４ＫＤ。说明中华硬蜱１０５和９４ＫＤ的蜱唾液腺蛋白原能够有效地诱慢宿主产生抗体。     

血清2型鸭疫里默氏杆菌制苗用菌株的筛选及灭活油乳剂疫苗的研制

血清2型鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)分离株经雏鸭体内复壮、回收、鉴定后,选取其中2株细菌NJ3和Yb2进行毒力测定,结果表明其半数致死量分别为5.62×107CFU和1.07×105CFU。选取5株细菌制备灭活油乳剂疫苗后免疫鸭,并进行攻毒保护试验。结果表明不同菌株制备的疫苗均可使免疫鸭产生高水平的RA特异性ELISA抗体和攻毒保护力,但是攻毒保护性差异较大,NJ3免疫后的攻毒保护性最好。抗体检测及攻毒保护实验表明NJ-3是较理想的制苗用菌株。