禽白血病病毒分离鉴定

使用 SPF鸡胚成纤维细胞从蛋用种鸡的病料中分离到一株病毒.经禽白血病病毒（ALV） p-27抗原ELISA检测、病毒培养、反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）鉴定、群特异性抗血清中和试验和动物回归试验等证明,该株病毒属于禽白血病病毒.     

禽白血病病毒实验室检测方法研究进展

禽白血病是危害我国养禽业最严重的疾病之一。禽白血病病毒的检测在禽白血病的净化中起着决定性作用。本文就近年来禽白血病病毒实验室检测方法的最新研究进展进行了综述,介绍和比较了各种检测方法的优缺点和实用性,以便为临床兽医科技工作者建立快速、简便、准确、实用的检测方法提供参考。     

禽白血病病毒研究进展

禽白血病是由禽白血病病毒 ( avian lekosis virus,ALV)引起的以造血细胞恶性增生为主的一类传染病 ,包括淋巴细胞性白血病 ,成红细胞性白血病 ,成髓细胞白血病和髓细胞样白血病 ,对养禽业危害最大的是禽淋巴细胞性白血病 ( lymphoid leukosis,LL)。自 1 90 8年首次报道并分离到 ALV以来 ,世界上许多国家都有该病的流行和发生 ,其垂直和水平传播引起临床和亚临床感染而造成较大的经济损失 [1 ,2 ]。近年来 ,随着分子生物学技术的广泛应用 ,在该病毒的囊膜基因、病毒受体、致病机理、内源性白血病病毒和培育 ALV抗性鸡等方面取得了不少…     

J亚型禽白血病病毒的分离与鉴定

本研究分别从广西的地方肉鸡及河北、辽宁的蛋鸡中分离到了3株禽白血病病毒.剖检疑似发病鸡只.采集病变的肝脏、脾脏组织,经过RT-PCR检测确定为ALV感染.将病变组织接种CEF细胞,连续传代2次,将细胞上清接种DF-1细胞,p27抗原检测为阳性.同时提取病毒基因组,用H5/ADI和H5/H7两对特异性引物进行PCR扩增,结果3株为ALV-J亚型.进一步设计ALV-J亚型gp85特异性引物进行PCR扩增并测序.结果确认分离到的3株病毒为ALV-J亚型.其gp85序列与标准毒株HPRS-103同源性为96%.同时,用p27单抗进行间接免疫荧光试验,测定毒力.综上所述,我们从广西地方肉鸡巾分离到1株J亚型禽白血病病毒,从河北及辽宁的蛋鸡中分离到2株J亚型禽白血病病毒.     

J亚型禽白血病病毒的拯救与鉴定

为鉴定含J亚群禽白血病病毒(ALV-J)全长cDNA分子克隆(pBlALV)的感染性,首先将pBlALV转染CEF细胞,拯救出病毒(rALV),然后连续传代3次,对拯救病毒进行增殖培养.分别利用RT-PCR、western blot、IFA等方法,对拯救病毒进行鉴定,并应用实时荧光定量PCR方法对拯救病毒的复制动力学进行了测定.研究结果证明,本研究成功拯救出了具有感染性的rALV-J,为研究禽白血病的致病机理和探讨新的防制措施等提供了良好的ALV的反向遗传操作技术平台.     

龙胜凤鸡禽白血病病毒的分离与鉴定

在前期流行病学调查的基础上,无菌采集ELISA检测中p27抗原阳性鸡的抗凝血,分离血浆,接种DF-1细胞,盲传两代后,检测细胞培养上清液中的p27抗原。对阳性样本进行病毒的分离,并对毒株进行初步亚群鉴别,然后采用PCR法扩增其env基因并测序,对分离到的毒株进行同源性分析并绘制系统进化树。结果显示,凤鸡分离株GX-F3与2株ALV-B参考株的gp85基因编码的氨基酸序列同源性最高,分别为92.2%和92.8%,且它们处在系统进化树的同一分支上,因此,该研究分离到的GX-F3属于ALV-B亚群。     

禽白血病病毒斑点杂交检测方法的建立

为建立禽白血病病毒(ALV)斑点杂交检测方法,本研究采用RT-PCR技术扩增ALV群特异性p27抗原基因的部分片段,并以纯化的p27PCR产物为模板,合成地高辛标记探针,以此建立了ALV的斑点杂交检测方法。用该方法对4份疑似感染ALV的现地病鸡组织样品和18枚鸡胚进行检测,结果表明所有样品均为阳性,而且与PCR检测结果的符合率达到100%。该方法具有良好的特异性和敏感性,适应于ALV临床大规模检测。     

禽白血病病毒与免疫抑制

禽白血病是由禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus, ALV)引起的以造血细胞恶性增生为主的一类传染病,包括淋巴细胞性白血病,成红细胞性白血病,成髓细胞性白血病和骨髓细胞瘤病.1988年,Payne等从肉仔鸡中分离出一种新型的禽白血病病毒亚群即J亚群(ALV-J),1997-1998年间,禽白血病J亚群世界范围内的流行,给世界养禽业带来了巨大的经济损失.鸡群感染ALV-J后造成广泛的免疫抑制,从而继发其它病毒和细菌的感染,给生产带来巨大的损失.因此,在未来数年内,研究和控制禽白血病免疫抑制问题可能成为家禽业的主要任务之一.本文就白血病的病原及其产生免疫抑制的危害进行了概述,并且从基因水平上分析了ALV-J引起免疫抑制的主要机理.     

K亚群禽白血病病毒细胞受体的鉴定

禽白血病病毒(ALV)进入细胞启动感染依赖于其囊膜表面蛋白gp85与细胞受体的结合。K亚群ALV(ALV-K)是2012年从我国本地芦花鸡中分离到的一个ALV新亚群。为了鉴定ALV-K的细胞受体,本研究利用真核细胞表达了A和K亚群ALV gp85蛋白,并利用实验室前期拯救的重组病毒RCAS-A-GFP和RCAS-K-GFP进行病毒受体的交叉干扰试验,结果显示A亚群ALV(ALV-A)gp85蛋白能够抑制ALV-K的感染,同样ALV-Kgp85蛋白也能够抑制ALV-A的感染,存在受体交叉干扰现象,因而推测二者可能共用细胞受体。已有研究表明Tva是ALV-A的细胞受体,本研究利用Co-IP和Pull-down试验检测了ALV-Kgp85与Tva的互作,结果显示ALV-Kgp85蛋白能与可溶性的Tva(sTva)相互作用。进一步的流式细胞术结果显示ALV-Kgp85能够高效结合Tva,结合率在90%以上。为进一步验证Tva是否能介导ALV-K进入细胞,利用ALV的非易感细胞HEK293T进行了Tva受体重建试验,结果显示RCAS-K-GFP能够进入表达Tva的293T细胞并复制产生较强的绿色荧光。以上结果充分表明Tva也是ALV-K的细胞受体,能够介导ALV-K进入宿主细胞,启动其感染。该研究为阐明ALV-K侵入宿主细胞机制及抗病毒靶点筛选奠定了基础。     

禽白血病病毒与免疫抑制

禽白血病是由禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)引起的以造血细胞恶性增生为主的一类传染病,包括淋巴细胞性白血病,成红细胞性白血病,成髓细胞性白血病和骨髓细胞瘤病。1988年,Payne等从肉仔鸡中分离出一种新型的禽白血病病毒亚群即J亚群(ALV-J),1997-1998年间,禽白血病J亚群世界范围内的流行,给世界养禽业带来了巨大的经济损失。鸡群感染ALV-J后可造成广泛的免疫抑制,从而继发其它病毒和细菌的感染,给生产带来巨大的损失。因此,在未来数年内,研究和控制禽白血病免疫抑制问题可能成为家禽业的主要任务之一。本文就白血病的病原及其产生免疫抑制的危害进行了概述,并且从基因水平上分析了ALV-J引起免疫抑制的主要机理。     

禽白血病病毒受体研究进展

禽白血病病毒相关受体的研究是解析白血病病毒感染机制的重要基础,也为禽白血病的防控与遗传育种提供了新的切入点。本文对近年来禽白血病病毒受体的相关研究进行回顾,概述不同亚群病毒受体的结构与其相关功能,分析受体介导病毒感染的分子机制,为进一步深入研究禽白血病病毒的感染和致瘤机制提供参考。     

禽B型白血病病毒的分离及分子分型鉴定

从送检的骨石症蛋用种鸡中分离出一株禽白血病病毒(ALV)。剖检骨石症发病鸡,采集病变的肝脏、脾脏组织,提取病毒基因组,并利用针对ALV群特异性抗原P27基因设计的引物进行PCR快速检测确定为ALV感染。将病变组织接种SPF鸡胚绒毛尿囊膜,连续传代3次。进一步针对亚群间特异性抗原gp85区设计一对引物进行PCR扩增并酶切分析。结果确认分离到的1株病毒为ALV-B亚型。     

禽白血病病毒群特异性抗原单克隆抗体的制备与鉴定

为制备禽白血病病毒(ALV)群特异性抗原的单克隆抗体(MAb),本研究从ALV-J病毒株感染DF-1细胞的冻融裂解液中提取DNA,通过PCR方法扩增出ALV群特异性抗原p27基因,并将其克隆至pMD18-T载体中,酶切鉴定后进行序列测定和分析。最后将p27基因亚克隆至载体pET-30a(+)中,转化受体菌BL21,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE检测获得融合蛋白。经过western blot检测,表达的蛋白具有良好的反应原性。将纯化的p27蛋白作为抗原,免疫7周龄BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得5株能稳定分泌特异性MAb的杂交瘤细胞株。5株MAb与纯化的p27蛋白以及不同亚群ALV可以发生特异性反应。所制备的MAb为禽白血病的诊断方法研究奠定了基础。     

禽淋巴细胞性白血病的诊断与病毒亚群鉴定

采用病理组织学方法对某商品蛋鸡场送检的发病鸡进行实验室诊断,在肿胀的肝、脾、肾和法氏囊组织切片中观察到成淋巴细胞增生病变。使用禽白血病A、B亚群抗体检测试剂盒对血清样本进行间接ELISA试验,抗体阳性率达到44.4%(12/27)。采集12只病死鸡的肝脏材料提取DNA样本,11份样本中扩增出ALV-A亚群特异性的病原核酸(691bp),检出率达到91.6%(11/12)。将扩增的目的基因克隆与测序,截取gp85基因片段可变区序列与ALV-A、B、C、D和E亚群参考毒株的相应序列进行比较,同源性分别达到89.0-89.6%、67.1-67.7%、69.1-70.1%、69.1-69.5%和70.9-72.0%。结果证实本次疫病是由ALV-A亚群病毒引起的淋巴细胞性白血病。     

血管瘤禽白血病病毒FJ0610株的分离与鉴定

为了解禽白血病病毒在商品蛋鸡中的流行情况,试验采用病理剖检、聚合酶链式反应(PCR)以及间接免疫荧光试验(IFA)等方法对送检的疑似禽白血病病毒感染的商品蛋鸡进行了病毒分离与鉴定,并对分离株的致瘤相关基因gp85基因进行测序,与国内外各亚群禽白血病病毒进行对比。结果表明:分离、鉴定到1株J亚群血管瘤禽白血病病毒,命名为FJ0610;分离株gp85基因核苷酸序列同源性在11.5%～94.5%之间,其中与血管瘤禽白血病毒株ZH-08株同源性最高,而与E亚群毒株同源性最低;基于gp85核苷酸序列的系统进化分析表明FJ0610株的gp85序列与ZH-08株的亲缘关系最近。     

禽白血病病毒重庆株的分离鉴定及毒性分析

为了对重庆地区一疑似禽白血病病毒感染病例进行病原的鉴定及其毒性的分析,试验对鸡病变组织进行总RNA提取,利用RT-PCR技术扩增禽白血病病毒特异性序列,并用病变组织研磨液接种10日龄SPF肉鸡,观察肉鸡的发病情况和病理组织学变化。结果表明:PCR产物在约2 200 bp的位置出现特异性条带,通过NCBI进行BLAST比对发现,其与禽白血病病毒的同源性高达99%,且在系统进化发育树中也与其聚为一簇;毒性试验发现,接毒肉鸡的肝脏、法氏囊、胸腺和脾脏等多个器官出现了不同程度的病理变化。说明引起鸡患病的病原为禽白血病病毒,可引起鸡的多个脏器发生病变。     

禽白血病病毒J亚群

禽骨髓型白血病（ＭＬ）由禽白血病病毒Ｊ亚群（ＡＬＶ—Ｊ）引起,是近年来国际兽医界广为报道的一种新的禽病,目前业已侵袭世界上一些品种的原种鸡群,使这些育种公司遭遇到前所未有的经济损失及商业打击。而美国爱拔益加育种公司各品系的原种鸡群皆为当今世界上净化最好的鸡群,绝对没有ＡＬＶ—Ｊ的污染,这一事实已为广大国际家禽业共同认可。即便如此,我们仍愿向国内同仁介绍这种疾病,旨在让大家对此病毒有一定的了解。———译者反转录病毒是一大类ＲＮＡ病毒,其之所以被命名为“反转录”是因为携带反转录酶（由ＲＮＡ指示的ＤＮ…     

禽白血病病毒-受体作用

反转录病毒复制的第一步就是病毒膜蛋白和特异性靶细胞的表面受体接合。这一步是为后来的膜融合和病毒核酸注入胞浆开始复制的必需先决条件。反转录病毒的膜蛋白是三聚体,单体是由前膜蛋白水解而得到的表面亚单位和穿膜亚单位构成。表面亚单位在所有的反转录病毒中都包含有病毒-受体决定簇,穿膜亚单位包含有与病毒细胞膜融合的2个重要疏水区:1个位于C端,另1个位于N端构成“融合肽”。不同反转录病毒的膜蛋白具有相似的特征,意味着可能存在相似的病毒进入细胞的模式,但是比较所有已知病毒受体,并未发现明显相似之处。比如,HIV-1的CD4受体…